PCR基本實驗方法（一）
Recommended Reagent Concentrations:Primers: 0.2 - 1.0 uMNucleotides: 50 - 200 uM EACH dNTPDimethyl sulphoxide (DMSO): 0 - 10% (v/v)Taq polymerase: 0.5 - 1.0 Units/50ul rxnTarget DNA: 1 ng - 1 ug (NB: higher concn for total genomic DNA; lower for plasmid / purified DNA / virus DNA target)Buffer: use proprietary or home-made 10x rxn mix; eg: Cetus, Promega. This should contain: minimum of 1.5mM Mg2+......閱讀全文
PCR基本實驗方法（一）
Recommended?Reagent Concentrations:Primers: 0.2 - 1.0 uMNucleotides: 50 - 200 uM?EACH?dNTPDimethyl sulphoxide (DMSO): 0 - 10% (v/v)Taq polymerase: 0.5
PCR基本實驗方法（一）
Recommended Reagent Concentrations:Primers: 0.2 - 1.0 uMNucleotides: 50 - 200 uM?EACH?dNTPDimethyl sulphoxide (DMSO): 0 - 10% (v/v)Taq polymerase: 0.5
PCR基本實驗方法（四）
Labelling?PCR Products with DigoxigeninPCR products may be very conveniently labelled with digoxigenin-11-dUTP (Boehringer-Mannheim) by incorporating
原位PCR實驗的基本方法
① 固定組織或細胞：將組織細胞固定于預先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛處理，再滅活除去細胞內源性過氧化物酶。 ②蛋白酶K消化處理：用60ug/ml的蛋白酶K將固定好的組織細胞片55℃消化處理2h后，96℃2min以滅活蛋白酶K。 ③PCR擴增：在組織細胞片上，加PCR反應液，覆蓋并加液
PCR基本實驗方法（五）
Cloning?PCR?ProductsT-A Cloning Strategy:?Taq and other polymerases seem to have a terminal transferase activity which results in the non-templated ad
PCR基本實驗方法（二）
Recommended?Reaction Conditions:Initial Conditions:Initial denaturation at start:?92 - 97oC for 3 - 5 min. If you denature at 97oC, denature sample on
PCR基本實驗方法（五）
Cloning?PCR ProductsT-A Cloning Strategy:?Taq and other polymerases seem to have a terminal transferase activity which results in the non-templated ad
PCR基本實驗方法（二）
Recommended?Reaction?Conditions:Initial?Conditions:Initial denaturation at start:?92 - 97oC for 3 - 5 min. If you denature at 97oC, denature sample on
PCR基本實驗方法（三）
Temperature?Cycling:92 - 94oC for 30 - 60 sec (denature)37 - 72oC for 30 - 60 sec (anneal)72oC for 30 - 60 sec (elongate) (60 sec per kb target sequen
PCR基本實驗方法（四）
?Labelling?PCR?Products with DigoxigeninPCR products may be very conveniently labelled with digoxigenin-11-dUTP (Boehringer-Mannheim) by incorporating
一文知曉PCR，定量PCR與數字PCR的實驗方法與選擇（一）
從1985年至今的30多年時間里，PCR分析經歷了三代技術的發展。第一代傳統PCR技術，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產物進行定性分析。第二代熒光定量PCR技術，通過在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監控PCR進程，最后用Cq值對基因進行定量分析。第三代數字PCR技術，通過將P
PCR實驗技術（一）
PCR（聚合酶鏈式反應）【原理】PCR（polymerase?chain?reaction）用于在體外將微量的目標DNA大量擴增，以便進行分析。反應體系：①樣品DNA；②引物（primer），是人工合成的一對寡核苷酸鏈（約15-20個核苷酸），用于擴增夾在雙引物與模板DNA互補區之間的區域；③4種d
免疫PCR：基本實驗步驟
主要程序（1） 抗原+生物素化抗體→抗原-生物素化抗體復合物；（2） 加親合素→抗原-生物素化抗體-親合素復合物；（3） 加生物素化DNA→抗原-生物素化抗體-親合素-生物素化DNA；（4） PCR擴增生物素化DNA部分。實驗步驟（1）制備生物素化DNA將噬粒 BLuescript skt,用生物素
建立PCR實驗室的基本條件（一）
???? 臨床基因擴增實驗室采用PCR技術用于臨床基因診斷，由于PCR技術對所檢測的核酸模板進行大量擴增，容易出現實驗室污染導致臨床檢測標本假陽性結果；另外由于PCR技術要求高、影響因素多（特別是RNA標本），實驗過程處理不當易導致核酸模板無擴增現象，導致臨床標本假陰性結果。因此臨床基因擴增檢驗
PCR檢測方法（一）
PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。污染原因一、標本間交叉污染：標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染；標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導致
熒光定量PCR實驗基本步驟
1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；2、引物、探針的設計；3、引物探針的合成；? ??4、反應體系的配制；? ??5、反應條件的設定；? ??6、反應體系和條件的優化；? ??7、熒光曲線和數據分析；? ??8、標準品的制備；
原位PCR的基本方法
①固定組織或細胞:將組織細胞固定于預先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛處理，再滅活除去細胞內源性過氧化物酶.②蛋白酶K消化處理:用60ug/ml的蛋白酶K將固定好的組織細胞片55℃消化處理2h后，96℃2min以滅活蛋白酶K.③PCR擴增:在組織細胞片上，加PCR反應液，覆蓋并加液體石蠟后，直接
一文知曉PCR，定量PCR與數字PCR的實驗方法與選擇（二）
數字 PCR數字 PCR 是通過將樣本DNA隨機分布至獨立的反應單元中，每個反應單元中包含或者不包含1個或多個拷貝的目標分子，所有獨立的反應單元進行平行擴增后，對每個反應單元的陰性或者陽性熒光信號進行檢測并進行統計學分析，就可以計算出原始樣本的拷貝數，無需參考標準品或內源性對照品，也不需要標準曲
BioTNT－PCR－Array實驗操作（一）
一．用戶需要自備的材料和儀器 Biotnt First Strand cDNA Synthesis Kit：A2010B0B03 ；Biotnt qPCR Premix Kit： A2010A0112；RNA 抽提：推薦使用Qiagen RNeasy Mini Kit (50) 74104，RNas
PCR實驗操作常見問題及解決方法（一）
cDNA產量的很低可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺*最常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系*與反應起始
PCR實驗方法步驟
PCR在分子克隆和DNA分析中有多種用途，下面小編就向大家介紹PCR實驗方法步驟：方法1/4在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。??????10×PCR buffer????????????????????5 μl???? dNTP mix （2mM）?????????????
一文知曉PCR，定量PCR，數字PCR方法選擇
從1985年至今的30多年時間里，PCR分析經歷了三代技術的發展。diyi代傳統PCR技術，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產物進行定性分析。第二代熒光定量PCR技術，通過在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監控PCR進程，最后用Cq值對基因進行定量分析。第三代數字PCR技術，通過
差示反轉錄PCR實驗（一）
差示反轉錄PCR也稱為mRNA差異顯示技術，它是將mRNA反轉錄技術與PCR技術二者相互結合發展起來的一種RNA指紋圖譜技術，具有簡便、靈敏、RNA用量少、效率高、可同時檢測兩種或兩種以上經不同處理或處于不同發育階段的樣品，該方法自問世以來已被廣泛用于差異表達基因的克隆鑒定研究中。實驗方法實驗方法原
PCR引物設計及評價實驗（一）
實驗方法原理聚合梅鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術，是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法，故又稱基因的體外擴增法。PCR技術已成為分子生物學研究中使用最多，最廣泛的手段之一，而引物設計是PCR技術中至關重要的一環，使用不合適的PCR引物容
PCR實驗室SOP文件（一）
目?? 錄文件名稱：管理文件?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ???? 頁碼：1. PCR實驗室設置及管理 ………………
實驗相關技術－|－PCR方法簡介
PCR是聚合酶鏈式反應的簡稱，是一種酶促化學反應，可以在試管里將待測的目的基因在很短的時間內擴增物十萬倍乃至上百萬倍，大大提高了基因診斷的靈敏度，降低了分析的難度。PCR法是目前基因診斷中使用最多的方法。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點；能在一個試管內將所要研究
RTPCR實驗方法
RT-PCR定義：是指對組織或細胞的總RNA進行抽提，把RNA反轉錄為cDNA，然后設計目的基因引物進行PCR，瓊脂糖電泳并數碼拍照，分析電泳條帶灰度值，判斷目的基因mRNA轉錄水平的相對量的變化。 RT-PCR流程簡介 一、抽提RNA： 1、防止RNA酶污染 180℃的高溫下
知曉PCR，定量PCR與數字PCR的實驗方法與選擇
從1985年至今的30多年時間里，PCR分析經歷了三代技術的發展。一代傳統PCR技術，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產物進行定性分析。第二代熒光定量PCR技術，通過在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監控PCR進程，最后用Cq值對基因進行定量分析。第三代數字PCR技術，通過將PC
實時熒光定量PCR具體實驗步驟（一）
1 樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無色
如何做好熒光定量PCR實驗？（一）
熒光定量PCR實驗指南一、基本步驟：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；2、引物、探針的設計；3、引物探針的合成；4、反應體系的配制；5、反應條件的設定；6、反應體系和條件的優化；7、熒光曲線和數據分析；8、標準品的制備；二、技術關鍵： 1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比對；從h