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  • 利用“無創”技術檢測活細胞中熒光蛋白表達(二)

    結果波長優化用GeminiEM對DsRed進行波長掃描,以此舉例如何進行波長優化。為了檢測最大激發波長,我們首先固定發射波長為600nm,然后對發射波長進行掃描。掃描結果顯示最大激發波長為556nm(圖1)。同樣為了檢測最大發射波長,我們固定激發波長為535nm,然后掃描發射波長,從而得到584nm的結果(圖2)。激發與發射值都與被發表的波長結果557/579相近。下一步就是要結合信號/背景優化結果確定最佳激發和發射波長。因為初步檢測結果的斯托克位移偏小(22nm),顯然是要通過降低激發波長和增大發射波長來擴大兩者之間的差異,其次還需要找到合適的發射光阻隔濾片優化最佳靈敏度。最終,我們使用550nm的激發波長來激發,同時使用570nm的發射光阻隔濾片隔離掉不想要的高于570nm以上的激發光。通過575到600nm的發射波長掃描DsRed轉染的細胞,結果顯示在587-588nm處會有峰值出現(圖3,上面的曲線)。背景(沒有轉染的細......閱讀全文

    利用“無創”技術檢測活細胞中熒光蛋白表達(二)

    結果波長優化用GeminiEM對DsRed進行波長掃描,以此舉例如何進行波長優化。為了檢測最大激發波長,我們首先固定發射波長為600nm,然后對發射波長進行掃描。掃描結果顯示最大激發波長為556nm(圖1)。同樣為了檢測最大發射波長,我們固定激發波長為535nm,然后掃描發射波長,從而得到584nm

    利用“無創”技術檢測活細胞中熒光蛋白表達(一)

    簡介在過去的五年中,熒光蛋白在監測體內生物學研究中,起到越來越重要的作用。源于維多利亞多管發光水母中的綠色熒光蛋白(GFP)是最早被我們應用的熒光蛋白,但是隨著時間的推移,現在我們可以使用的熒光蛋白種類也越加豐富,包括加強型的變異GFP蛋白、從其他種類水母中發現的熒光蛋白和珊瑚礁蛋白。它們都可以在眾

    利用“無創”技術檢測活細胞中熒光蛋白表達(三)

    細胞混合結果在本次實驗中,我們在一個96孔板里混合了多種細胞,保證每個孔大約50,000個細胞。因此,如果是1:1混合,那么每種細胞會有25,000個。如果是1:1:1混合,那么每種細胞將有16,700個。實驗板分別用480/510nm(AsGFP和ZsGreen的優化結果)和550/588nm(D

    酶標儀利用”無創”技術檢測活細胞熒光蛋白(二)

    下一步就是要結合信號/背景優化結果確定最佳激發和發射波長。因為初步檢測結果的斯托克頓位移偏小(22nm),顯然是要通過降低激發波長和增大發射波長來擴大兩者之間的差異,其次還需要找到合適的發射光阻隔濾片優化最佳靈敏度。最終,我們使用5 5 0nm的激發波長來激發, 同時使用570nm的發射光阻

    酶標儀利用”無創”技術檢測活細胞熒光蛋白

    在過去的五年中,熒光蛋白在監測體內生物學研究中,起到越來越重要的作用。源于維多利亞多管發光水母中的綠色熒光蛋白(GFP)是zui早被我們應 用的熒光蛋白,但是隨著時間的推移,現在我們可以使用的熒光蛋白種類也越加豐富,包括加強型的變異GFP蛋白、從其他種類水母中發現的熒光蛋白和珊瑚礁蛋 白。它們都可以

    酶標儀利用”無創”技術檢測活細胞熒光蛋白(一)

    簡介在過去的五年中,熒光蛋白在監測體內生物學研究中,起到越來越重要的作用。源于維多利亞多管發光水母中的綠色熒光蛋白(GFP)是最早被我們應用的熒光蛋白,但是隨著時間的推移,現在我們可以使用的熒光蛋白種類也越加豐富,包括加強型的變異GFP蛋白、從其他種類水母中發現的熒光蛋白和珊瑚礁蛋白。它們都可以在眾

    酶標儀利用”無創”技術檢測活細胞熒光蛋白(三)

    在本次實驗中,ZsGreen和DsRed細胞系在底讀模式都有著相似的檢測限,而且兩者都比AcGFP細胞系的檢測下限低3到4倍。本次實驗一共重復了三次,但是DsRed實驗結果并不是每次都能表現的足夠好。在一次實驗中,它的檢測下限近似于AcGFP,但是在另一次實驗中,它的檢測下限又會很高。我們將這些區別

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       1964年有兩個人開創了體外蛋白表達的先河,這兩個人的名字大家必定不會陌生—馬太和尼倫伯格。因為他們的創新思維讓人類破譯了編碼氨基酸的64種翻譯密碼子。從此,體外蛋白表達開始為科學界所關注,不過彼時這個系統蛋白表達量低、持續時間短、穩定性差,使其未能得到進一步發展。    到80年代中期Sp

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    1964年有兩個人開創了體外蛋白表達的先河,這兩個人的名字大家必定不會陌生—馬太和尼倫伯格。因為他們的創新思維讓人類破譯了編碼氨基酸的64種翻譯密碼子。從此,體外蛋白表達開始為科學界所關注,不過彼時這個系統蛋白表達量低、持續時間短、穩定性差,使其未能得到進一步發展。到80年代中期Spirin等對其進

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      腫瘤無創診斷技術即液體活檢(liquid biopsies)的出現,標志著人類在攻克腫瘤的道路上又前進了一大步。2015年液體活檢技術被MIT科技綜述雜志(MIT Technology Review)評為年度十大突破技術之一;2017年6月,世界經濟論壇與《科學美國人》雜志的專家委員會聯合選出的

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    ?腫瘤無創診斷技術即液體活檢(liquid biopsies)的出現,標志著人類在攻克腫瘤的道路上又前進了一大步。2015年液體活檢技術被MIT科技綜述雜志(MIT Technology Review)評為年度十大突破技術之一;2017年6月,世界經濟論壇與《科學美國人》雜志的專家委員會聯合選出的2

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