ProtocolofNorthernblot
Protocol of Northern blot質粒的轉化和擴增質粒的鑒定目的基因片段的切割3.1樣品雙酶切(175μl水解體系)DW 115μlBuffer B(10×) 17.5μlBaM H 15μlPst I 17μlDNA(MMP-9) 16μlBSA 4.5μl37℃水浴，3h。3.2制膠(1.5%Agarose)0.6g Agarose+40ml TAE(1×)3.3電泳175μl樣品+35μl loading buffer(6×)Marker 5μl +DW 20μl + 5μl loading buffer(6×)3.4目的基因片段的回收（按照北京鼎國生物發展中心的DNA純化回收手冊進行）3.4.1 切取含DNA片段的瓊脂糖（100mg-300mg）搗碎按重量比1：3（DNA片段：溶液B）加入溶液B。3.4.2 50℃水溶10分鐘，直至膠完全溶化，其間旋渦振蕩三次，瓊脂糖必須完全溶化，如果體積大于500μl，......閱讀全文
Protocol－of－Northern－blot
Protocol of Northern blot質粒的轉化和擴增質粒的鑒定目的基因片段的切割3.1樣品雙酶切(175μl水解體系)DW 115μlBuffer B(10×) 17.5μlBaM H 15μlPst I 17μlDNA(MMP-9) 16μlBSA 4.5μl37℃水浴，3h。3.2
Northern－Blot
Northern Blot Northern Blot ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 20XMOPS 緩沖液 20
Northern－Blot
試劑、試劑盒 20XMOPS 緩沖液 20XSSC 50XDenhardt 液 雜交液 10%SDS儀器、耗材 水平電泳裝置 水浴 硝酸纖維素膜或尼龍膜 3 MM 濾紙 紫外交聯儀 雜交管 雜交爐 [32P] 標記的 DNA 或 RNA 探針實驗步驟 一、材料與設備1) 水平電泳裝置2) 水浴3)
Northern－Blotnorthern雜交
Northern BlotPreparation of Formaldehyde Agarose GelThe gel conditions (1% agarose, 1X MOPS, 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electroph
Northern－blot技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳 這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳， 因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Mill
Northern－blot技術
經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳 這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳， 因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Mill
Northern－blot實驗
Northern blot技術 Northern Blot ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離，再轉移至尼龍膜等固相膜載體上，
Northern－Blot技術
[儀器、試劑、材料]（一）儀器恒溫水浴箱，電泳儀，凝膠成像系統，真空轉移儀，真空泵，UV 交聯儀，雜交爐，恒溫搖床，脫色搖床，漩渦振蕩器，分光光度計，微量移液器，電爐（或微波爐），離心管，燒杯，量筒，三角瓶，等。?（二）材料總RNA樣品或mRNA樣品，探針模板DNA(25 ng)，尼龍膜（三）試劑N
Northern－blot實驗
實驗方法原理 Northern blot的基本概述是將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離，再轉移至尼龍膜等固相膜載體上，用放射性或非放射性標記DNA或RNA特異性探針對固定于固相膜上的mRNA進行雜交，洗膜去除非特異性結合雜交信號，經放射自顯影或現色反應，對雜交信號進行分析。將雜交的m
Western－Blot－Protocol
一、提取抗原蛋白將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl 100%酒精充分混勻，靜置5min(RT), 2000×g , 4℃離心5min,?吸取上清至新管中,?加入750μl異丙醇,?混勻,?靜置10min(RT), 12000×g, 4℃離心10min,?棄上清,?加入1ml 0.3mol/L
Dot－Blot－Protocol
a. Label nitrocellulose membrane (using a pencil) to identify protein elution fractions.b . Pipette 2μl from each fraction onto the membrane, allow th
Dot－blot－protocol
實驗概要A ?technique for detecting, analyzing, and identifying proteins, similar ?to the western blot technique but differing in that protein samples are
Northern－protocol(RULES－FOR－RNA－WORK)
1.???????? Wear gloves at all time including filling pipet tip in racks, filling jars with Eppendorf tubes, and weighing chemicals to prepare solution
5.3－Northern－Blot（二）
試劑、試劑盒20XMOPS 緩沖液20XSSC50XDenhardt 液雜交液10%SDS儀器、耗材水平電泳裝置水浴硝酸纖維素膜或尼龍膜3 MM 濾紙紫外交聯儀雜交管雜交爐[32P] 標記的 DNA 或 RNA 探針實驗步驟一、材料與設備1) 水平電泳裝置2) 水浴3) 硝酸纖維素膜或尼龍膜4)3
Northern－blot實驗技術
一、經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳，因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Mille
Northern－blot實驗（二）
實驗方法原理在變性條件下將待檢的RNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，繼而按照同Southern Blot相同的原理進行轉膜和用探針進行雜交檢測。實驗材料總RNA樣品或mRNA樣品探針模板DNA(25 ng)尼龍膜試劑、試劑盒NorthernMax Kit（Cat. # 1940AmbionInc.）瓊脂糖
5.3－Northern－Blot（一）
NorthernBlot 是一項用于檢測特異性 RNA 的技術, 在變性瓊脂糖凝膠中將 RNA 分子按大小分開后，將其轉移至硝酸纖維素膜或尼龍膜上，用一個放射性同位素標記或酶標記 DNA 或 RNA 櫬針與固定的 RNA 進行雜交。探針通過配對序列僅與特異的 RNA 結合，雜交 RNA 的大小和 R
Northern－blot實驗（一）
Northern blot 可用于：（1）檢測不同組織、器官；（2）生物體不同發育階段以及脅迫環境或病理條件下特定基因的表達樣式。如northern blot被大量用于檢測癌細胞中原癌基因表達量的升高及抑癌基因表達量的下降，器官移植過程中由于免疫排斥反應造成某些基因表達量的上升，Northern b
RNA印跡(Northern－Blot)
【實驗原理】將RNA變性及電泳分離后，轉移到固相支持物上，用于與DNA探針雜交以鑒定其中特定 RNA分子的大小與含量。基本原理與Southern印跡相同，但RNA變性方法與DNA不同，不能用堿變性，因為堿會導致RNA的水解。Northern印跡主要用于組織細胞靶基因表達水平的研究以及對同一組織細胞的
Northern－Blot實驗方法
[儀器、試劑、材料]（一）儀器恒溫水浴箱，電泳儀，凝膠成像系統，真空轉移儀，真空泵，UV 交聯儀，雜交爐，恒溫搖床，脫色搖床，漩渦振蕩器，分光光度計，微量移液器，電爐（或微波爐），離心管，燒杯，量筒，三角瓶，等。?（二）材料總RNA樣品或mRNA樣品，探針模板DNA(25 ng)，尼龍膜（三）試劑N
Northern－blot實驗方法
Northern blot 是一種通過檢測RNA的表達水平來檢測基因表達的方法，通過northernblot的方法可以檢測到細胞在生長發育特定階段或者脅迫或病理環境下特定基因表達情況。Northern blot 首先通過電泳的方法將不同的RNA分子依據其分子量大小加以區分，然后通過與特定基因
Western－Blot－Protocol實驗步驟
一、提取抗原蛋白??將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl100%酒精充分混勻，靜置5min(RT),2000×g,4℃離心5min,吸取上清至新管中,加入750μl異丙醇,混勻,靜置10min(RT),12000×g,4℃離心10min,棄上清,加入1ml0.3mol/L鹽酸胍/95%酒精重懸
Northern－blot實驗操作步驟（1）
一、經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael（1977）。含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳，因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H+梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Miller
Northern－blot實驗操作步驟（2）
二、將變性RNA轉移至硝酸纖維素濾膜電泳完畢后，可立即將乙醛酰RNA自瓊脂糖凝膠轉移至硝酸纖維素濾膜，有以下幾種轉移方法：毛細管洗脫法、真空轉移法和電印跡法。毛細管洗脫法如下所述， 真空轉移法和印跡法則按有關儀器生產廠家產品說明書進行。盡管有人認為在轉移前對瓊脂糖凝膠進行預處理實屬不必（Th
Northern－Blot實驗方法步驟
實驗概要本文介紹了Northern Blot實驗儀器試劑和方法步驟。實驗原理在變性條件下將待檢的RNA樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，繼而按照同Southern Blot相同的原理進行轉膜和用探針進行雜交檢測。用途：檢測樣品中是否含有基因的轉錄產物（mRNA）及其含量。主要試劑1. NorthernMax
核酸雜交技術(Northern－Blot、Southern－Blot和探針標記）
（一）Southern Blot原理：將待檢測的DNA分子用/不用限制性內切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標記的DNA或RNA探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列，則二者通過堿基互補的原理進
Western－Blot－Protocol實驗操作步驟
一、提取抗原蛋白 將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl100%酒精充分混勻，靜置 ?5min(RT),2000×g,4℃離心5min,吸取上清至新管中,加入750μl異丙醇,混勻,靜置10min(RT),12000×g,4℃離心 ?10min,棄上清,加入1ml0.3mol/L鹽酸胍/95%酒
培養細胞中RNA檢測－Northern－Blot
培養細胞中RNA檢測－Northern Blot1．制膠：（1％）瓊脂糖????????????????2.5g10×Mops緩沖液???25.0mlH2O???????????????192.0ml2．在微波爐中加熱煮沸使膠完全溶于水并滅菌。3．取出膠冷卻到60℃，于通風柜中加45ml甲醛，混勻。
核酸蛋白轉移電泳及雜交（Southern－Blot、Northern－Blot和...1
一、DNA Southern Blot及雜交 本技術可用于基因組DNA特定序列定位，尤其可分析某些基因的限制性內切酶長度多態性，對遺傳性疾病的早期基因診斷、產前診斷或基因變異等方面的研究有應用價值，其過程包括：樣品DNA內切酶水解、水解片斷的瓊脂糖凝膠電泳分離、分離后水解片斷的轉移(固定)、特異
核酸蛋白轉移電泳及雜交（Southern－Blot、Northern－Blot和...2
(10)倒去預雜交液，加入含探針的雜交液封口，42℃ 6h或過夜。 (11)取出轉移膜，按以下條件洗膜 1×SSC，0.1%SDS室溫2×15分鐘 0.25SSC，0.1%SDS,42℃ 2×15分鐘，氣中干燥。 (12)將雜交后的膜曝光于X光片，暗盒中放射自顯影2～