Northern印跡的制備和Northern印跡
Northern印跡的制備 預備： 1.按下述步驟，每泳道加10～20μg總RNA或 0.5～1μgpoly(A)+RNA進行甲醛/ 瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠放在紫外線透照儀上，旁邊置一標尺進行拍照。 a. 總RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃溫育5min： 總RNA（10～20μg） 6.0μl 甲酰胺 12.5μl 10× MOPS緩沖液 2.5μl 甲醛溶液（37％） 4.0μl b. 置冰浴迅速冷卻，加2.5μl上樣緩沖液，并加樣于按如下配制的甲醛 瓊脂/糖凝膠中。 瓊脂糖 1.0g ......閱讀全文
Northern印跡的制備和Northern印跡
Northern印跡的制備 預備： 1.按下述步驟，每泳道加10～20μg總RNA或 0.5～1μgpoly(A)+RNA進行甲醛/ 瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠放在紫外線透照儀上，旁邊置一標尺進行拍照。 a. 總RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃溫育5min：
Northern印跡和總RNA雜交實驗——Northern印跡分析
試劑、試劑盒甲醛凝膠溶液RNA 電泳緩沖液儀器、耗材凝膠模梳齒凝膠用具實驗步驟1. 用肥皂和水徹底清洗凝膠模，梳齒和凝膠用具。2. 準備甲醛凝膠溶液。甲醛凝膠溶液（300 ml 1％ 瓊脂糖凝膠）：瓊脂糖，3.0 g10x RNA 電泳緩沖液，30 ml? ???Milli-Q 或用玻璃器皿蒸餾過的
Northern－印跡分析實驗
為了確認所選擇 cDNA 確實是差異表達的，建議使用 Northern 印跡分析，而不要用其他的確認技術，比如反向 Northern 雜交（Zhangetal.1996) 或定量 RT-PCR。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒瓊脂糖凝膠菌落裂解緩沖液蒸餾水甲
Northern－印跡分析實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠 菌落裂解緩沖液 蒸餾水 甲醛 甲酰胺預雜交 雜交液 HotPrime cDNA Labeling Kit
Northern－印跡分析實驗
試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠菌落裂解緩沖液蒸餾水甲醛甲酰胺預雜交 雜交液HotPrime cDNA Labeling Kit礦物油MOPS 緩沖液MOPS乙酸鈉EDTAPCR 緩沖液SSCNaClSDSNaClNaH2PO4[a-32P]dATPLgh Rgh 引物鮭魚精 DNATaq DNA
RNA印跡(Northern－Blot)
【實驗原理】將RNA變性及電泳分離后，轉移到固相支持物上，用于與DNA探針雜交以鑒定其中特定 RNA分子的大小與含量。基本原理與Southern印跡相同，但RNA變性方法與DNA不同，不能用堿變性，因為堿會導致RNA的水解。Northern印跡主要用于組織細胞靶基因表達水平的研究以及對同一組織細胞的
組織印跡的Northern雜交
組織印跡的Northern雜交1）硝酸纖維素膜或尼龍膜上的組織印跡1．在塑料板上放置兩層Whatman 1號濾紙，在濾紙上方放上一張普通紙，然后鋪上一層尼龍膜。2．用雙面刀片從植物組織如大豆的莖上切取一塊切片（厚度約為1mm）。如果組織表面是濕的，則在Kimwipes紙上輕輕吸干或先用蒸餾水洗滌幾秒
Northern印跡和總RNA雜交實驗
Northern印跡分析雜交和放射自顯影試劑、試劑盒甲醛凝膠溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?RNA 電泳緩沖液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
Northern印跡和總RNA雜交實驗
試劑、試劑盒 甲醛凝膠溶液RNA 電泳緩沖液儀器、耗材 凝膠模梳齒凝膠用具實驗步驟 1. 用肥皂和水徹底清洗凝膠模，梳齒和凝膠用具。2. 準備甲醛凝膠溶液。甲醛凝膠溶液（300 ml 1％ 瓊脂糖凝膠）：瓊脂糖，3.0 g10x RNA 電泳緩沖液，30 ml ? ??Milli-Q 或用玻璃器皿蒸
Northern印跡和總RNA雜交實驗
Northern印跡分析 雜交和放射自顯影 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 甲醛凝膠溶液 RNA 電泳緩沖液
Northern雜交試驗指導手冊（6）－Northern－印跡雜交
A． 探針準備DIG標記的RNA探針與DNA探針相比，顯示較強的雜交信號和較地的非特異性背景，因此，只要可能選用RNA探針可以比DNA探針獲得更好的雜交結果。如果必須使用DNA探針，建議使用高SDS雜交緩沖液或DIG Easy Hyb以減少背景。在正式雜交試驗之前，優化雜交探針濃度是避免顏色背景所必
Northern印跡和總RNA雜交實驗——雜交和放射自顯影
實驗材料mRNA試劑、試劑盒甲酰胺SSPEDenhardt 試劑SDS儀器、耗材濾膜實驗步驟1. 濾膜進行 1~2 小時預雜交。在 42℃：50% 甲酰胺5x SSPE2 x Denhardt 試劑0.1% SDS或者在 68℃：6x SSC2x Denhardt 試劑0.1% SDS2. 把已變性
Northern－Blotnorthern雜交
Northern BlotPreparation of Formaldehyde Agarose GelThe gel conditions (1% agarose, 1X MOPS, 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electroph
Northern
繼分析DNA的Southern雜交方法出現后，1977年Alwine等人提出一種與此相類似的、用于分析細胞總RNA或含poly A尾的RNA樣品中特定mRNA分子大小和豐度的分子雜交技術，這就是與Southern相對應而定名的Northern雜交技術。這一技術自出現以來，已得到廣泛應用，成為分析mR
Northern雜交
Northern雜交1．在10~20 ml?預雜交液中68℃溫育膜2h。2．若使用雙鏈探針，在100℃下加熱32P標記的雙鏈DNA 5 min，使之變性，然后迅速移至冰水中冷卻。3．把變性的或單鏈放射性標記的探針直接加到預雜交液中，在合適的溫度下繼續溫育12~16h。4．雜交后，將膜從塑料袋中取出，
Northern－Blot
試劑、試劑盒 20XMOPS 緩沖液 20XSSC 50XDenhardt 液 雜交液 10%SDS儀器、耗材 水平電泳裝置 水浴 硝酸纖維素膜或尼龍膜 3 MM 濾紙 紫外交聯儀 雜交管 雜交爐 [32P] 標記的 DNA 或 RNA 探針實驗步驟 一、材料與設備1) 水平電泳裝置2) 水浴3)
Northern雜交
實驗概要本實驗介紹了Northern雜交的基本流程。主要試劑液氮，TRIzol ?(Invitrogen)，DEPC水，氯仿，異丙醇，70%酒精，酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)，水飽和酚(PH4.3)，無水乙醇，NaOAc，抽提緩沖液(0.02M ?NaOAc，1 mM EDTA，0.5% SD
Northern－Blot
Northern Blot Northern Blot ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 20XMOPS 緩沖液 20
Northern雜交
實驗方法原理 轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的靶 RNA 雜交的條件下將膜同探針孵育，而后廣泛洗
Northern雜交
轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的靶 RNA 雜交的條件下將膜同探針孵育，而后廣泛洗膜以去除非特異結合的探針，
Northern雜交
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 轉移并固定到膜上的 RNA 樣品可以與特異的探針雜交，從而用來對所感興趣的 RNA 進行定位。視實驗人員和條件的差異，可以從多種方法中選擇任意一種來標記和檢測探針。用抑制非特異吸收探針的封閉試劑處理膜之后，在適于探針和固定的
Northern雜交步驟和過程
Northern雜交與Southern雜交很相似。主要區別是被檢測對象為RNA,其電泳在變性條件下進行,以去除RNA中的二級結構,保證RNA完全按分子大小分離。變性電泳主要有3種:乙二醛變性電泳、甲醛變性電泳和羥甲基汞變性電泳。電泳后的瓊脂糖凝膠用與Southern轉移相同的方法將RNA轉移到硝酸纖
Northern－blot技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳 這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳， 因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Mill
Northern－blot技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳 這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳， 因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Mill
Northern－blot實驗
Northern blot技術 Northern Blot ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離，再轉移至尼龍膜等固相膜載體上，
Northern－Blot技術
[儀器、試劑、材料]（一）儀器恒溫水浴箱，電泳儀，凝膠成像系統，真空轉移儀，真空泵，UV 交聯儀，雜交爐，恒溫搖床，脫色搖床，漩渦振蕩器，分光光度計，微量移液器，電爐（或微波爐），離心管，燒杯，量筒，三角瓶，等。?（二）材料總RNA樣品或mRNA樣品，探針模板DNA(25 ng)，尼龍膜（三）試劑N
Protocol－of－Northern－blot
Protocol of Northern blot質粒的轉化和擴增質粒的鑒定目的基因片段的切割3.1樣品雙酶切(175μl水解體系)DW 115μlBuffer B(10×) 17.5μlBaM H 15μlPst I 17μlDNA(MMP-9) 16μlBSA 4.5μl37℃水浴，3h。3.2
Northern雜交技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。?含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳，因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Miller，
Northern－blot實驗
實驗方法原理 Northern blot的基本概述是將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離，再轉移至尼龍膜等固相膜載體上，用放射性或非放射性標記DNA或RNA特異性探針對固定于固相膜上的mRNA進行雜交，洗膜去除非特異性結合雜交信號，經放射自顯影或現色反應，對雜交信號進行分析。將雜交的m
Northern雜交操作步驟和DNA探針的制備與標記（1）
一．原理Northern 雜交是用來測量真核生物RNA的量和大小估計其豐度的實驗方法，可以從大量的RNA樣本同時獲得這些信息。其基本步驟包括：1. 完整mRNA的分離2. 根據RNA的大小通過瓊脂糖凝膠電泳對RNA進行分離3. 將RNA 轉移到固相支持物上，在轉移的過程中，要保持RNA 在凝膠中的相