Northernblotting操作步驟
1. 取RNA2. 將電泳槽和板，梳齒浸泡在3%H2O2中20-30分鐘，并吹干3. 跑 1%瓊脂糖凝膠，檢測樣本RNA含量4. 變性膠在桌面上利用保險膜鋪出一塊干凈的區域，將1.95g 瓊脂糖加入 110ml 的 DEPC-H2O （加熱前可在三角瓶上做一個記號，在加熱后把蒸發的水分補足）加熱沸騰，冷卻（補水）至60度左右。加入15ml 10xMOPS (PH8.0)和25ml 甲醛，混勻后倒膠，冷卻待用。5.電泳液（1L）100ml 10xMOPS (PH7.0)800ml DEPC-H2O100ml 甲醛6.sample buffer(-70度保存)1650 μl 體系：200μl 10xMOPS (PH8.0)350μl 甲醛1ml 甲酰胺100μl loading buffer(DNA 用染料)用槍吹吸混勻以樣品RNA : sample buffer= 1:3 (v:v) 的比例加入 （RNA marker 同......閱讀全文
Northern－blotting操作步驟
1. 取RNA2. 將電泳槽和板，梳齒浸泡在3%H2O2中20-30分鐘，并吹干3. 跑 1%瓊脂糖凝膠，檢測樣本RNA含量4. 變性膠在桌面上利用保險膜鋪出一塊干凈的區域，將1.95g 瓊脂糖加入 110ml 的 DEPC-H2O （加熱前可在三角瓶上做一個記號，在加熱后把蒸發的水分補足）加熱
Northern－Blotting反應方法步驟
Northern雜合反應的步驟主要包括：（1） 加入核酸探針，使與固定于尼龍膜上的特定RNA 進行雜合反應；（2） 待雜合反應結束后以含鹽緩沖液與SDS 洗掉非專一性結合于尼龍膜上的核酸探針。 進行反應時應注意下列幾個問題：a. 實驗操作過程仍應盡可能避免RNase 的污染；b. 反應前應先進行雜合
Northern－Blotting－實驗操作指南
實驗概要本文介紹了Northern Blotting實驗詳細操作流程。實驗材料1. 試劑盒提供NorthernMax (Formaldehyde-Based System for Northern Blots)[Catlog#1940]6ml?? -20℃????? Formaldehyde Loa
Northern－Blotting轉印實驗（毛細管轉移法）
要進行Northern雜合反應前，必須先將RNA自洋菜膠體轉移至硝化纖維紙（nitrocellulose membrane） 或尼龍膜 （nylon membrane） 上，這一個過程稱為轉印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛細管轉移法 （capillary transfer）、
以毛細管轉移方式進行Northern－Blotting轉印實驗
要進行北方雜合反應前，必須先將RNA自洋菜膠體轉移至硝化纖維紙（nitrocellulose membrane） 或尼龍膜 （nylon membrane） 上，這一個過程稱為轉印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛細管轉移法 （capillary transfer）、真空轉移法 （vac
Northern－Blotnorthern雜交
Northern BlotPreparation of Formaldehyde Agarose GelThe gel conditions (1% agarose, 1X MOPS, 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electroph
Northern
繼分析DNA的Southern雜交方法出現后，1977年Alwine等人提出一種與此相類似的、用于分析細胞總RNA或含poly A尾的RNA樣品中特定mRNA分子大小和豐度的分子雜交技術，這就是與Southern相對應而定名的Northern雜交技術。這一技術自出現以來，已得到廣泛應用，成為分析mR
SOUTHERN－BLOTTING
Materials:Whatman 3 mm Blotting Papernitrocellulose (Schleicher & Schuell, Amersham) or nylon membrane filter (Amersham).Paper towels (preferably C-fo
Western－Blotting
1. Optional: "Renature" gel- this is thought to permit some refolding of proteins and may be important in finding epitope recognition of monoclonal an
Western－Blotting
實驗概要Western Blot (AP)主要試劑1. Membrane Blocking buffer:5% Milk ? 0.05% of Tween 20 PBS2. antibody dilution buffer: PBS 0.05% of Tween20 1.0% Milk(or BSA
Northern印跡的制備和Northern印跡
Northern印跡的制備 預備： 1.按下述步驟，每泳道加10～20μg總RNA或 0.5～1μgpoly(A)+RNA進行甲醛/ 瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠放在紫外線透照儀上，旁邊置一標尺進行拍照。 a. 總RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃溫育5min：
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Northern的雜交有哪些過程
Northern雜交的總體過程與Southern雜交相似，只不過在印跡（Blotting）過程中轉移的是RNA而不是DNA，這種將RNA樣品從凝膠轉移濾膜的方法，其設計者為之起了一個與Southern：blotting對應的名稱Northern：blotting。其分子雜交過程與Southern分子
Northern－Blot
Northern Blot Northern Blot ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 20XMOPS 緩沖液 20
Northern雜交
實驗方法原理 轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的靶 RNA 雜交的條件下將膜同探針孵育，而后廣泛洗
Northern雜交
轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的靶 RNA 雜交的條件下將膜同探針孵育，而后廣泛洗膜以去除非特異結合的探針，
Northern雜交
Northern雜交1．在10~20 ml?預雜交液中68℃溫育膜2h。2．若使用雙鏈探針，在100℃下加熱32P標記的雙鏈DNA 5 min，使之變性，然后迅速移至冰水中冷卻。3．把變性的或單鏈放射性標記的探針直接加到預雜交液中，在合適的溫度下繼續溫育12~16h。4．雜交后，將膜從塑料袋中取出，
Northern雜交
實驗概要本實驗介紹了Northern雜交的基本流程。主要試劑液氮，TRIzol ?(Invitrogen)，DEPC水，氯仿，異丙醇，70%酒精，酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)，水飽和酚(PH4.3)，無水乙醇，NaOAc，抽提緩沖液(0.02M ?NaOAc，1 mM EDTA，0.5% SD
Northern－Blot
試劑、試劑盒 20XMOPS 緩沖液 20XSSC 50XDenhardt 液 雜交液 10%SDS儀器、耗材 水平電泳裝置 水浴 硝酸纖維素膜或尼龍膜 3 MM 濾紙 紫外交聯儀 雜交管 雜交爐 [32P] 標記的 DNA 或 RNA 探針實驗步驟 一、材料與設備1) 水平電泳裝置2) 水浴3)
Northern雜交
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的
Histone－blotting－protocol
實驗概要?Western blot detection of histone proteins.?實驗步驟?The ?following protocol refers to the western blot detection of histone ?proteins derived from p
Western－Blotting－Protocol
實驗概要The western blot ?(sometimes called the protein immunoblot) is a widely used analytical ?technique used to detect specific proteins in the given s
Immunoblotting－(Western－Blotting)
實驗概要We provide a protocol for SDS-PAGE, Protein Blotting, Immuno-Detection.主要試劑1.?0.3 M TRIZMA? base (Product No. T1503), 20% methanol.2.?0.025 M TRIZ
Western－Blotting－Protocols
back to topProtocolStandard vs. Rapid Immunodetection ProceduresThere are two types of protocols for immunodetection: Standard and rapid.Standard vs.
Methods－for－the－Detection－of－DAminoAcid－Oxidase2
Results and DiscussionNavigationAbstractIntroductionMaterials and MethodsResults and DiscussionReferencesD-Amino-acid oxidase activity was detected in
Northern－blot技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳 這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳， 因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Mill
Northern－blot技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳 這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳， 因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Mill
Northern－blot實驗
Northern blot技術 Northern Blot ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離，再轉移至尼龍膜等固相膜載體上，