高效液相層析法
高效液相層析法（HPLC）是近二十年來發展起來的一項新穎快速的分離技術。它是在經典液相層析法基礎上，引進了氣相層析的理論具有氣相層析的全部優點。由于HPLC分離能力強、測定靈敏度高，可在室溫下進行，應用范圍極廣，無論是極性還是非極性，小分子還是大分子，熱穩定還是不穩定的化合物均可用此法測定。對蛋白質、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和類脂等尤為有利。高效液相層析法的基本概念和分離理論與經典的液相色譜法及氣相色譜法一致，因而其塔板理論及動力學理論等都可用于高效液相層析。⒈ 高效液相層析儀 典型的高效液相層析儀包括輸液系統、層析柱與檢測系統三部分。流動相用一高壓泵輸入。這種高壓泵應滿足以下條件：①流量恒定，無脈動，并有較大的調節范圍。②能抗溶劑腐蝕。③有較高的輸出壓力，一般要達到15～300kg/c，也有的高達800kg/c。④泵的死體積要小。梯度洗脫裝置必須具備兩臺高壓泵，一臺輸送強溶劑，一臺輸送弱溶劑，兩泵運轉速度用電腦控制，并......閱讀全文
高效液相層析法
高效液相層析法（HPLC）是近二十年來發展起來的一項新穎快速的分離技術。它是在經典液相層析法基礎上，引進了氣相層析的理論具有氣相層析的全部優點。由于HPLC分離能力強、測定靈敏度高，可在室溫下進行，應用范圍極廣，無論是極性還是非極性，小分子還是大分子，熱穩定還是不穩定的化合物均可用此法測定。對蛋白質
高效液相層析法簡介
高效液相層析（HPLC）在經典液相層析法基礎上，引進氣相層析的理論而發展起來的一項新穎快速的分離技術。具有分離能力強、測定靈敏度高、可在室溫下進行、應用范圍廣等優點，對分離蛋白質、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和類脂等尤其有利，根據流動相和固定相相對極性，高效液相色譜分析可分為正相和反相兩種。
高效液相層析法生化檢驗
高效液相層析法是生化檢驗考試復習需要了解的知識，醫學|教育網搜集整理了相關內容與考生分享。高效液相層析（HPLC）在經典液相層析法基礎上，引進氣相層析的理論而發展起來的一項新穎快速的分離技術。具有分離能力強、測定靈敏度高、可在室溫下進行、應用范圍廣等優點，對分離蛋白質、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和
高效液相層析法生化檢驗
高效液相層析法是生化檢驗考試復習需要了解的知識，醫學|教育網搜集整理了相關內容與考生分享。高效液相層析（HPLC）在經典液相層析法基礎上，引進氣相層析的理論而發展起來的一項新穎快速的分離技術。具有分離能力強、測定靈敏度高、可在室溫下進行、應用范圍廣等優點，對分離蛋白質、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和
高效液相層析法的特點
高壓液相色譜法以液體為流動相（稱為載液），液體流經色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達150～3.5萬KPa。高速流動相在柱內的流速較經典色譜快得多，一般可達1～10ml/min。高效液相色譜法所需的分析時間較之經典液相色譜法少得多，一般少于 1h 。高效近來研究
高效液相層析法的主要類型
⑴ 液-固吸附層析：固定相是具有吸附活性的吸附劑，常用的有硅膠、氧化鋁、高分子有機酸或聚酰胺凝膠等。液-固吸附層析中的流動相依其所起的作用不同，分為 “底劑”和洗脫劑兩類，底劑起決定基本色譜的分離作用，洗脫劑起調節試樣組份的滯留時間長短，并對試樣中某幾個組份具有選擇性作用。流動相中底劑與洗脫劑成分的
關于高效液相層析法的基本介紹
高效液相層析法（HPLC）是近二十年來發展起來的一項新穎快速的分離技術。它是在經典液相層析法基礎上，引進了氣相層析的理論具有氣相層析的全部優點。由于HPLC分離能力強、測定靈敏度高，可在室溫下進行，應用范圍極廣，無論是極性還是非極性，小分子還是大分子，熱穩定還是不穩定的化合物均可用此法測定。對蛋
關于高效液相層析法使用儀器的介紹
典型的高效液相層析儀包括輸液系統、層析柱與檢測系統三部分。流動相用一高壓泵輸入。這種高壓泵應滿足以下條件： ①流量恒定，無脈動，并有較大的調節范圍。 ②能抗溶劑腐蝕。 ③有較高的輸出壓力，一般要達到15～300kg/c，也有的高達800kg/c。 ④泵的死體積要小。梯度洗脫裝置必須具備兩
關于高效液相層析法的主要類型介紹
⑴ 液-固吸附層析：固定相是具有吸附活性的吸附劑，常用的有硅膠、氧化鋁、高分子有機酸或聚酰胺凝膠等。液-固吸附層析中的流動相依其所起的作用不同，分為 “底劑”和洗脫劑兩類，底劑起決定基本色譜的分離作用，洗脫劑起調節試樣組份的滯留時間長短，并對試樣中某幾個組份具有選擇性作用。流動相中底劑與洗脫劑成
反相高效液相層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 TFA乙腈鹽酸胍儀器、耗材 層析柱HPLC進樣器實驗步驟 1. ?用經脫氣的HPLC級水洗去反相柱的有機溶劑，梯度從100%有機溶劑到100%水，流速1 ml/min，持續15 min 以上。?2. ?以100%的TFA/乙腈緩沖液平衡柱子至柱壓和光吸收值達到恒定。用1
高效液相層析的概述
70年代新發展的層析法。其特點是：用高壓輸液泵，壓強最高可達5000psi（相當于34個標準大氣壓）。用直徑約3～10微米的超細支持物裝填均勻的不銹鋼柱。常用的支持物是在玻璃小珠上涂一層1～2微米的二氧化硅，經硫酰氯反應生成Si—Cl，進一步連接疏水的烷基，如Si—C18H37，或陽離子交換基團
高效液相層析的特點
高壓液相色譜法以液體為流動相（稱為載液），液體流經色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達150～3.5萬KPa。高速流動相在柱內的流速較經典色譜快得多，一般可達1～10ml/min。高效液相色譜法所需的分析時間較之經典液相色譜法少得多，一般少于 1h 。高效近來研究
反相高效液相層析實驗
多肽和蛋白質的分離 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
高效液相層析法的主要類型及其分離原理
根據分離機制的不同，高效液相色譜法可分為下述幾種主要類型1 ．液 — 液分配色譜法(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化學鍵合相色譜(Chemically Bonded Phase Chromatography)流動相和固定相都是液體。流動相與固定相之間
高效液相層析的相關介紹
高效液相層析（又名高壓液相色譜），70年代新發展的層析法。其特點是：用高壓輸液泵，壓強最高可達5000psi（相當于34個標準大氣壓）。高效液相色譜法是在經典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，在技術上，流動相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達3.5萬KPa）；色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填
高效液相層析的特點介紹
高壓 液相色譜法以液體為流動相（稱為載液），液體流經色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達150～3.5萬KPa。 高速 流動相在柱內的流速較經典色譜快得多，一般可達1～10ml/min。高效液相色譜法所需的分析時間較之經典液相色譜法少得多，一般少于 1h
高效液相層析操作注意要點
1)首先對流動相進行過濾，根據需要選擇不同的濾膜，一般為有機系和水系，常用的孔徑為0.20um和0.45um。 2)對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。 3)正常情況下，儀器首先用甲醇沖洗10-20分鐘，然后再進入測試用流動相(如流動相為緩沖試劑，則要二次重蒸水沖洗10-20分鐘，直
高效液相層析的技術特點
高壓液相色譜法以液體為流動相（稱為載液），液體流經色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達150～3.5萬KPa。高速流動相在柱內的流速較經典色譜快得多，一般可達1～10ml/min。高效液相色譜法所需的分析時間較之經典液相色譜法少得多，一般少于 1h 。高效近來研究
高效液相層析的結構組成
高效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、．分離系統、檢測系統和數據處理系統，下面將分別敘述其各自的組成與特點。?1．進樣系統一般采用隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的。2．輸液系統該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l
高效液相層析技術介紹
70年代新發展的層析法。其特點是：用高壓輸液泵，壓強最高可達5000psi（相當于34個標準大氣壓）。用直徑約3～10微米的超細支持物裝填均勻的不銹鋼柱。常用的支持物是在玻璃小珠上涂一層1～2微米的二氧化硅，經硫酰氯反應生成Si—Cl，進一步連接疏水的烷基，如Si—C18H37，或陽離子交換基團—S
高效液相層析的技術特點
高效液相層析（又名高壓液相色譜），70年代新發展的層析法。其特點是：用高壓輸液泵，壓強最高可達5000psi（相當于34個標準大氣壓）。高效液相色譜法是在經典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，在技術上，流動相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達3.5萬KPa）;色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而
薄層層析，高效液相層析各有什么特點
紙層析：英文為thin layer chromatography 又稱薄層色譜,色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質的一種重要實驗技術,屬固—液吸附色譜,兼備了柱色譜和紙色譜的優點,一方面適用于少量樣品（幾到幾微克,甚至0.01微克）的分離；另一方面在制作薄層板時,把吸附層加厚加大,因此,又
高效液相層析的輸液系統介紹
該系統包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l．47～4．4X107Pa，流速可調且穩定，當高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動速度，這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動相貯存錯和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的
高效液相層析的檢測系統介紹
高效液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。 （1）紫外檢測器 該檢測器適用于對紫外光（或可見光）有吸收性能樣品的檢測。其特點：使用面廣（如蛋白質、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；靈敏度高（檢測下限為10-10g/ml）；線性范圍寬；對溫度和流速變化不
高效液相層析的注意事項
1)流動相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。 2)柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過柱子。 3)所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。 4)壓力不能太大，最好不要超過150kgf/cm2 . 5)因為緩沖試劑遇有機溶劑，會結晶，有損色譜柱
離子交換高效液相層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 Tris·ClNaCl磷酸鈉緩沖液儀器、耗材 交換柱實驗步驟 1. ?在使用IEX柱前，依次以序列溶液洗柱去除柱上吸附的蛋白質：10倍柱床的已脫氣水和10倍柱床的高鹽緩沖液，對聚合體IEX柱，洗柱液在8 ~10，對硅膠類柱，洗柱液pH在7~8。2. ?在室溫平衡IE
分子排阻高效液相層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 SE緩沖液儀器、耗材 層析柱實驗步驟 1. ?用已脫氣HPLC級水洗去SE柱的貯存溶劑，流速1 ml/min。在室溫以已脫氣的SE緩沖液在1 ml/min 流速平衡SE柱30 min 或直至基線穩定。2. ?注射100 μl ?緩沖液進行一次空白樣品的假層析，檢測器
分子排阻高效液相層析實驗
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒SE緩沖液儀器、耗材層析柱實驗步驟1. ?用已脫氣HPLC級水洗去SE柱的貯存溶劑，流速1 ml/min。在室溫以已脫氣的SE緩沖液在1 ml/min 流速平衡SE柱30 min 或直至基線穩定。2. ?注射100 μl ?緩沖液進行一次空白樣品的假層析，檢測器設定在210
離子交換高效液相層析實驗
陰離子交換HPLC 陽離子交換HPLC ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、
分子排阻高效液相層析實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒