Westernbloting綜述
摘要：本文主要是針對Western bloting的原理及操作進行了簡單的闡述，Western印跡法是利用抗原抗體的免疫反應，先將蛋白通過SDS-PAGE電泳分離開來，然后再利用電場力的作用將膠上的蛋白轉移到固相載體（NC膜）上，然后再加抗體形成抗原抗體復合物，利用發光或顯色原理將結果顯示到膜或底片上。同時對Western bloting在實際操作中應注意的細節問題進行了歸納以及與其它免疫技術就抗體檢測方面進行了比較。關鍵詞：Western bloting；免疫；轉膜；顯色；抗體印跡法(bloting)是指將樣品轉移到固相載體上，而后利用相應的探測反應來檢測樣品的一種方法。1975年，Southern建立了將DNA轉移到硝酸纖維素膜（NC）上，并利用DNA-RNA雜交檢測特定的DNA片段的方法，稱為Southern印跡法。而后人們用類似的方法，對RNA和蛋白質進行印跡分析，對RNA的印跡分析稱為Northern印跡法，對單向電泳......閱讀全文
PCR技術綜述
前言??????一滴殘留在裙子上的精液使得美國總統Bill?Clinton不得不坦承他與白宮實習生有不正當的關系。因為他知道現在的生物科技就連一個精子也能被用來做為證據。這種將極微量的生物標本化為可供鑒定的現代技術正是PCR(Polymerase?chain?reaction)--聚合酶鏈式反應具有
His抗體推薦—Abbkine全系列His標簽抗體
His標簽是由6個組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設計用于重組蛋白質的吸附純化。由于分子量較小，并且較容易分離和純化，His-tag 融合標簽與其他標簽相比有很多明顯優勢, 是目前用于純化的融合標簽中使用最為廣泛的一種。His抗體可以用于檢測和His標
Western－Blot詳解（八）
DDDD.顯色目的條帶又細又淺，靶蛋白是27KD的bcl-xl和67KD 的c-myc，應該是高表達。每個涌道上50-70μg蛋白，開始用半干轉移，后來用濕轉14v，16h，用PVDF膜轉移。膠轉移后染色檢測，發現小分子量的基本轉移走了，可是為什么條帶老是不粗不濃呢?解答：可能跟你的一抗有關
Western－Blot實驗（一）
大家都知道Western Blot時間周期較長，大致可以分為忙碌的第一天，和心痛的第二天，像極了愛情。人生若只如初見，何事秋風悲畫扇。經歷轉瞬即逝的新手曙光后，便進入漫長的黑夜。第一天，從最一步的配膠，到最后一步的孵育膜都極細心像極了愛情的萌芽期，需要精心的呵護。第二天經過繁瑣的洗膜，孵二抗，洗膜，
western－blot試驗心得
前兩天做了一個western blot,現在把試驗中的一點小小的體會發上來，與大家交流，希望大家多多指點！1 本實驗室采用的脫脂奶粉已經存放了近兩年了，雖然是四攝氏度保存，但是其封閉質量還是難以保證的。所以本人的試驗結果中出現了小斑點。建議最好使用BSA或專用的脫脂奶粉進行封閉，雖然貴點，但還是有個
Western－Blot詳解（三）
3.抗體 T.做細胞信號傳導，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？ 解答：對二抗無要求，要看你實驗條件來選擇，一般推薦用HRP標記的二抗。 U.同一公司的另外抗體用這個稀釋度做出來效果很好，所以沒做預試，怕費時間，用什么樣的稀釋度比較好呢？我用的E
Western－Blot詳解（三）
3.抗體T.做細胞信號傳導，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？解答：對二抗無要求，要看你實驗條件來選擇，一般推薦用HRP標記的二抗。U.同一公司的另外抗體用這個稀釋度做出來效果很好，所以沒做預試，怕費時間，用什么樣的稀釋度比較好呢？我用的ELL+plus試劑盒顯色。轉膜過夜，
A－typical－Westernt...
實驗概要Peprotech provides a typical Western-transfer protocol (e.g. for the detection of protein X).實驗原理Western Transfer, also known as Western Blottin
Western－Blot實驗（二）
小巧的體格，卻一應俱全，可以靈活控制多種應用程序，包括化學發光，熒光，DNA/蛋白膠。可以滿足對實驗室各種樣品成像的要求。是目前市面上唯一的一款既可進行Cy3, Cy5, Cy2 多色熒光LED成像，又可在700和800nm處進行近紅外激光定量熒光western 成像系統。這達到對成像最完美
Western－Blot詳解－原理
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。?原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢
Stripping－for－reprobing－western－blots
實驗概要Stripping ?is the term used to describe the removal of primary and secondary ?antibodies from a western blot membrane. Stripping is useful when on
Western免疫印跡
?Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理????與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝
Western－Blot操作步驟
背景： 蛋白質印跡的發明者是斯坦福大學George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被稱為Western Blot。最開始做印跡的是一個叫Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術
Western－Blot－with－Platelet－Protein
OUTLINEWestern blot is a wide used technique to identify a target protein/s for the certain antibody.PROTOCOLPrepare platelets.Lyse washed platelets (
Western－Blot詳解（二）
11、NaN3 0.02% 疊氮鈉(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。12、Tris緩沖鹽溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl。13、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。14、過氧化物酶標記的第二
Western樣品制備方法
一、細胞抗原和組織抗原樣品的制備1、細胞抗原的處理方法向收集到的細胞中加入RIPA裂解緩沖液（蛋白酶抑制劑在使用前加入，終濃度為2ug/ml）在冰上裂解30-60min，然后再插入冰盒進行超聲，超聲強度以不產生泡沫為宜，超聲每次2-3s，重復3或4次，12000g離心3-5min，吸取上清備用。2、
經典的western方法
Western轉膜步驟?下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果，用戶的優化是必要的。?I. 所需材料： ? Xcell SureLock?或Xcell Ⅱ? Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及
Western－免疫印跡
實驗概要Western免疫印跡（Western ? Blotting）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western ? Blot采用的是聚丙烯
Western轉膜步驟
下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果，用戶的優化是必要的。I. 所需材料：?Xcell SureLock?或Xcell Ⅱ? Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）?電泳后的迷你膠
Western－Blot詳解（四）
還有一種離子交換型膜是羧甲基（CM）修飾的纖維素膜，它可以結合蛋白和多肽分子，以及其他的一些帶正電荷的樣品，最適結合pH范圍在4-7。結合的多肽分子可以從CM膜上洗脫下來，用于氨基酸系列分析或微測序。5.Marker的相關疑問MM.我用的是可視marker（BIO_RAD），但是電泳總跑不全8條帶，
Western－Blot詳解（一）
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術:一、原理二、分類i.放射自顯影ii.底物化學
Western－Blot詳解（六）
GGG.我想盡量提高轉膜的效率（我的實驗要求轉到膜上的蛋白越多越好，不管是什么大小蛋白）不知道有那些辦法？解答：不管怎么轉都會存在蛋白轉移不完全（電壓過小時間過短）或過度轉移（電壓過大時間過長）的問題，魚（小分子量蛋白）和熊掌（大分子量蛋白）不可得兼呵呵。建議把膠切成兩半，比如以35KD為界，分別進
Stripping－for－reprobing－western－blots
實驗概要Stripping ?is the term used to describe the removal of primary and secondary ?antibodies from a western blot membrane. Stripping is useful when on
Western－blotting樣品準備
實驗概要Preparation of ?lysis buffers, protease and phosphatase inhibitors, lysate from cell ?culture, lysate from tissues, protein concentration, samples
Western－Blot實驗步驟
實驗步驟： 1.分別配制 5%濃縮膠和12%分離膠 12%分離膠10mL 5%積層膠6mL H2O 3.3mL H2O 4.20mL 30% Acrylamide 4mL 30% Acrylamide 1mL pH8.8 Tris HCl（1.5M） 2.5mL PH6.8Tris
Western－Blot操作步驟
背景： 蛋白質印跡的發明者是斯坦福大學George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被稱為Western Blot。最開始做印跡的是一個叫Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southe
Western－Blot詳解（七）
TTT.目的蛋白是一種6KD的分泌性蛋白，RT－PCR就顯示細胞中mRNA表達不高，估計將培養上清凍干濃縮后采用Western Blot還可能檢測不出，但如果用western，是否一定要用0.2μm的膜？用Tris-tricine SDS－PAGE電泳，電泳時分別管制三層凝膠，分離膠用40％
Western－Blot詳解（五）
CCC.Western Stripping Buffer的配方解答：METHOD11、stripping buffer: 62.5mmol/l Tris PH6.7；100mmol/l beta-mercaptoethanol；2%SDS二次發光protocol:1.stripping buffer
Typical－Western－Tra...
實驗概要Peprotech provides a typical western transfer and development protocol.實驗原理Western Transfer, also known as Western Blotting, is a rapid immunobl
如何選擇合適的HA標簽抗體？
HA標簽系統利用一個HA (流感病毒血凝素，influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目標蛋白。HA標簽可位于蛋白質的C端或N端，該系統已廣泛應用于多種細胞類型，相應的HA標簽抗體也被廣泛應用。HA 標簽抗體能特異識別C末端或N末端帶有