RNA印跡(NorthernBlot)
【實驗原理】將RNA變性及電泳分離后，轉移到固相支持物上，用于與DNA探針雜交以鑒定其中特定 RNA分子的大小與含量。基本原理與Southern印跡相同，但RNA變性方法與DNA不同，不能用堿變性，因為堿會導致RNA的水解。Northern印跡主要用于組織細胞靶基因表達水平的研究以及對同一組織細胞的不同基因間的表達水平進行比較，或者對不同組織細胞間相同基因的表達水平進行比較。【實驗對象】待測RNA樣品。【試劑與器材】1.焦碳酸二乙酯 (DEPC)。2.甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳所需試劑。3.0.5 mol/L乙酸銨(NH4Ac)。4.溴化乙啶 (EB)：0.5μg／ml，溶于0.5mol／L 乙酸銨中。5.0.05mol/L NaOH／1.5mol／L NaCI (選用)。6.0.5mol/L Tris·CI (pH 7.4) ／1.5mol／L NaCl (選用)。7.20×SSC、6×SSC和2×SSC。8.亞甲藍（終濃度為0.......閱讀全文
RNA印跡雜交
RNA印跡雜交1）???????Northern印跡的制備預備：1．按下述步驟，每泳道加10～20μg總RNA或0.5～1μg poly(A)+RNA進行甲醛/瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠放在紫外線透照儀上，旁邊置一標尺進行拍照。a.?總RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃溫育5min：總RNA（1
RNA印跡(Northern－Blot)
【實驗原理】將RNA變性及電泳分離后，轉移到固相支持物上，用于與DNA探針雜交以鑒定其中特定 RNA分子的大小與含量。基本原理與Southern印跡相同，但RNA變性方法與DNA不同，不能用堿變性，因為堿會導致RNA的水解。Northern印跡主要用于組織細胞靶基因表達水平的研究以及對同一組織細胞的
RNA－印跡法的概念
中文名稱RNA 印跡法英文名稱Northern blotting定 義將電泳分離的RNA從凝膠中轉移到纖維素膜或尼龍膜上，用32P標記的RNA或DNA雜交進行檢測的方法。主要用于檢測目的基因的轉錄水平。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
Northern印跡和總RNA雜交實驗——Northern印跡分析
試劑、試劑盒甲醛凝膠溶液RNA 電泳緩沖液儀器、耗材凝膠模梳齒凝膠用具實驗步驟1. 用肥皂和水徹底清洗凝膠模，梳齒和凝膠用具。2. 準備甲醛凝膠溶液。甲醛凝膠溶液（300 ml 1％ 瓊脂糖凝膠）：瓊脂糖，3.0 g10x RNA 電泳緩沖液，30 ml? ???Milli-Q 或用玻璃器皿蒸餾過的
Northern印跡和總RNA雜交實驗
Northern印跡分析雜交和放射自顯影試劑、試劑盒甲醛凝膠溶液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?RNA 電泳緩沖液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
Northern印跡和總RNA雜交實驗
試劑、試劑盒 甲醛凝膠溶液RNA 電泳緩沖液儀器、耗材 凝膠模梳齒凝膠用具實驗步驟 1. 用肥皂和水徹底清洗凝膠模，梳齒和凝膠用具。2. 準備甲醛凝膠溶液。甲醛凝膠溶液（300 ml 1％ 瓊脂糖凝膠）：瓊脂糖，3.0 g10x RNA 電泳緩沖液，30 ml ? ??Milli-Q 或用玻璃器皿蒸
RNA印跡法的原理和應用
中文名稱RNA印跡法英文名稱Northern blotting定 義RNA從電泳凝膠轉移到固相介質(如尼龍膜等)上，然后與互補的核苷酸序列雜交的操作過程。應用學科遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）
Northern印跡和總RNA雜交實驗
Northern印跡分析 雜交和放射自顯影 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 甲醛凝膠溶液 RNA 電泳緩沖液
RNA樣品的轉膜（虹吸印跡法）
實驗概要本實驗介紹了RNA樣品的轉膜（即虹吸印跡法）的操作步驟等。主要試劑1. 20×SSC：175.3g NaCl，88.2g檸檬酸鈉，DEPC水定容1000ml ???????????????????? NaOH調pH至7.0，高壓后備用。 2. 6×SSC：用20×SSC稀釋。主要設備1. 紫
RNA的Nouthern印跡和狹線雜交分析實驗
Northern blot 是研究基因表達的最嚴謹的方法之一，可以定量分析組織中某一特異 mRNA 的表達豐度，根據其遷移位置也可以判斷基因表達轉錄物的大小。該技術應用十分廣泛，常用于分析 RNA 樣品中特定 mRNA 的大小和豐度，也可用于基因表達調控、基因結構及功能、遺傳變異等研究。實驗材料RN
RNA的Nouthern印跡和狹線雜交分析實驗
甲醛-瓊脂糖凝膠電泳 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 RNA 試劑、試劑盒
RNA的Nouthern印跡和狹線雜交分析實驗
實驗材料 RNA試劑、試劑盒 DEPCMOPS甲醛瓊脂糖乙酸銨NaOHNaClTris·Cl磷酸鈉溴化乙錠SDS儀器、耗材 離心機電泳儀培養箱紫外線透照儀雜交爐實驗步驟 1. ?用72 ml 水溶解1 g 瓊脂糖，在水浴中冷至60℃時，移至通風櫥中加入10×MOPS電泳緩沖液和18 ml 12.3
RNA蛋白質印跡法的技術應用
中文名稱RNA-蛋白質印跡法英文名稱Northwestern blotting定 義將經過電泳分離的蛋白質轉移到膜上再與某種特異的RNA探針雜交，是研究蛋白質與RNA特異結合的技術。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
Northern印跡和總RNA雜交實驗——雜交和放射自顯影
實驗材料mRNA試劑、試劑盒甲酰胺SSPEDenhardt 試劑SDS儀器、耗材濾膜實驗步驟1. 濾膜進行 1~2 小時預雜交。在 42℃：50% 甲酰胺5x SSPE2 x Denhardt 試劑0.1% SDS或者在 68℃：6x SSC2x Denhardt 試劑0.1% SDS2. 把已變性
Southern－印跡實驗——印跡法
Southern印跡法是將DNA片段從電泳凝膠中轉移至膜支持物上，使DNA片段固定，因此該膜半永久性地重現出凝膠電泳的帶型。實驗方法原理本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料DNA試劑、試劑盒HClNaClTrisNaOH
Northern印跡的制備和Northern印跡
Northern印跡的制備 預備： 1.按下述步驟，每泳道加10～20μg總RNA或 0.5～1μgpoly(A)+RNA進行甲醛/ 瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠放在紫外線透照儀上，旁邊置一標尺進行拍照。 a. 總RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃溫育5min：
如何選擇蛋白印跡實驗中的印跡膜？
硝酸纖維素膜（NC膜）是蛋白和核酸雜交最常用的印跡膜，是蛋白印跡實驗的標準固相支持物。在低離子轉移緩沖液的環境下，大多數帶負電荷的蛋白質會與硝酸纖維素膜發生疏水作用而高親和力的結合在一起，雖然這其中的機制還不是十分清楚，但由于硝酸纖維素膜的這個特性，而且易于封閉非特異性結合，從而得到了廣泛的應用。目
如何選擇蛋白印跡實驗中的印跡膜
硝酸纖維素膜（NC膜）是蛋白和核酸雜交zui常用的印跡膜，是蛋白印跡實驗的標準固相支持物。在低離子轉移緩沖液的環境下，大多數帶負電荷的蛋白質會與硝酸纖維素膜發生疏水作用而高親和力的結合在一起，雖然這其中的機制還不是十分清楚，但由于硝酸纖維素膜的這個特性，而且易于封閉非特異性結合，從而得到了廣泛的
Southern－印跡實驗
實驗方法原理?本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料?DNA試劑、試劑盒?HClNaClTrisNaOHSSC溴化乙錠儀器、耗材?電泳儀紫外透射儀實驗步驟 一、向上毛細管轉移法的轉移疊層系統：：圖一、向上毛細管轉移法的轉移
印跡轉移電泳
生物化學與分子生物學的研究工作經常需要對電泳分離后的DNA進行分子雜交，但瓊脂糖不適合于進行雜交操作，1975年，Southren創造了將DNA區帶原位轉移到硝酸基纖維素膜（NC膜）上，再進行雜交的方法，被稱為Southren印跡法。隨后，Alwine等將類似方法用于RNA印跡，被戲稱為Northe
Western印跡法
這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體，并以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測之。Western使用的探針是抗體，它與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特異蛋白進行鑒別和鑒定。儀器：高壓鍋、玻璃勻漿
Southern印跡技術
實驗原理:Southern印跡是將DNA片斷從電泳凝膠上直接轉移至膜支持物（如硝酸纖維素膜、尼龍膜）上，使DNA片斷固定的技術。先將DNA經限制性內切酶消化成一系列片段，進行瓊脂糖凝膠電泳，各片段因分子量不同而彼此分開，然后經堿處理凝膠，使DNA的片段被變性、中和并通過毛細作用在高鹽緩沖液中在原位將
Southern－印跡實驗
印跡法 堿性緩沖液法 向下毛細管轉移法 電轉印法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設
Western免疫印跡
?Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理????與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝
Western－免疫印跡
實驗概要Western免疫印跡（Western ? Blotting）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western ? Blot采用的是聚丙烯
免疫印跡法
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被
Northern－印跡分析實驗
試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠菌落裂解緩沖液蒸餾水甲醛甲酰胺預雜交 雜交液HotPrime cDNA Labeling Kit礦物油MOPS 緩沖液MOPS乙酸鈉EDTAPCR 緩沖液SSCNaClSDSNaClNaH2PO4[a-32P]dATPLgh Rgh 引物鮭魚精 DNATaq DNA
Northern－印跡分析實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 瓊脂糖凝膠 菌落裂解緩沖液 蒸餾水 甲醛 甲酰胺預雜交 雜交液 HotPrime cDNA Labeling Kit
Northern－印跡分析實驗
為了確認所選擇 cDNA 確實是差異表達的，建議使用 Northern 印跡分析，而不要用其他的確認技術，比如反向 Northern 雜交（Zhangetal.1996) 或定量 RT-PCR。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒瓊脂糖凝膠菌落裂解緩沖液蒸餾水甲