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  • 聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定IgG純度1

    (一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不相同。在實驗中,電泳凝膠分為兩層:上層膠為低濃度的大孔膠,稱為濃縮膠或成層膠,配制此層膠的緩沖液是Tris-HCl,pH6.7;下層膠則是高濃度的小孔膠,稱為分離膠或電泳膠,成膠的緩沖液是Tris-HCl,pH8.9。電泳槽中的電極緩沖液則是Tris-甘氨酸,pH8.3。可見,凝膠濃度、成膠成分、pH與電泳液緩沖系統各不相同,形成了一個不連續系統。 電泳時,蛋白質樣品放置在濃縮膠上,為防止蛋白質樣品在電極緩沖液中擴散,因而加入等體積的40%蔗糖或50%甘油與之混合,以提高密度;為觀察蛋白質樣品泳動的情況,樣品中還加入溴酚藍等示蹤......閱讀全文

    聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定IgG純度1

    (一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也

    聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定IgG純度

    一)原? 理?由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH

    聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定IgG純度2

    ④ 濃縮膠緩沖液:稱取1mol/L HCl 48ml,Tris5.98g,TEMED 0.46ml,加重蒸水至80ml,調pH6.7,用重蒸水定容至100ml,置棕色瓶內,4℃貯存。⑤ 濃縮膠貯液:稱Acr10g,Bis2.5g 加重蒸水溶解后定容至100ml,過濾后置棕色瓶內,4℃貯存。⑥ 40%

    聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定IgG純度3

    4.加樣作為分析用的PAGE加樣量僅需幾微克,2-3ul血清電泳后就能分出幾十條蛋白區帶。為防止樣品擴散,應在樣品中加入等體積40%蔗糖(內含少許溴酚蘭)。用微量注射器取5ul上述混合液,通過緩沖液,小心地將樣品加到凝膠凹形樣品槽底部,待所有凹形樣品槽內都加了樣品,即可開始電泳。5.電泳將直流穩壓電

    聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度1

    (一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也

    聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度

    由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成「連續系統」和「不連續系統」兩種電泳系統。「不連續系統」最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及 pH 不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH 也不相同

    聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度

    (一)原理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不

    聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度(一)

    (一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不

    聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度(二)

    (三)操作方法1.安裝夾心式垂直板電泳槽夾心式垂直板電泳槽操作簡單,不易滲漏。這種電泳槽兩側為有機玻璃制成的電極槽,兩個電極槽中間夾有一個凝膠模,該模由一個上框形凝膠框、長與短玻璃板及樣品槽模板(梳子)所組成。電泳槽由上儲槽(白金電極在上或面對短玻璃板),下儲槽(白金電極在下或面對長玻璃板)和回紋狀

    聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度(二)

    (三)操作方法1.安裝夾心式垂直板電泳槽夾心式垂直板電泳槽操作簡單,不易滲漏。這種電泳槽兩側為有機玻璃制成的電極槽,兩個電極槽中間夾有一個凝膠模,該模由一個上框形凝膠框、長與短玻璃板及樣品槽模板(梳子)所組成。電泳槽由上儲槽(白金電極在上或面對短玻璃板),下儲槽(白金電極在下或面對長玻璃板)和回紋狀

    聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度(一)

    (一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也

    聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度2

    ③ 分析純過硫酸胺(AP)(AR) 0.14g加重蒸水至100ml,置棕色瓶,4℃儲存僅能用一周,最好當天配制。上述3種試劑用于制備分離膠。④ 濃縮膠緩沖液:稱取1mol/L HCl 48ml,Tris5.98g,TEMED 0.46ml,加重蒸水至80ml,調pH6.7,用重蒸水定容至100ml,

    聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度(一)

    (一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”最大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也

    聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度(二)

    (三)操作方法1.安裝夾心式垂直板電泳槽夾心式垂直板電泳槽操作簡單,不易滲漏。這種電泳槽兩側為有機玻璃制成的電極槽,兩個電極槽中間夾有一個凝膠模,該模由一個上框形凝膠框、長與短玻璃板及樣品槽模板(梳子)所組成。電泳槽由上儲槽(白金電極在上或面對短玻璃板),下儲槽(白金電極在下或面對長玻璃板)和回紋狀

    聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度3

    3.制備凝膠板不連續體系采用不同孔徑及pH的分離膠與濃縮膠 ,凝膠制備應分2步進行。① 分離膠的制備:根據實驗要求,選擇最終丙烯酰胺的濃度,本實驗需20ml pH8.9 7.0 %PAA溶液,其加膠方式不同于連續系統。混合后的凝膠溶液,用細長頭的滴管加至長、短玻璃板間的窄縫內,加膠高度距樣品模板

    蛋白質技術專題:聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度

    (一)原 理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不

    蛋白質技術專題:聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度

      由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,因此可以形成“連續系統”和“不連續系統”兩種電泳系統。“不連續系統”大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是:(1)使用兩種不同濃度的凝膠系統;(2)配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不相同。在

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