直接原位PCR
實驗方法原理 原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。實驗材料 細胞或組織樣品試劑、試劑盒 福爾馬林二甲苯PBSTris-HCl Triton-X100蛋白酶KPCR反應緩沖液Tag酶Tween-20指甲油無水乙醇蘇木素染色液 NP-40NaClMgCl2BSADAB過氧化氫鹽酸酒精液儀器、耗材 玻片濕盒濾紙顯微鏡實驗步驟 一、組織切片和細胞樣品的制備 1. 試劑與配置 10%福爾馬林；二甲苯；PBS。 2. 操作方法 （1）用10%福爾馬林固定組織8~15 h，石蠟包埋，切片（4 μm），將切片置于新鮮的二甲苯中處理5 min，放入無水乙醇中浸泡5 min，取出，空氣干燥；&n......閱讀全文
PCR產物的直接純化
實驗概要本實驗介紹了PCR產物直接純化的原理及操作步驟。實驗原理PCR產物一般都含有過量的引物、Taq ? DNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程，因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多，商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中
原位PCR實驗的基本方法
① 固定組織或細胞：將組織細胞固定于預先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛處理，再滅活除去細胞內源性過氧化物酶。 ②蛋白酶K消化處理：用60ug/ml的蛋白酶K將固定好的組織細胞片55℃消化處理2h后，96℃2min以滅活蛋白酶K。 ③PCR擴增：在組織細胞片上，加PCR反應液，覆蓋并加液
原位PCR實驗的大致過程
大致過程 實驗用的標本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落細胞、血細胞等。其基本方法為多聚甲醛固定組織或細胞，蛋白酶消化處理組織；在組織細胞片上滴加PCR反應液進行擴增，覆蓋并加液體石蠟后，在原位PCR儀上進行PCR循環擴增，PCR擴增結束后用標記的探針進行原位雜交，最后顯微鏡觀察結果。 實驗玻片
原位PCR的優勢和不足
PCR雖然能擴增包括福爾馬林固定、石蠟包埋組織的各種標本的DNA，但擴增的DNA或RNA產物不能在組織細胞中定位，因而不能直接與特定的組織細胞特征相聯系，這是該技術一個局限性。原位雜交雖具有良好的定位能力，但由于其敏感性問題，尤其是在石蠟切片中，尚不能檢測出低含量的DNA或RNA序列。而原位PC
怎樣設定原位PCR對照實驗
設立陽性對照，即用已知陽性細胞或組織切片做陽性標志，實驗結果應呈陽性，表明實驗方法準確可靠。同時要設立陰性對照，即用已知陰性細胞或組織切片作陰性對照，實驗結果應呈陰性，表示實驗方法無假陽性結果；也可以用實驗細胞或組織切片，不加標記的dUTP（直接法），PCR結果顯示陰性，或不加引物或不加TaqD
普通PCR儀/梯度PCR儀/實時熒光定量PCR儀/原位PCR儀應用對比
PCR：聚合酶鏈式反應。是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。 PCR原理示意圖： 1589863475231958.jpg PCR儀的種類有：常規的普通PCR儀，梯度P
普通PCR儀/梯度PCR儀/實時熒光定量PCR儀/原位PCR儀應用對比
PCR：聚合酶鏈式反應。是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。PCR原理示意圖：PCR儀的種類有：常規的普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實時熒光定量PCR儀四類！1、普通PCR儀一般把一次PCR
直接從PCR產物回收純化DNA
1)直接加90-100μl純化緩沖液于1.5ml離心管，再加入30～300μl PCR反應物，Vortex混合；2)加入1ml樹脂輕輕Vortex 3次，每次間隔1分鐘；3)將取出拉桿的注射器筒（3ml）裝在純化柱上，加入上述DNA與樹脂混合液，然后裝上拉桿，慢慢將混合液推進純化柱內；4)卸下注射器
無需提取－直接檢測——Real－Time－PCR
針對客戶對實驗快速、高效率的需求，Takara不斷努力探索。2019年6月，Takara推出無需從糞便、血液、細胞等樣本中提取RNA，即可直接檢測樣本中目的基因的One Step Real Time PCR Premix試劑【PrimeDirect? Probe RT-qPCR Mix】（Cod
全血直接PCR試劑盒Blood－Direct－PCR－Kit
全血直接PCR試劑盒Blood Direct PCR Kit全血擴增引物設計注意事項1）引物3’端zui后一個堿基選擇C或G；2）引物3’端zui后8個堿基應避免出現連續錯配；3）引物3’端盡量避免出現發夾結構；4）引物Tm值控制在60℃-72℃之間 (推薦使用軟件Primer Premier 5進
原位免疫PCR的IHC增敏方法
（一）基本原理Sano等（1992）率先利用基因工程的方法表達了A蛋白與鏈霉親和素的嵌合體分子獲得成功，建立了免疫PCR技術。這是一種新的抗原檢測系統，利用細胞工程和基因工程技術，巧妙地將抗原抗體反應的特異性同PCR的敏感性相結合，通過構建單克隆抗體與重組核酸的嵌合體分子，使得利用PCR技術檢測蛋白
逆轉錄酶原位－PCR－實驗
這一部分介紹了一種原位 PCR，特別是逆轉錄酶原位 PCR 的簡略方法。詳細討論了其中的每個實驗程序。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。實驗方法原理原位 PCR 儀，蓋玻片，培養箱，濕盒，RT-PCR 試劑盒，Permount實驗材料組織樣品和細胞培養物試劑、試劑盒Nuc
逆轉錄酶原位－PCR－實驗
實驗方法原理 原位 PCR 儀，蓋玻片，培養箱，濕盒，RT-PCR 試劑盒，Permount實驗材料 組織樣品和細胞培養物試劑、試劑盒 Nuclear Fast Red甲醛緩沖液檢測溶液DEPC 處理的水PBSKH2P04二甲苯乙醇牛血清白蛋白SSC NBT BCIP 顯色劑胃蛋白酶DNA
原位PCR技術的定義和方法介紹
1.概述：原位PCR就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。原位PCR是Hasse等于1990年建立的，實驗用的標本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落細胞、血細胞等.2.其基本方法為? ?
逆轉錄酶原位－PCR－實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 原位 PCR 儀，蓋玻片，培養箱，濕盒，RT-PCR 試劑盒，Permount 實驗材料 組織樣品和細胞培養物
原位聚合酶鏈式反應（in－situ－PCR）和原位反轉錄
一、儀器設備英國Thermo Hybaid原位PCR儀。二、操作流程（一）原位PCR步驟1、預處理： （1）切片常規脫蠟； （2）0.2mol/L HCl處理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化組織37℃10min； （4）Nase消化組織37℃ 30min； （5）梯度酒精脫水，
新技術可在海水里原位直接電解制氫
由于淡水資源緊缺，向大海要水是未來氫能發展的重要方向。但復雜的海水成分（約92種化學元素）導致海水制氫面臨諸多難題與挑戰，先淡化后制氫工藝流程復雜且成本高昂。11月30日，中國工程院院士謝和平與他指導的深圳大學、四川大學博士生團隊在《自然》發表論文，以物理力學與電化學相結合的全新思路，建立了相
PCR技術目的基因的直接克隆介紹
與常規的基因克隆方法相比，PCR的優點是快速，簡單，但是用PCR克隆目的基因的限制是必須知道側接靶序列的核苷酸序列，以制備引物。因而該法具有很大的局限性。 可直接利用具有平端的PCR產物進行克隆，但利用合適的引物，在待克隆的目的基因二側引入不同的限制性酶切點，則可將擴增之后的目的基因定向克隆到
PCR技術直接診斷遺傳病
自從1985年PCR技術首次應用于遺傳病基因診斷以來，已有近百種遺傳病可用PCR 技術進行診斷和產前診斷，利用PCR技術診斷遺傳病的途徑有五個，①基因突變位點 的直接檢出②篩查與遺傳病③④有關的點突變③遺傳多態性標記連鎖分析間接診斷④ 利用cmRNA逆轉錄為cDNA進行分析或直接分析cmRN
PCR產物的直接純化原理、材料與方法
一．原理PCR產物一般都含有過量的引物、Taq?DNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程，因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多，商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中，Buffer PCR-A促使大于100bp的DNA片斷選擇
PCR產物的直接純化原理、材料與方法
一．原理PCR產物一般都含有過量的引物、Taq DNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續的酶切、雙脫氧PCR測序反應等過程，因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多，商用化試劑盒的出現使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中，Buffer PCR-A促使大于100bp的DNA
乙醇固定樣品DNA－抽提和直接PCR
實驗概要本實驗從乙醇浸泡的魚苗中提取DNA，并利用直接PCR進行了鑒定。實驗原理在實際的研究工作中，野外取樣的地點一旦較為偏遠，受條件的限制，很難保證得到的樣品活體或能夠快速冷凍；另外，對一些稀有物種和瀕危種，鮮活樣品的采集十分困難，一般為了解決這些問題，常采用乙醇和甲醛固定的方法來處理樣品，再對樣
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
實驗材料 樣品試劑、試劑盒 雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀器、耗材 加濕盒熱循環儀實驗步驟 1. ?將載有固定樣品的載玻片置105℃加熱塊上5~120 s。?2. ?載玻片放入含0.3%H2O2中，于37℃或室溫溫育過夜，以滅活內源性過氧化物酶活性，然后以
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技術，就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。實驗材料樣品試劑、試劑盒雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀
原位聚合酶鏈式反應（in－situ－PCR）和原位反轉錄聚合酶...
原位聚合酶鏈式反應（in situ PCR）和原位反轉錄聚合酶鏈式反應原位聚合酶鏈式反應（in situ PCR）和原位反轉錄聚合酶鏈式反應（in situ RT-PCR）操作規程 （一）、儀器設備 英國Thermo Hybaid原位PCR儀。 （二）、操作流程 1、原位PCR步驟
《自然》：謝和平團隊實現海水原位直接電解制氫
11月30日，中國工程院院士謝和平與他指導的深圳大學、四川大學博士生團隊在《自然》發表論文，從物理力學與電化學相結合的全新思路，建立了相變遷移驅動的海水無淡化原位直接電解制氫全新原理與技術。該技術徹底隔絕海水離子，實現了無淡化過程、無副反應、無額外能耗的高效海水原位直接電解制氫，即可在海水里直接原位
海水原位直接電解制氫技術走向產業化
12月16日，深圳大學/四川大學謝和平院士團隊與東方電氣股份有限公司、東方電氣（福建）創新研究院有限公司簽署四方合作協議，將組建四方合作聯盟，推動海水無淡化原位直接電解制氫原創技術的中試示范和產業化推廣。東方電氣集團將專項投入3000萬元用于海水無淡化原位直接電解制氫技術前期研發，四方共享知識產權。
Pichia酵母表達直接PCR鑒定重組子的方法
模板的處理：1.平板上的菌落長到肉眼可見時（約12小時）；2.將除了模板之外的其它PCR反應液的組分準備好，并分裝。引物最好使用Kit中已有的檢測專用的引物，或者一條使用載體上的引物，一條使用基因的特異性引物（這樣做可以鑒定非定向克隆的方向）；3.用半根滅菌的牙簽（節約，而且好用）挑取菌落，在PCR
原位生長鈣鈦礦晶片實現低劑量直接X射線探測成像
近日，中國科學院深圳先進技術研究院先進材料科學與工程研究所研究員喻學鋒、副研究員劉延亮團隊與生物醫學與健康工程研究所研究員葛永帥團隊合作，在Advanced Science上，在線發表了題為PbI2-DMSO Assisted In-situ Growth of Perovskite Wafer
SNP的檢測方法（直接測序法與PCRSSCP）
人類基因組中存在著廣泛的多態性，最簡單的多態形式是發生在基因組中的單個核苷酸的替代，即單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphisms, SNPs）。SNP通常是一種二等位基因的（biallelic），即二態的遺傳變異，SNP的數量大、分布廣，在組成人類基因組的