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  • 免疫組化技術典型實驗案例學習1

    案例一:DAB染色后切片著色一片黃/背景深背景:奧運會期間我們課題組研究生都在實驗室做實驗,許多從北京購買的試劑買不到,對我們的許多實驗產生了很大的影響。我以前一直用中杉金橋的Sp三步法染色試劑盒,效果不錯,在奧運會期間我準備做同批實驗分不同批次酶免疫組化實驗,第一批組化實驗結果很好,抗體濃度感覺比較合適(Santa Cruz公司1:200),等做第二批時發現封閉血清不夠了,為了保證實驗順利進行,我又從福州邁新頂了一個SP試劑盒,同時抗體稀釋液也不夠了,我又重新從博士德公司買了一小瓶10ml。從第二批實驗開始,組化實驗結果一直顯示強背景著色,特異性染色很難辨別。問題及其解答:產生組織切片非特異性染色的原因有哪些?如何解決?1、 抗體孵育時間過長、抗體濃度高易增加背景著色。這可通過縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是最重要的一條。2、 一抗用多克隆抗體易出現非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。3、內源性過氧化物酶......閱讀全文

    免疫組化技術典型實驗案例學習1

    案例一:DAB染色后切片著色一片黃/背景深背景:奧運會期間我們課題組研究生都在實驗室做實驗,許多從北京購買的試劑買不到,對我們的許多實驗產生了很大的影響。我以前一直用中杉金橋的Sp三步法染色試劑盒,效果不錯,在奧運會期間我準備做同批實驗分不同批次酶免疫組化實驗,第一批組化實驗結果很好,抗體濃度感覺比

    免疫組化技術典型實驗案例學習3

    6、以上原因,都是針對實際中常見原因來進行分析的,前提是排除操作者的操作錯誤而引起陰性結果,這就需要新手還是要設置陽性對照以排除方法的問題。還有抗體稀釋液的PH值過低等其它原因的干擾。總之,要想把免疫組化做好,可能每一個環節都很重要,但也存在主次之分,出現問題了,需要通過先排除主要的,再依次排除次要

    免疫組化技術典型實驗案例學習2

    7、我做了兩張切片:一張用老試劑盒內還剩下一點的血清而另一張用新試劑盒內的封閉血清,其余試劑(二抗、SP)均用新試劑盒提供的,結果是前一張效果很好,而后一張能夠看到特異性染色,但背景太深,拍照效果不佳。--看來封閉血清也是罪會禍首之一。結果分析顯示:抗體稀釋液的PH值偏低和封閉血清的失效導致了我的免

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