原位PCR實驗的基本方法
① 固定組織或細胞：將組織細胞固定于預先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛處理，再滅活除去細胞內源性過氧化物酶。 ②蛋白酶K消化處理：用60ug/ml的蛋白酶K將固定好的組織細胞片55℃消化處理2h后，96℃2min以滅活蛋白酶K。 ③PCR擴增：在組織細胞片上，加PCR反應液，覆蓋并加液體石蠟后，直接放在擴增儀的金屬板上，進行PCR循環擴增.有的基因擴增儀帶有專門用于原位PCR的裝置。 ④雜交：PCR擴增結束后，用標記的寡核苷酸探針進行原位雜交。 ⑤顯微鏡觀察結果。 待檢石蠟切片上的非特異性結合位點經過充分封閉，內源性DNA和RNA經核酶充分消化后，通過生物素化單抗與親和素系統的橋聯，將生物素化的DNA報告分子固定在石蠟切片上，進行原位PCR擴增，擴增產物經原位核酸雜交，以雜交信號指示待測抗原是否存在。......閱讀全文
原位PCR實驗的基本方法
① 固定組織或細胞：將組織細胞固定于預先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛處理，再滅活除去細胞內源性過氧化物酶。 ②蛋白酶K消化處理：用60ug/ml的蛋白酶K將固定好的組織細胞片55℃消化處理2h后，96℃2min以滅活蛋白酶K。 ③PCR擴增：在組織細胞片上，加PCR反應液，覆蓋并加液
原位PCR的基本方法
①固定組織或細胞:將組織細胞固定于預先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛處理，再滅活除去細胞內源性過氧化物酶.②蛋白酶K消化處理:用60ug/ml的蛋白酶K將固定好的組織細胞片55℃消化處理2h后，96℃2min以滅活蛋白酶K.③PCR擴增:在組織細胞片上，加PCR反應液，覆蓋并加液體石蠟后，直接
間接原位PCR（原位雜交PCR）實驗
實驗材料 組織或細胞樣品試劑、試劑盒 SSC硫酸葡聚糖甲酰胺脫脂奶粉Denhardt’s 液SDS變性的鮭魚精DNARnaseDTT乙醇儀器、耗材 玻片石蠟膜橡皮泥濕盒實驗步驟 一、預雜交?1. ? 試劑與配制?2×SSC?50%去離子甲酰胺：用4×SSC配制（v/v）?預雜交液：2×SSC，5%硫
原位PCR實驗相關
所需設備 原位PCR反應是在載玻片的平面上進行，保持水平可以使反應各組分均勻地分布在組織切片上，所以須在原位PCR儀上進行，該儀器不但可以使載玻片保持水平，而且還可以給載玻片進行均勻地加熱，保證擴增反應的順利進行。 探針種類 與原位雜交一樣，檢測原位PCR結果的探針可以是DNA探針，也可以
原位PCR實驗步驟
原位PCR實驗步驟，原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬
原位PCR實驗的大致過程
大致過程 實驗用的標本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落細胞、血細胞等。其基本方法為多聚甲醛固定組織或細胞，蛋白酶消化處理組織；在組織細胞片上滴加PCR反應液進行擴增，覆蓋并加液體石蠟后，在原位PCR儀上進行PCR循環擴增，PCR擴增結束后用標記的探針進行原位雜交，最后顯微鏡觀察結果。 實驗玻片
直接原位PCR（In－situ－PCR）操作方法
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。1．組織切片和細胞樣品的制備【試劑與配置】10%福爾馬林二甲苯PBS【
間接原位PCR（原位雜交PCR）
與直接原位PCR所不同的是，靶基因在擴增時不進行標記基團的摻入，而是標記一段與擴增片段互補的探針，在擴增結束后，應用此探針進行原位雜交。因此，此處主要介紹原位雜交，其余方法同原位PCR。實驗材料組織或細胞樣品試劑、試劑盒SSC硫酸葡聚糖甲酰胺脫脂奶粉Denhardt’s 液SDS變性的鮭魚精DNAR
間接原位PCR（原位雜交PCR）
間接原位PCR（原位雜交PCR） ? ? ? ? ? ? 實驗材料 組織或細胞樣品 試劑、試劑盒
間接原位PCR（原位雜交PCR）
與直接原位PCR所不同的是，靶基因在擴增時不進行標記基團的摻入，而是標記一段與擴增片段互補的探針，在擴增結束后，應用此探針進行原位雜交。因此，此處主要介紹原位雜交，其余方法同原位PCR。一、預雜交1. 試劑與配制2×SSC50%去離子甲酰胺：用4×SSC配制（v/v）預雜交液：2×SSC，5%硫酸葡
原位PCR
About in situ PCR?(Applied Biosystems)Basic information about in situ PCR and its applications.The?In Situ?PCR: Amplification and Detection in a Cellu
原位PCR
實驗概要原位PCR技術自上世紀90年代初建立至今，科學家就一直對原位PCR的技術和應用進行研究，目前該項技術已日臻完善。原位PCR既能分辨帶有靶序列的細胞又能標出靶序列在細胞內的位置，在分子和細胞水平上研究疾病的發病機理、臨床過程以及病理的轉歸，其特異性和敏感性均高于一般PCR技術。在病毒學、病理學
PCR基本實驗方法（二）
Recommended?Reaction?Conditions:Initial?Conditions:Initial denaturation at start:?92 - 97oC for 3 - 5 min. If you denature at 97oC, denature sample on
PCR基本實驗方法（一）
Recommended Reagent Concentrations:Primers: 0.2 - 1.0 uMNucleotides: 50 - 200 uM?EACH?dNTPDimethyl sulphoxide (DMSO): 0 - 10% (v/v)Taq polymerase: 0.5
PCR基本實驗方法（二）
Recommended?Reaction Conditions:Initial Conditions:Initial denaturation at start:?92 - 97oC for 3 - 5 min. If you denature at 97oC, denature sample on
PCR基本實驗方法（五）
Cloning?PCR ProductsT-A Cloning Strategy:?Taq and other polymerases seem to have a terminal transferase activity which results in the non-templated ad
PCR基本實驗方法（三）
Temperature?Cycling:92 - 94oC for 30 - 60 sec (denature)37 - 72oC for 30 - 60 sec (anneal)72oC for 30 - 60 sec (elongate) (60 sec per kb target sequen
PCR基本實驗方法（五）
Cloning?PCR?ProductsT-A Cloning Strategy:?Taq and other polymerases seem to have a terminal transferase activity which results in the non-templated ad
PCR基本實驗方法（四）
Labelling?PCR Products with DigoxigeninPCR products may be very conveniently labelled with digoxigenin-11-dUTP (Boehringer-Mannheim) by incorporating
PCR基本實驗方法（四）
?Labelling?PCR?Products with DigoxigeninPCR products may be very conveniently labelled with digoxigenin-11-dUTP (Boehringer-Mannheim) by incorporating
PCR基本實驗方法（一）
Recommended?Reagent Concentrations:Primers: 0.2 - 1.0 uMNucleotides: 50 - 200 uM?EACH?dNTPDimethyl sulphoxide (DMSO): 0 - 10% (v/v)Taq polymerase: 0.5
怎樣設定原位PCR對照實驗
設立陽性對照，即用已知陽性細胞或組織切片做陽性標志，實驗結果應呈陽性，表明實驗方法準確可靠。同時要設立陰性對照，即用已知陰性細胞或組織切片作陰性對照，實驗結果應呈陰性，表示實驗方法無假陽性結果；也可以用實驗細胞或組織切片，不加標記的dUTP（直接法），PCR結果顯示陰性，或不加引物或不加TaqD
原位PCR和原位RT
（一）、儀器設備?英國Thermo Hybaid原位PCR儀?。（二）、操作流程1、原位PCR?步驟1）預處理：（1）切片常規脫蠟；（2）0.2mol/L HCl處理10min；（3）5μg/ml蛋白酶K消化組織37℃10min；（4）Nase消化組織37℃ 30min；（5）梯度酒精脫水，室溫干燥
原位PCR與PCR的區別
PCR是提取細胞或組織中的DNA進行基因擴增反應，而原位PCR是保持細胞或組織的完整性，使PCR反應體系滲透到組織和細胞中，在細胞的靶DNA所在的位置上進行基因擴增，不但可以檢測到靶DNA，而且還可以了解靶DNA存在于何種細胞中，更有利于探討靶DNA與細胞之間的關系。 PCR所采用的反應體系能
原位免疫PCR的IHC增敏方法
（一）基本原理Sano等（1992）率先利用基因工程的方法表達了A蛋白與鏈霉親和素的嵌合體分子獲得成功，建立了免疫PCR技術。這是一種新的抗原檢測系統，利用細胞工程和基因工程技術，巧妙地將抗原抗體反應的特異性同PCR的敏感性相結合，通過構建單克隆抗體與重組核酸的嵌合體分子，使得利用PCR技術檢測蛋白
原位PCR技術的定義和方法介紹
1.概述：原位PCR就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。原位PCR是Hasse等于1990年建立的，實驗用的標本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落細胞、血細胞等.2.其基本方法為? ?
直接原位PCR（In－situ－PCR）
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬林；二甲苯；PBS操
直接原位PCR（In－situ－PCR）
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬林；二甲苯；PBS操
原位PCR的概念
原位PCR就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和 高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。原位PCR是Hasse等于1990年建立的，實驗用的標本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落 細胞、血細胞等.?
逆轉錄酶原位－PCR－實驗
這一部分介紹了一種原位 PCR，特別是逆轉錄酶原位 PCR 的簡略方法。詳細討論了其中的每個實驗程序。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。實驗方法原理原位 PCR 儀，蓋玻片，培養箱，濕盒，RT-PCR 試劑盒，Permount實驗材料組織樣品和細胞培養物試劑、試劑盒Nuc