定點誘變實驗
基本方案 利用PCR引物點突變 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒 TE 寡核苷酸引物 質粒 dNTP DNA聚合酶 氯仿 石蠟油 無水乙醇 儀器、耗材 離心管 熱循環儀 離心機 實驗步驟 ......閱讀全文
定點誘變實驗
基本方案 利用PCR引物點突變 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
定點誘變實驗
實驗材料 DNA試劑、試劑盒 TE寡核苷酸引物質粒dNTPDNA聚合酶氯仿石蠟油無水乙醇儀器、耗材 離心管熱循環儀離心機實驗步驟 1. ?利用突變區兩側的限制性內切酶位點將待誘變的DNA片段亞克隆進高拷貝數的載體中。?2. ?用小量制備的質粒提取模板DNA，用TE緩沖液重懸100 ng DNA至終濃
定點誘變(DpnI法)
1、引物設計：每條引物都要攜帶有所需的突變位點，引物一般長25~45bp,設計的突變位點需位于引物中部。2、反應：使用高保真的pyrobest DNA聚合酶 ;循環次數少，一般為12個循環。反應體系：10x pyrobest Buffer ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 5 uldN
定點誘變(DpnI法)
1、引物設計：每條引物都要攜帶有所需的突變位點，引物一般長25~45bp,設計的突變位點需位于引物中部。2、反應：使用高保真的pyrobest DNA聚合酶 ;循環次數少，一般為12個循環。反應體系：10x pyrobest Buffer 5 uldNTP Mixture(10mM) 1ul模板DN
定點誘變與盒式誘變的比較介紹
構建一個位點導向的文庫涉及使用含有一個或多個簡并密碼子的合成DNA片段替代一個基因片段。這可以通過雙鏈盒式誘變或單鏈寡核苷酸定向誘變來實現。我們相對傾向于寡核苷酸定向誘變，因為不同于盒式誘變，它不需要在目的區域附近有獨特的限制性酶切位點，并且構建一個文庫只需要一個寡核苷酸片段。因此，這個方法相當
定點誘變實驗——基本方案
定點突變是指通過聚合酶鏈式反應（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因組，也可以是質粒）中引入所需變化（通常是表征有利方向的變化），包括堿基的添加、刪除、點突變等。定點突變能迅速、高效的提高DNA所表達的目的蛋白的性狀及表征，是基因研究工作中一種非常有用的手段。實驗材料DNA試劑、試劑盒TE寡核
關于基因定點誘變的概述
對于任何一種遺傳學研究，尤其是有關基因的結構與功能的分析，突變都是最基本的手段。經典的方法是，應用能夠修飾DNA分子的化學誘變劑或物理誘變劑處理生物體。此類誘變方法雖然已得到了廣泛的應用，獲得了大量的突變體，但亦存在著諸多的不便之處。 第一、經受誘變劑處理的生物體，它的任何基因都有可能發生突變
寡核苷酸定點誘變的概念
中文名稱寡核苷酸定點誘變英文名稱oligonucleotidedirected mutagenesis定 義人工獲得特定核酸定點突變的一種方案。將需要改變的核苷酸置于一段合成的寡核苷酸中部，在單鏈噬菌體(如M13)模板上用克列諾酶合成有指定變化的負鏈，再通過噬菌體復制得到含突變的雙鏈。應用學科生物
定點誘變實驗——利用PCR引物點突變
實驗材料DNA試劑、試劑盒DNA聚合酶klenow限制性內切酶儀器、耗材水浴鍋離心機培養箱實驗步驟1. ?制備模板（見基本方案，步驟1和2）?2. ?合成和純化寡核苷酸引物并對5‘端磷酸化。?3. ?擴增模板DNA（基本方案，步驟4和5），在最后一次延伸結束后，加5 U 的klenow酶，30℃保溫
分子遺傳學詞匯寡核苷酸定點誘變
中文名稱：寡核苷酸定點誘變英文名稱：oligonucleotide-directed mutagenesis定 義：用人工合成的寡核苷酸在特定位點導致突變。應用學科：遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）
關于寡聚核苷酸的定點誘變技術介紹
是由加拿大的生物化學家M·史密斯（Michael Smith，1932—）發明的。其基本原理如下： 應用寡聚核苷酸進行DNA的定點誘變時，首先要把含有待突變的DNA片斷段克隆到MI3噬菌體載體中，MI3噬菌體的正鏈可以感染具有纖毛的細菌，并在細菌體內進行復制后，以出芽的形式形成新的帶有正鏈DN
寡聚核苷酸定點誘變技術的基本原理
寡聚核苷酸定點誘變技術是由加拿大的生物化學家M.史密斯（1932）發明的。其基本原理如下：應用寡聚核苷酸進行DNA的定點誘變時，首先要把含有待突變的DNA片段克隆到MI3噬菌體載體中，MI3噬菌體的正鏈可以感染具有纖毛的細菌，并在細菌體內進行復制后，以出芽的形式形成新的帶有正鏈DNA的噬菌體。而存留
利用大引物－PCR－在同一試管中進行高效快速定點誘變實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 擴增緩沖液 含有四種 dNTP 的混合溶液 熱穩定 DNA 聚合酶 瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠 正向和反向內引物 誘變引物
利用大引物－PCR－在同一試管中進行高效快速定點誘變實驗
試劑、試劑盒 擴增緩沖液含有四種 dNTP 的混合溶液熱穩定 DNA 聚合酶瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠正向和反向內引物誘變引物模板 DNA儀器、耗材 帶屏障裝置的自動移液器用吸頭微型離心機用離心管可調式移液器實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液，緩沖液和試劑的成分請參閱附錄 1。將貯存液稀釋到合適的濃度
利用大引物－PCR－在同一試管中進行高效快速定點誘變實驗
大引物方法最初是由 KAMMANN 等人（1989）建立的，現在的方法是經過許多研究人員包括 Sarkat 和 Sommer (1990,1992), Giebel 和 Spritz(1990)，Landt 等（1990),Marini 等（1993), Picard 等（1994),Ling 和
用放射性標記的寡核苷酸雜交篩選定點誘變重組克隆實驗
實驗方法原理 試劑、試劑盒 甲酸銨寡核苷酸雜交溶液寡核苷酸預雜交液TE噬菌體T4多核苷酸激酶限制性內切核酸酶瓊脂糖凝膠誘變寡核苷酸[γ-32P]ATP2XYT 頂層瓊脂和 2xYT 瓊脂平皿儀器、耗材 鈍端鑷子皮下注射用針頭（18 號）和印度墨水孵箱硝酸纖維素膜或尼龍膜真空烤箱68°C 水浴What
用放射性標記的寡核苷酸雜交篩選定點誘變重組克隆實驗
本方案主要描述了篩選噬菌體 M13 重組克隆，而一種選擇方案是篩選含噬菌粒的細菌克隆。最后也介紹了用 PCR 檢測突變體的方法。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗方法原理試劑、試劑盒甲酸銨寡核苷酸雜交溶液寡核苷酸預雜交液TE噬菌體T4多核
用放射性標記的寡核苷酸雜交篩選定點誘變重組克隆實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 試劑、試劑盒 甲酸銨 寡核苷酸雜交溶液 寡核苷酸預雜交液 TE 噬菌體T4多核
基因突變的誘變機制定向誘變
利用重組DNA技術使DNA分子在指定位置上發生特定的變化,從而收到定向的誘變效果。例如將DNA分子用某一種限制性核酸內切酶處理,再用分解DNA單鏈的核酸酶S1處理,以去除兩個粘性末端的單鏈部分,然后用噬菌體T4連接酶將兩個平頭末端連接起來,這樣就可得到缺失了相應于這一限制性內切酶的識別位點的幾個核苷
USE－誘變實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 帶 mutS 表型（例如 BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態 帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態 試劑、試劑盒
誘變－PCR－實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 氯仿 異戊醇 乙醇 礦物油或者一個蠟珠 3mol L NaOAc 5 mmol L MnCl2 突變 PCR 緩沖液
USE－誘變實驗
實驗材料 帶 mutS 表型（例如BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態試劑、試劑盒 退火緩沖液貯存液合成緩沖液噬菌體 T4DNA 連接酶噬菌體 T4DNA 聚合酶或測序酶單一位點的限制性內切核酸酶瓊脂糖凝膠誘變引物選擇引物質粒 DNA儀器、耗材 70°C
誘變－PCR－實驗
試劑、試劑盒?氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Native Taq 或 AmpliTaq DNA 聚合酶高純度的脫氧核苷 5'-三磷酸dNTP 混合物模板 DNA引物瓊脂糖凝膠用溴化乙錠染色儀器、
USE－誘變實驗
本方法中，兩條寡核苷酸引物雜交到變性重組質粒 DNA 雙鏈的同一條鏈上。一條引物（誘變引物）攜帶一個擬引進靶 DNA 序列的突變，第二條引物攜帶一個能破壞質粒單一限制酶位點的突變。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料帶 mutS 表型（
誘變－PCR－實驗
誘變 PCR 最大的優勢是以一種沒有偏好的方式引入了各種類型的突變，而不是獲得高水平的單一的擴增。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒氯仿 異戊醇乙醇礦物油或者一個蠟珠3mol L NaOAc5 mmol L MnCl2突變 PCR 緩沖液DNA 聚合酶Nati
關于基因誘變的微波誘變劑的介紹
微波輻射屬于一種低能電磁輻射，具有較強生物效應的頻率范圍在300MHz~300GHz，對生物體具有熱效應和非熱效應。其熱效應是指它能引起生物體局部溫度上升，從而引起生理生化反應；非熱效應指在微波作用下，生物體會產生非溫度關聯的各種生理生化反應。在這兩種效應的綜合作用下，生物體會產生一系列突變效應
關于基因誘變的γ射線誘變劑的介紹
γ-射線屬于電離輻射，是電磁波.一般具有很高的能量，能產生電離作用，因而能直接或間接地改變DNA結構.其直接效應是，脫氧核糖的堿基發生氧化，或脫氧核糖的化學鍵和糖-磷酸相連接的化學鍵斷裂，使得DNA的單鏈或雙鏈鍵斷裂.其間接效應是電離輻射使水或有機分子產生自由基，這些自由基與細胞中的溶質分子起作
關于基因誘變的激光誘變劑的介紹
激光在微生物誘變育種方面的研究與開發應用比較晚。激光誘變育種技術研究始于20世紀60年代，經過世界各國40多年的開發應用研究，不僅證明激光和普通光在本質上都是電磁波，它們發光的微觀機制都與組成發光物質的原子、分子能量狀態和變化密切相關。激光是一種與自然光不同的輻射光，它具有能量高度集中、顏色單一
閃絡型故障定點，定點的同時可以探測路徑。
閃絡型故障定點，定點的同時可以探測路徑。 l配合音頻信號發生器，進行音頻感應測試，可以迅速準確地探測電纜路徑，進行低阻故障定點，并能進行電纜的鑒別和深度測量。 特 點 l功能完善，可對各種電纜故障進行定點和確定電纜路徑。 l測量精度高，高阻故障定點和路徑探測的誤差均不超過
閃絡型故障定點，定點的同時可以探測路徑
閃絡型故障定點，定點的同時可以探測路徑。l配合音頻信號發生器，進行音頻感應測試，可以迅速準確地探測電纜路徑，進行低阻故障定點，并能進行電纜的鑒別和深度測量。特? 點l功能完善，可對各種電纜故障進行定點和確定電纜路徑。l測量精度高，高阻故障定點和路徑探測的誤差均不超過0.2米，低阻故障定點誤差不超過2