細胞生物基本方法：上皮細胞培養
上皮細胞培養1）表皮細胞培養1．取材：取外科植皮或手術殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產流產兒皮膚更好，切成0.5～1平方厘米小塊。2．EDTA處理：先置入0.02％EDTA中室溫置5分鐘。3．冷消化：換入0.25％胰蛋白酶中，置4℃過夜。4．分離：取出皮膚，用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開。5．溫消化：取出表皮單獨處理，用剪刀剪成更小的塊后，置入新的0.25％胰蛋白酶中，37℃再消化30～60分鐘。6．用吸管輕輕反復吹打，使成細胞懸液。7．培養液：通過80目不銹鋼紗網濾過后，低速離心，吸上清，直接加入Eagle液和20％小牛血清，制成細胞懸液，接種入碟皿中，CO2溫箱培養。 2） 乳腺組織培養直接培養法：（適于培養含纖維少的軟組織）1．在含有少量培養液或Hanks液的容器中，用鋒利刀片將組織反復切割成碎塊。2．把組織碎塊連同液體注入離心管中，再補加少許培養液，用吸管吹打片刻，置試管架3～5分鐘......閱讀全文
細胞生物基本方法：上皮細胞培養
上皮細胞培養1）表皮細胞培養1．取材：取外科植皮或手術殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產流產兒皮膚更好，切成0.5～1平方厘米小塊。2．EDTA處理：先置入0.02％EDTA中室溫置5分鐘。3．冷消化：換入0.25％胰蛋白酶中，置4℃過夜。4．分離：取出皮膚，用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開。5．
細胞生物基本方法：腫瘤細胞培養
腫瘤細胞培養特殊之處在于成纖維細胞的排除（成纖維細胞常與腫瘤細胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤組織）。有以下一些方法：1．機械刮除法2．反復帖壁法3．消化排除法4．膠原酶消化法?1）??機械刮除法1．標記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位。2．刮除：棄掉培養液，把無菌膠刮伸入
上皮細胞培養
1、取材：外科植皮或手術殘余皮膚小塊，早產流產兒皮膚更好，取角化層薄者，切成0.5－1平方厘米小塊。2、置0.02%EDTA中，室溫，5分鐘。3、換入0.25%胰蛋白酶中，4℃過夜。4、分離：取出皮塊，用血管鉗或鑷子將表皮與真皮層分開。5、取出表皮，剪成更小的塊后，置0.25%胰酶中，37℃，30—
上皮細胞培養
1）表皮細胞培養 1．取材：取外科植皮或手術殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產流產兒皮膚更好，切成0.5～1平方厘米小塊。 2．EDTA處理：先置入0.02%EDTA中室溫置5分鐘。 3．冷消化：換入0.25%胰蛋白酶中，置4℃過夜。 4．分離：取出皮膚，用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分
細胞生物基本方法：肌組織細胞培養
肌組織細胞培養1）骨骼肌細胞培養1．殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成0.3～0.5厘米小塊。2．用不含鈣鎂離子的Hanks液配的0.25％胰蛋白酶消化，無菌紗網或紗布濾過，合成培養基加10％小牛血清培養，為促進分化可加1％的胎汁。3．細胞接種量為2×106/皿，接種在膠原或明膠的底物上能促進細胞分化
細胞生物基本方法：神經組織細胞培養
神經組織細胞培養1．獲取腦組織后，先仔細剝除腦膜和血管等纖維成分，置入Hanks液中漂洗1～2次后，置于30～50倍的Hanks液中，腦組織比較柔軟，反復吹打即可制成細胞懸液。2．為排除脂肪成分和其它碎塊，把懸液注入離心管中，在室溫直立5～10分鐘后，細胞或細胞團塊自然下沉，脂肪等雜物易漂浮于懸液表
乳腺上皮細胞培養
實驗方法原理 在內源性巨噬細胞存在的條件下，將經離心得到的哺乳早期的乳汁上皮細胞放入營養豐富的培養液中培養，并可用混合性蛋白酶螯合液傳代。試劑、試劑盒 RPMI 1640胎牛血清人血清胰島素氫化可的松霍亂毒素胰蛋白酶液儀器、耗材 培養瓶 離心管實驗步驟 材料無菌1. 生長培養液：RPMI 16402
角膜上皮細胞培養
實驗方法原理 將角膜組織置于膠原蛋白上，使其附著。然后，在涂有纖連蛋白和膠原蛋白的培養皿擴增培養。試劑、試劑盒 D-PBSA無血清角質形成細胞培養液 胰蛋白酶 EDTA Biocoat6孔培養板實驗步驟 一、材料?滅菌無血清角質形成細胞培養液（keratinocyteserum-freemedium
細胞生物基本方法：結締組織類細胞培養
結締組織類細胞培養1）成纖維細胞培養用人或動物胚體為好；動物可用小鼠或雞胚，去頭和內臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養；如為人胚，可取皮膚培養。幼兒包皮是培養成纖維細胞的很好對象。?2）??巨噬細胞培養1．實驗前三天，向每只小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml（勿注入腸內）。2．引頸殺死動物，手
各類上皮細胞培養1
上皮細胞培養?1）表皮細胞培養?1．取材：取外科植皮或手術殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產流產兒皮膚更好，切成0.5～1?平方厘米小塊。?2．EDTA?處理：先置入0.02％EDTA?中室溫置5?分鐘。?3．冷消化：換入0.25％胰蛋白酶中，置4℃過夜。?4．分離：取出皮膚，用血管鉗或鑷子把表皮
乳腺上皮細胞培養實驗
實驗方法原理在內源性巨噬細胞存在的條件下，將經離心得到的哺乳早期的乳汁上皮細胞放入營養豐富的培養液中培養，并可用混合性蛋白酶螯合液傳代。試劑、試劑盒RPMI 1640胎牛血清人血清胰島素氫化可的松霍亂毒素胰蛋白酶液儀器、耗材培養瓶離心管實驗步驟材料無菌1. 生長培養液：RPMI 16402. 胎牛血
乳腺上皮細胞培養實驗
實驗方法原理在內源性巨噬細胞存在的條件下，將經離心得到的哺乳早期的乳汁上皮細胞放入營養豐富的培養液中培養，并可用混合性蛋白酶螯合液傳代。試劑、試劑盒RPMI 1640 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?胎
各類上皮細胞培養2
6）毛細血管內皮細胞培養?腫瘤條件培養基制備：?1．取C3H?小鼠的S-180?實體肉瘤組織。?2．胰蛋白酶消化，Dulbecco?改良Eagle?氏培養液15ml（含10％小牛血清），接種到T-75?Falcon?產培養瓶中培養。?3．在細胞生長接近完全匯合時，收集培養液制成條件培養基；再用含10
角膜上皮細胞培養實驗
實驗方法原理將角膜組織置于膠原蛋白上，使其附著。然后，在涂有纖連蛋白和膠原蛋白的培養皿擴增培養。試劑、試劑盒D-PBSA無血清角質形成細胞培養液胰蛋白酶EDTABiocoat6孔培養板實驗步驟一、材料?滅菌無血清角質形成細胞培養液（keratinocyteserum-freemedium，KGM;C
上皮細胞類培養實驗_胃上皮細胞培養實驗
實驗方法原理胃癌為我國高發癌癥之一，培養正常人胃上皮細胞對研究胃癌癌變機理有很大應用價值。近年來培養人的腎臟上皮、氣管上皮、前列腺上皮等都有報道，但培養人胃上皮細胞少見成功。近年我研究室通過培養90例正常胃上皮細胞初代培養獲得成功，并建成轉化細胞系（Ges-1）。培養人正常胃上皮細胞獲得成功主要在于
細胞培養基本方法
= 細胞培養基本方法 =?(一)準備和安裝過濾器 (二)合成培養基的配制 (三)小牛血清的處理 (四)生長培養基的配制(五)凍存細胞的復蘇 (六)傳代 (七)凍存 (八)注意事項 (一)準備和安裝過濾器 清洗好過濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，
細胞培養基本方法
一)準備和安裝過濾器??清洗好過濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，15磅20 min進行高壓滅菌處理。 在超凈臺內打開過濾器架好，膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中，出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過濾，過濾后要檢查濾膜是否完好無損。?(二)合成培養基的配制?1、根
原代腎上皮細胞培養實驗
實驗方法原理將自皮質切除的組織快切成碎塊，沖洗后放入膠原蛋白酶和胰蛋白酶混合液，搖晃消化。定時用吸管研磨組織塊，然后收集分離的細胞。用一定孔徑大小的濾網過濾細胞懸液，除去未消化的組織塊。然后，洗細胞，清除消化酶。用添加血清的培養液混懸細胞，將細胞接種于塑料培養器皿。實驗材料腎組織片試劑、試劑盒DME
原代腎上皮細胞培養實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將自皮質切除的組織快切成碎塊，沖洗后放入膠原蛋白酶和胰蛋白酶混合液，搖晃消化。定時用吸管研磨組織塊，然后收集分離的細胞。用一定孔徑大小的濾網過濾細胞懸液，除去未消化的組織塊。然后，洗細胞，清除消化酶。用添加血清的培養液混懸細胞，
原代腎上皮細胞培養實驗
原代腎上皮細胞培養實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將自皮質切除的組織快切成碎塊，沖洗后放入膠原蛋白酶和胰蛋白酶混合液，搖晃消化。定時用吸管研磨組織塊，然后收集分離的細胞。
細胞培養的基本方法（二）
第四節 細胞計數及活力測定一、原理 培養的細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好，所以要進行細胞計數。計數結果以每毫升細胞數表示。細胞計數的原理和方法與血細胞計數相同。在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力，由組織中分離細胞一般也要檢查活力，以了解分
兔食管上皮細胞培養步驟
原代細胞實驗材料：? ? ? 1. 大兔的正常食管組織? ? ? 2. 6孔培養板：用多聚賴氨酸4℃包被過夜? ? ? 3. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素和200000U/L慶大霉素，pH7.4? ? ? 4. 手術刀、解剖剪、解剖鑷、
方案23.3－乳腺上皮細胞培養實驗
乳腺上皮細胞培養 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在內源性巨噬細胞存在的條件下，將經離心得到的哺乳早期的乳汁上皮細胞放入營養豐富的培養液中培養，并可用混合性蛋白酶螯合液傳代。
方案－23.2－角膜上皮細胞培養實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將角膜組織置于膠原蛋白上，使其附著。然后，在涂有纖連蛋白和膠原蛋白的培養皿擴增培養。 試劑、試劑盒 D-PBSA
上皮細胞類培養實驗_肝細胞培養實驗
實驗方法原理肝實質由大量肝細胞和少量間質組成，人胎兒、成人和動物的肝臟皆可用于培養；肝臟具有取材方便和易于生長的優點，能獲得典型上皮細胞培養。肝細胞形態規整，有多種功能并具有代謝活化致癌物的能力，適用做多種研究；我國已建有多個人肝癌細胞系。實驗材料肝臟試劑、試劑盒BSS消化液胰蛋白酶膠原酶儀器、耗材
大鼠卵巢上皮細胞培養注意事項
大鼠卵巢上皮細胞培養注意事項：1. 收到后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現 象發生請及 時和我們聯系。2. 仔細閱讀說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問 題，責任由客戶自行承
上皮細胞類培養實驗_內皮細胞培養實驗
實驗方法原理內皮細胞易于從血管分離進行培養成單層細胞，對研究內皮細胞再生生、腫瘤促血管生長因子（TAF）等有很大應用價值。人內皮細胞培養可應用人臍帶臍靜脈、動物大動脈等，用灌流消化法獲取細胞最為簡便。實驗材料臍帶試劑、試劑盒膠原酶消化液PBS儀器、耗材注射器離心管培養基實驗步驟1. ?取產后的新鮮臍
細胞培養的基本方法細胞分離技術（一）
細胞分離技術一、從原代組織中分離細胞 將組織塊分離（散）成細胞懸液的方法有多種，最常用的是機械解離細胞法、酶學解離細胞法以及螯合劑解離細胞法。從原代組織中獲得單細胞懸液的一般方法是酶解聚。細胞暴露在酶中的時間要盡可能的短，以保持最大的活性。下列步驟可以解聚整個組織，獲得較高產量的有活性細胞。1.胰蛋
細胞分離技術是細胞培養的基本方法
從原代組織中分離細胞 將組織塊分離（散）成細胞懸液的方法有多種，最常用的是機械解離細胞法、酶學解離細胞法以及螯合劑解離細胞法。從原代組織中獲得單細胞懸液的一般方法是酶解聚。細胞暴露在酶中的時間要盡可能的短，以保持最大的活性。下列步驟可以解聚整個組織，獲得較高產量的有活性細胞。1.胰蛋白酶 (Tryp
細胞培養的基本方法細胞分離技術（二）
1.懸浮細胞 ●計數將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數生長期。以大約200～400g離心5分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。 ●以1×107到5×107細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養基中再次懸浮細胞，或者以0.5×107到1×107在無血清培養基中，再次懸浮細胞。 ●