聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定IgG純度3
4.加樣作為分析用的PAGE加樣量僅需幾微克,2-3ul血清電泳后就能分出幾十條蛋白區帶。為防止樣品擴散,應在樣品中加入等體積40%蔗糖(內含少許溴酚蘭)。用微量注射器取5ul上述混合液,通過緩沖液,小心地將樣品加到凝膠凹形樣品槽底部,待所有凹形樣品槽內都加了樣品,即可開始電泳。5.電泳將直流穩壓電泳儀的正極與下槽連接,負極與上槽連接(方向切勿接錯)。接通冷卻水,打開電泳儀開關,開始時將電流調至 10 mA 。待樣品進入分離膠時將電流調至20-30mA。當藍色染料遷移至距離橡膠框下緣1cm時,將電流調回到零,關電源及冷卻水。分別收集上、下貯槽電極緩沖液置試劑瓶中,4℃貯存還可用1-2次。旋松固定螺絲,取出硅橡膠框,用不銹鋼鏟輕輕將一塊玻璃板撬開移去,在膠板一端切除一角作為標記,將膠板移至大培養皿中染色。6.固定,染色本實驗采用0.05%考馬斯亮藍R250(內含20%磺基水楊酸)染色液,染色與固定同時進行,使染色液沒過膠板,染......閱讀全文
聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定IgG純度3
4.加樣作為分析用的PAGE加樣量僅需幾微克,2-3ul血清電泳后就能分出幾十條蛋白區帶。為防止樣品擴散,應在樣品中加入等體積40%蔗糖(內含少許溴酚蘭)。用微量注射器取5ul上述混合液,通過緩沖液,小心地將樣品加到凝膠凹形樣品槽底部,待所有凹形樣品槽內都加了樣品,即可開始電泳。5.電泳將直流穩壓電
聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定IgG純度
一)原? 理?由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH
聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定IgG純度2
④ 濃縮膠緩沖液:稱取1mol/L HCl 48ml,Tris5.98g,TEMED 0.46ml,加重蒸水至80ml,調pH6.7,用重蒸水定容至100ml,置棕色瓶內,4℃貯存。⑤ 濃縮膠貯液:稱Acr10g,Bis2.5g 加重蒸水溶解后定容至100ml,過濾后置棕色瓶內,4℃貯存。⑥ 40%
聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定IgG純度1
(一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也
聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度3
3.制備凝膠板不連續體系采用不同孔徑及pH的分離膠與濃縮膠 ,凝膠制備應分2步進行。① 分離膠的制備:根據實驗要求,選擇最終丙烯酰胺的濃度,本實驗需20ml pH8.9 7.0 %PAA溶液,其加膠方式不同于連續系統。混合后的凝膠溶液,用細長頭的滴管加至長、短玻璃板間的窄縫內,加膠高度距樣品模板
聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度
由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成「連續系統」和「不連續系統」兩種電泳系統。「不連續系統」最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及 pH 不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH 也不相同
聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度
(一)原理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不
聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度(一)
(一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不
聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度(二)
(三)操作方法1.安裝夾心式垂直板電泳槽夾心式垂直板電泳槽操作簡單,不易滲漏。這種電泳槽兩側為有機玻璃制成的電極槽,兩個電極槽中間夾有一個凝膠模,該模由一個上框形凝膠框、長與短玻璃板及樣品槽模板(梳子)所組成。電泳槽由上儲槽(白金電極在上或面對短玻璃板),下儲槽(白金電極在下或面對長玻璃板)和回紋狀
聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度(二)
(三)操作方法1.安裝夾心式垂直板電泳槽夾心式垂直板電泳槽操作簡單,不易滲漏。這種電泳槽兩側為有機玻璃制成的電極槽,兩個電極槽中間夾有一個凝膠模,該模由一個上框形凝膠框、長與短玻璃板及樣品槽模板(梳子)所組成。電泳槽由上儲槽(白金電極在上或面對短玻璃板),下儲槽(白金電極在下或面對長玻璃板)和回紋狀
聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度1
(一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也
聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度(一)
(一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也
聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度2
③ 分析純過硫酸胺(AP)(AR) 0.14g加重蒸水至100ml,置棕色瓶,4℃儲存僅能用一周,最好當天配制。上述3種試劑用于制備分離膠。④ 濃縮膠緩沖液:稱取1mol/L HCl 48ml,Tris5.98g,TEMED 0.46ml,加重蒸水至80ml,調pH6.7,用重蒸水定容至100ml,
聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度(一)
(一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也
聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度(二)
(三)操作方法1.安裝夾心式垂直板電泳槽夾心式垂直板電泳槽操作簡單,不易滲漏。這種電泳槽兩側為有機玻璃制成的電極槽,兩個電極槽中間夾有一個凝膠模,該模由一個上框形凝膠框、長與短玻璃板及樣品槽模板(梳子)所組成。電泳槽由上儲槽(白金電極在上或面對短玻璃板),下儲槽(白金電極在下或面對長玻璃板)和回紋狀
蛋白質技術專題:聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度
(一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不
蛋白質技術專題:聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度
由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不相同。在
農作物種子純度鑒定方法綜述3
4分子標記鑒定法廣義的分子標記是指可遺傳的并可檢測的DNA序列或蛋白質。蛋白質標記包括種子貯藏蛋白和同工酶(指由一個以上基因位點編碼的酶的不同分子形式)及等位酶(指由同一基因位點的不同等位基因編碼的酶的不同分子形式)。狹義的分子標記概念只是指DNA標記,而這個界定現在被廣泛采納。由于DNA分子中堿基
SDSPAGE測定蛋白質分子量及蛋白質的純度鑒定
一、實驗目的與原理蛋白質在聚丙烯酰胺凝膠中電泳時,它的遷移取決于它所帶電荷以及分子大小和形狀等因素。1967年Shapiro等人發現,如果在聚丙烯酰胺系統中加入陰離子去污劑十二烷基磺酸鈉(SDS),大多數蛋白質能與SDS按一定比例結合,即每克蛋白質結合1.4g的SDS-復合物都帶上相同密度的負電荷,
蛋白質聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE,polyacrylamide-gel-...3
【目的和要求】1. 掌握聚丙烯酰胺凝膠電泳的基本原理2. 掌握垂直板狀凝膠電泳槽的使用和凝膠的配制方法。3. 學會利用相對遷移率分析蛋白質種類。【實驗原理】帶電顆粒在電場的作用下,向著與其相反的電極移動,稱為電泳。電泳做為一種物質分離及鑒定技術,其原理在于任一物質質點,由于其本身的解離作用或由于表面
銅純度的鑒定方法
原子吸收法。用原子吸收火花光譜直讀儀,很準的,而且很快。在分析天平上稱重0.1000g放在燒杯里面,然后加20ml王水,放在電爐上溶完全,配到比色管里面直接就可以拿到儀器上去看了。不過高純度的還是要用容量法才可以。硫代硫酸納滴定,具體方法不好說。你還是拿到專門的化驗機構去化驗吧。
聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)
? 原理 ? 聚丙烯酰胺(polyacrylamide,PAA)凝膠是丙烯酰胺(acry—lamide,Acr),在交聯劑甲叉雙丙烯酰胺(bisacrylamide,Bis)的作用下經聚合而形成的一種大分子化合物。 Acr的聚合作用只有在自由基存在時才能發生,需要一個催化誘發劑系
慧眼識金丨純度計量助力黃金純度鑒定
黃金具有重要的貨幣屬性及裝飾與保值功能,在人類幾千年的歷史中始終是財富和華貴的象征。黃金相關國家標準對雜質元素規定了明確的限量,例如,《金條》(GB/T 26021)對銀(Ag)、銅(Cu)等十余種雜質元素進行了限量,《高純金》(GB/T 25933)規定了更多雜質(21種)的限量要求。由于黃金
PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)實驗
【實驗原理】聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacryamide gel electropHoresis, PAGE)是由丙烯酰胺單體和交聯劑甲叉雙丙烯酰胺在催化作用下形成的三維網狀結構物質。在不連續聚丙烯酰胺凝膠電泳中,凝膠的制作是分層進行的,因此凝膠不僅有分子篩效應,還具有濃縮效應。和瓊脂糖凝膠相
聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)原理
聚丙烯酰胺凝膠電泳(英語:polyacrylamidegelelectrophoresis,簡稱page)作用:用于分離蛋白質和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(簡稱acr)和交聯劑n,n’一亞甲基雙丙烯酰胺(簡稱bis)在催化劑過硫酸銨(ap),n,n,n’,n’四甲基乙二胺(temed)作用
聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)原理
聚丙烯酰胺凝膠電泳(英語:polyacrylamidegelelectrophoresis,簡稱page)作用:用于分離蛋白質和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(簡稱acr)和交聯劑n,n’一亞甲基雙丙烯酰胺(簡稱bis)在催化劑過硫酸銨(ap),n,n,n’,n’四甲基乙二胺(temed)作用
化合物純度的鑒定方法
TLC純度的鑒定:1 展開溶劑的選擇,不只是至少需要3種不同極性展開系統展開,是首先要選擇三種分子間作用力不同的溶劑系統,如氯仿\甲醇,環己烷\乙酸乙酯,正丁醇\醋酸\水,分別展開來確定組分是否為單一斑點。這樣做的好處是很明顯的,通過組份間的各種差別將組分分開,有可能幾個相似組份在一種溶劑系統中是單
化合物純度的鑒定方法
TLC純度的鑒定:1 展開溶劑的選擇,不只是至少需要3種不同極性展開系統展開,是首先要選擇三種分子間作用力不同的溶劑系統,如氯仿\甲醇,環己烷\乙酸乙酯,正丁醇\醋酸\水,分別展開來確定組分是否為單一斑點。這樣做的好處是很明顯的,通過組份間的各種差別將組分分開,有可能幾個相似組份在一種溶劑系統中是單
蛋白分析鑒定整體解決方案
蛋白分析鑒定整體解決方案目前對于蛋白的分析和鑒定,常用的經典方法有聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE),蛋白免疫印跡(Western Blot)Elisa等。聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)經常用于提純過程中純度的檢測,純化的蛋白通常在SDS電泳上應只有一條帶,但如果蛋白質是由于不同的亞基組
核酸鑒定方法之濃度/純度及完整性鑒定
核酸純化在分子生物學實驗室已經廣泛應用。怎樣獲得高質量、高純度的DNA或RNA樣品對下游實驗的順利進行至關重要,因此,對純化后的核酸進行鑒定也是必不可少的步驟。本文簡單的回顧學習一下核酸鑒定的方法。核酸鑒定包括:濃度/純度鑒定+完整性鑒定 1.濃度/純度鑒定 (1)紫外分光光度計:原理:由于核酸中的