用于激酶分析的細胞裂解實驗
實驗方法原理 實驗材料 培養細胞（貼壁貼壁細胞在100 mm 組織培養板中約 70% 生長成片／懸浮細胞濃度 為 10^6 細胞／ml）試劑、試劑盒 PBS裂解緩沖液蛋白酶抑制劑儲存液儀器、耗材 微量離心機實驗步驟 1. 用預冷的 PBS 洗細胞 2 次，將最后的洗液盡可能吸盡。2. 加入 0.75 ml 裂解緩沖液重懸 2 × 107 個細胞，若是貼壁細胞必須完全覆蓋。加入蛋白酶抑制劑儲存液，使其終濃度為 1 mmol/L PMSF，100 μmol/L 苯甲脒，5 μg/ml 亮抑蛋白酶肽，5 μg/ml抑胃酶肽 A，5 μg/ml抗蛋白酶。3. 4°C 冰浴細胞 10 min，刮離細胞并將裂解液移至標記的微量離心管中。4. 4°C，最大速度離心 10 min，小心地將上清移至新微量離心管中，迅速進行后續實驗。注意事項 若用于免疫沉淀（先使用 25%～50% 的裂解物進行初試驗，再依據結果進行裂解物量的調整）和簡單純......閱讀全文
DNA裂解分析實驗_個體核的PI熒光
實驗材料懸浮細胞試劑、試劑盒低滲熒光染料溶液儀器、耗材組織培養板實驗步驟1. 在 96 孔圓底組織培養板中加入 100 μl 懸浮細胞，200 g 離心 5 分鐘。2. 吸出上清，用 250 μl 低滲熒光染料溶液溶解沉淀細胞，用移液管輔助混勻細胞。3. 樣品移至 FACS 微管，旋轉攪拌，冰上避光
DNA裂解分析實驗_個體核的PI熒光
實驗材料懸浮細胞試劑、試劑盒低滲熒光染料溶液儀器、耗材組織培養板實驗步驟1. 在 96 孔圓底組織培養板中加入 100 μl 懸浮細胞，200 g 離心 5 分鐘。2. 吸出上清，用 250 μl 低滲熒光染料溶液溶解沉淀細胞，用移液管輔助混勻細胞。3. 樣品移至 FACS 微管，旋轉攪拌，冰上避光
凝膠中激酶直接分析實驗——－直接分析
蛋白激酶的分析是使用標記的供體底物，當酶樣品中含有磷酸轉移酶活性時，蛋白 質或多肽受體底物中標記物的積累就很容易被檢出。實驗方法原理鹽酸胍或脲都能使蛋白質變性，選用哪一種取決于不同的激酶，但一般首選鹽酸胍，因為對大多數激酶而言它的變性效果更好。實驗材料10 mmol L 激酶底物有激酶活性的酶樣品試
堿裂解法提取質粒實驗技術分析
堿裂解法提取質粒實驗技術分析[實驗原理]羊源性成分核酸檢測PCR-熒光探針試劑盒堿裂解法提取質粒是根據共價閉合環狀質粒DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們。在pH值介于12.0~12.5這個狹窄的范圍內,線性的DNA雙螺旋結構解開而被變性,盡管在這樣的條件下,共價閉環質粒DNA的氫鍵會
哪些組織或細胞適合用于細胞周期分析實驗？
以下組織或細胞常用于細胞周期分析實驗：腫瘤組織細胞：例如乳腺癌細胞、肺癌細胞、結腸癌細胞等，研究腫瘤細胞的異常增殖和細胞周期調控機制。體外培養的細胞系：如 HeLa 細胞（宮頸癌細胞系）、HepG2 細胞（肝癌細胞系）、MCF-7 細胞（乳腺癌細胞系）等，這些細胞系具有穩定的生長特性和易于操作的優點
非同位素分析基因活性實驗——凍融裂解細胞熒光素酶分析
實驗材料哺乳動物細胞試劑、試劑盒PBS儀器、耗材培養皿細胞刮子離心機實驗步驟1. ?用PBS分別洗3個60 mm 培養皿中的轉染了熒光素酶質粒的細胞。?2. ?每只培養皿中加1 ml 提取緩沖液，立即用橡膠刮子刮下細抱，移至1.5 ml 微量離心管中。離心15~30 s，棄上清。3. ?在細胞沉淀中
乙酸鉀溶液（用于堿裂解）的配制
在60ml?5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度5mol/L的溶液。
培養細胞標記和裂解物的制備實驗
實驗材料?培養細胞試劑、試劑盒?DMEMHClTBSTris儀器、耗材?微量離心管Plexiglas盒吸頭細胞刮子冷凍離心機實驗步驟 1.? 培養待標記的細胞至適當的生長期。?對于貼壁細胞：?2a.? 吸去培養液，用37℃的含血清不加標記物的標記培養液洗盡殘存的含磷酸鹽培養液，吸盡該培養液。?3a.
培養細胞標記和裂解物的制備實驗
溫和去污裂解法 SDS煮沸法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 培養細胞 試劑、試劑盒
培養細胞標記和裂解物的制備實驗
溫和去污裂解法 SDS煮沸法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 培養細胞 試劑、試劑盒
哪些細胞周期蛋白可以用于細胞周期分析實驗？
以下是一些常用于細胞周期分析實驗的細胞周期蛋白：Cyclin D：在細胞周期的 G1 期發揮作用，其表達水平與 G1 期進程相關。Cyclin E：同樣在 G1 期起作用，促進細胞從 G1 期向 S 期過渡。Cyclin A：在 S 期和 G2 期表達，對 DNA 合成和細胞進入 M 期有重要作用。
DNA裂解分析實驗_乙醇固定后PI染色
實驗材料細胞試劑、試劑盒EDTA-PBS洗滌緩沖液乙醇RNA 酶PI 溶液儀器、耗材流式細胞計量術實驗步驟1. 在 5 mmol/L EDTA-PBS 中洗 1X106?細胞，重懸于 300 μl 洗滌緩沖液中。加 700 μl 100% 的冰冷乙醇，滴加，并輕微攪拌。旋轉攪拌混勻。2. 14000
美研發出用于細胞分析的廉價“芯片實驗室”
美國研究人員研發出一種“芯片實驗室”，可用于醫學研究和早期診斷所需要的細胞分析。由于造價低廉，研究人員認為這項新技術有望給傳統醫療診斷帶來變革，造福缺醫少藥的不發達地區。 在各種不同細胞中分離出罕見細胞和分子并加以分析，這對于診斷癌癥等致命疾病非常關鍵。在發展中國家，這類診斷面臨資源短缺、設施
細胞裂解液的制備
一、試劑準備1、新鮮配制冷的 RIPA 裂解緩沖液:? ?? ?150 mM NaCL? ?? ?1% NP-40 (去垢劑)? ??? ?? ?0.1% SDS (去垢劑)? ?? ?2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制劑) (使用前加入)? ?? ?2ug/ml Leupeptin (
制備細胞裂解液
實驗流程：1. 收集胰蛋白酶消化的細胞并離心，用PBS清洗。2. 用100μl 裂解緩沖液冰浴溶解沉淀10min（每500000個細胞20μl裂解緩沖液）。3. 10000rpm，4°C離心10min，取上清轉移至新管。4. 用考馬斯亮藍法檢測蛋白質濃度。5. 用裂解緩沖液將溶液濃度調到5mg/ml
DNA裂解分析實驗_瓊脂糖凝膠電泳
實驗材料細胞試劑、試劑盒溶解緩沖液RNA 酶A T1 混合液蛋白酶 KDNA 加樣緩沖液儀器、耗材Eppendorf 管移液管瓊脂糖凝膠實驗步驟1. 將 5X105?細胞移入無菌的 1.5 ml Eppendorf 管中，4℃ 2000 r/min 離心 5 分鐘，棄上清。2. 加入 20 μl 溶
細胞/組織裂解液的制備
溶液準備 2×樣品緩沖液：130mM Tris-HCl （ pH8.0 ） , 20% （ v/v ） 甘油 , 4.6% （ w/v ） SDS , 0.02% 溴酚藍 , 2%DTT PBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4 ，50
用于表達分析的－mRNA－的制備實驗
基本方案 用于表達監測以及與寡核苷酸芯片雜交的 mRNA 擴增 備擇方案 cDNA 和體外轉錄產物的固相可逆固定（SPRI）純化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 擴增
用于表達分析的－mRNA－的制備實驗
實驗方法原理 擴增步驟完全決定于干凈、完整的起始 RNA。對培養的細胞，作者采用胍鹽裂解再用樹脂純化（如 Qiagen RNeasy Kit）的方案。 擴增 mRNA 可從 Poly（A）＋或總 RNA 開始。盡管 poly（A）＋靈敏度更高，因為除 掉了 cDNA 反應期間大部分與 rRN
用分離的亞細胞組分進行激酶分析
實驗材料細胞器樣品試劑、試劑盒激酶分析緩沖液ATP儀器、耗材SDS-PAGE 凝膠實驗步驟1. 準備反應混合物：反應體積通常是 50~100 ml。5X 激酶分析緩沖液????????????????????????????? 10 μl[γ-32P] ATP（終濃度 5 μCi/5μmol/L)?
蛋白激酶C異構體分析實驗
實驗方法原理 實驗材料 有 PKC 活性的酶樣品試劑、試劑盒 [γ-32P] ATP 溶液PKC 反應緩沖液TCASDS - PAGE 樣品緩沖液儀器、耗材 30℃ 水浴P81 磷酸纖維素膜離心管實驗步驟 1. 每個分析反應按以下比例將各反應組分加入 1.5 ml 微量離心管中：4 μl 5 × P
酪蛋白激酶分析實驗_用－β酪蛋白
實驗材料β-酪蛋白（溶于水）有酪蛋白激酶活性的酶樣品試劑、試劑盒[γ-32P] ATP 溶液酪蛋白激酶反應緩沖液TCASDS-PAGE 樣品緩沖液儀器、耗材30℃ 水浴P81 磷酸纖維素膜離心管離心機實驗步驟1. 每個鑒定反應按以下比例將各反應組分加入 1.5 ml 微量離心管中：4 μl 5 ×
酪蛋白激酶分析實驗_用多肽底物
實驗方法原理酪蛋白激酶 I 可用多肽 AspAspAspGluGluSerIleThrArgArg 進行分析，最近釀蛋白激酶 II 也已被特異性的多肽底物分析，如 ArgArgArgGluGluGluThrGluGluGlu（下劃線殘基是磷酸受體）。兩個多肽均可通過精氨酸殘基結合到 P81 磷酸纖維
蛋白激酶C異構體分析實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 有 PKC 活性的酶樣品
蛋白激酶C異構體分析實驗
實驗材料有 PKC 活性的酶樣品試劑、試劑盒[γ-32P] ATP 溶液PKC 反應緩沖液TCASDS - PAGE 樣品緩沖液儀器、耗材30℃ 水浴P81 磷酸纖維素膜離心管實驗步驟1. 每個分析反應按以下比例將各反應組分加入 1.5 ml 微量離心管中：4 μl 5 × PKC 反應緩沖液1 μ
細胞裂解液怎么配制
裂解細胞的話：新鮮配制冷的 RIPA 裂解緩沖液:先配150 mM NaCL+ 1% NP-40 (去垢劑) + 0.1% SDS (去垢劑)+2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制劑) (使用前加入)+2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制劑) (使用前加入)或1 mM PMSF
菌體/細胞裂解法匯總
一、反復凍融法：1、將細胞在-20度以下冰凍，室溫融解，反復幾次，由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細胞結構破碎。2、至少3次以上凍溶。3、IFCC推薦法：收集細胞懸液，4℃低溫離心（3000rpm，5min），棄上清，加入一定量PBS（200ul），輕輕吹打混勻，-200C 冷
細胞裂解決辦法
??關于培養細胞樣品：?? ? 1.融解ripa裂解液，混勻。取恰當量的裂解液，在運用前數分鐘內參加pmsf，使pmsf的終濃度為1mm。?? ? 2.關于貼壁細胞：去除培養液，用pbs、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(假如血清中的蛋白沒有干擾，能夠不洗)。按照6孔板每孔參加150-250微升裂解液的
淋巴細胞介導的細胞裂解的定義
中文名稱淋巴細胞介導的細胞裂解英文名稱lymphocyte-mediated cell lysis定 義即細胞毒性T細胞或NK細胞可通過顆粒胞吐而分泌穿孔素和顆粒酶等效應分子，損傷靶細胞膜并使之裂解。應用學科免疫學（一級學科），應用免疫（二級學科），免疫學檢測和診斷（三級學科）
淋巴細胞介導的細胞裂解的定義
中文名稱淋巴細胞介導的細胞裂解英文名稱lymphocyte-mediated cell lysis定 義即細胞毒性T細胞或NK細胞可通過顆粒胞吐而分泌穿孔素和顆粒酶等效應分子，損傷靶細胞膜并使之裂解。應用學科免疫學（一級學科），應用免疫（二級學科），免疫學檢測和診斷（三級學科）