PCR常見問題匯總
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消 化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚。⑤模 板核酸變性不徹底。在酶和引物質量好時，不出現擴增帶，極有可能是標本的消化處 理，模板核酸提取過程出了毛病，因而要配制有效而穩定的消化處理液，其程序亦應 固定不宜隨意更改。 酶失活：需更換新酶，或新舊兩種酶同時使用，以分析是否因酶的活性喪失或不夠而 導致假陰性。需注意的是有時忘加Taq酶或溴乙錠。 引物：引物質量、引物的濃度、兩條引物的濃度是否對稱，是PCR失敗或擴增條帶不 理想、容易彌散的常見原因......閱讀全文
PCR常見問題匯總
PCR產物的電泳檢測時間一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。假陰性，不出現擴增條帶PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及，④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶
PCR常見問題匯總
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板
PCR常見問題匯總（一）
PCR產物的電泳檢測時間一般為48h以內，有些zui好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及，④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。模板：?①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有
PCR常見問題匯總（二）
PCR反應體系與反應條件-------------------------------------------------------------------------------- ? 標準的PCR反應體系：10×擴增緩沖液 10ul4種dNTP混合物 各200umol/L引物 各10～100p
知識分享：PCR儀的原理、分類、常見問題匯總！
一、PCR的基本原理 聚合酶鏈反應（polymerasechain reaction，PCR）PCR反應過程與細胞內的DNA復制相似，但PCR的反應體系要簡單的多，主要包括DNA靶序列、引物、4種單核苷酸dNTP、耐熱DNA聚合酶以及合適的緩沖液體系。 PCR反應過程有以下3個步驟：1、變性
移液器的常見問題匯總
檢修常識常見問題原因解決方法移液器滲漏●使用了不合適的吸頭●用原廠的吸頭●吸頭安裝不正確●穩妥安裝吸頭●吸頭圓錐磨損貨污染●清洗安全圓錐●更換安全圓錐●活塞密封磨損或潤滑劑不足●清洗并給墊圈重上潤滑劑●更換墊圈●儀器損壞●送去維修移液性能規格超出給定范圍●使用了不合適的吸頭●用原廠的吸頭測試●非標準
Ph常見問題匯總2
6.樣品溫度為 10℃，此時儀表顯示的是 10℃還是 25℃下的 pH值? 酸度計顯示的是溶液在當前溫度下的 pH值,若在 10℃測量，儀表顯示的是溶液 10℃的值,如果需要得到 25℃的 pH，必須把溶液溫度升/降溫至 25℃，再進行測量。酸度計的溫度補償指的是補償溫度對 pH電極的影響
PCR常見問題
PCR產物的電泳檢測時間? 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。 假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
PCR常見問題
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
菌種保存常見問題問答匯總
1.菌株保存的是第三代，-80℃保存，再取出來活化的話屬于第幾代？答：保存的是第三代復活出來后，如果采用平板或肉湯活化相當于轉接了一代，就是第四代了，如果還在瓷珠里的話就還是原來的代數。如果是保存在斜面上，這一支斜面一直就是第三代，如果轉接到另一支斜面就是第四代了。傳代原則，菌株活化復蘇不論以任何形
色譜峰常見問題匯總（二）
六、假峰 可能的原因可采用的排除方法 1.柱吸附樣品，隨后解吸 1.更換襯管，如不能解決問題，就從柱進樣口端去掉1~2圈，再重新安裝。 2.注射器污染 2.用新注射器及干凈的溶劑試一試，如假峰消失，就將注射器沖洗幾次。 3.樣品量太大3.減少進樣量。 4.進樣技術差(進樣
離心機常見問題匯總
1. 急停開關出現異常問題分析此類報警一般在離心機出現緊急故障按下急停開關后或設備重啟時出現此類報警。處理方法只需對設備進行復位鍵，如復位失敗需等30s后驅動變頻器開關能自動切斷后再進行復位即可。2. 分散單元位置不對問題分析此類報警一般在離心機開啟后準備進行操作時或在分散過程中刮刀走到位后出現，由
色譜峰常見問題匯總（一）
一、峰丟失 可能的原因可采用的排除方法 1.注射器有毛病1用新注射器驗證。 2.未接入檢測器，或檢測器不起作用2.檢查設定值 3.進樣溫度太低3.檢查溫度，并根據需要調整 4.柱箱溫度太低4.檢查溫度，并根據需要調整 5.無載氣流5.檢查壓力調節器，并檢查泄漏，驗證柱進品流速
菌種保存常見問題答問匯總
1.菌株保存的是第三代，-80℃保存，再取出來活化的話屬于第幾代？答：保存的是第三代復活出來后，如果采用平板或肉湯活化相當于轉接了一代，就是第四代了，如果還在瓷珠里的話就還是原來的代數。如果是保存在斜面上，這一支斜面一直就是第三代，如果轉接到另一支斜面就是第四代了。傳代原則，菌株活化復蘇不論以任何形
PCR常見問題總匯
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及，?④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
PCR常見問題集錦
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
PCR常見問題總匯
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。 假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有
PCR常見問題總匯
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板
無損檢測的常見問題匯總（一）
? 1、什么是無損探傷/無損檢測? (1)無損探傷是在不損壞工件或原材料工作狀態的前提下，對被檢驗部件的表面和內部質量進行檢查的一種測試手段。 (2)無損檢測：NondestructiveTesting(縮寫NDT) 2、常用的探傷方法有哪些? 無損檢測方法很多據美國
無損檢測的常見問題匯總（二）
? 9、試塊的主要作用是什么? (1)校驗靈敏度;(2)校準掃描線性。 10、用超生波對餅形大鍛件探傷，如果用底波調節探傷起始靈敏度對工作底面有何要求? (1)底面必須平行于探傷面; (2)底面必須平整并且有一定的光潔度。 11.超聲波探傷選擇探頭K值有哪三條
無損檢測的常見問題匯總（四）
? 25.在超聲波探傷中把焊縫中的缺陷分幾類?怎樣進行分類? 在焊縫超聲波探傷中一般把焊縫中的缺陷 分成三類：點狀缺陷、線狀缺陷、面狀缺陷。 在分類中把長度小于10mm的缺陷叫做點狀缺陷;一般不測長，小于10mm的缺陷按5mm計。把長度大于10mm的缺陷叫線狀缺陷。把長度大于10mm
無損檢測的常見問題匯總（三）
? 17.什么是超聲場? 充滿超聲場能量的空間叫超聲場。 18.反映超聲場特征的主要參數是什么? 反映超聲場特征的重要物理量有聲強、聲壓聲阻抗、聲束擴散角、近場和遠場區。 19.探傷儀最重要的性能指標是什么? 分辨力、動態范圍、水平線性、垂直線性、靈敏度、信噪
PCR儀的常見故障匯總
1、制冷半導體故障2、溫度傳感器故障3、控制板故障4、電源板故障5、熱蓋故障6、軟件故障7、其他故障
定量PCR常見問題(一)
1.??????定量PCR儀的開關機順序是怎樣的？????按照正確的開關機順序操作，有助于延長儀器的使用壽命，減少儀器出故障的頻率。開機順序：先開電腦，待電腦完全啟動后再開啟定量PCR儀主機，等主機面板上的綠燈亮后即可打開定量PCR的收集軟件，進行實驗。關機順序：確認實驗已經結束后，首先關閉信號收集
PCR常見問題總（1）
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
PCR常見問題總匯(三）
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶
PCR常見問題總匯(一）
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
PCR常見問題總匯(二）
克隆PCR產物1)克隆PCR產物的最優條件是什么？最佳插入片段：載體比需實驗確定。1：1（插入片段：載體）常為最佳比，摩爾數比1：8或8：1也行。應測定比值范圍。連接用5ul 2X連接液, 50ng質粒DNA,1Weiss單位的T4連接酶，插入片段共10ul。室溫保溫1小時，或4oC過夜。在這2種溫
定量PCR常見問題(二)
8.??????什么是背景校正？多長時間執行一次背景校正？????背景校正程序測量定量PCR儀所使用的反應管和水的空白熒光強度。在運行校正程序期間，定量PCR儀在10分鐘內連續讀取背景校正板的熒光強度，信號收集的溫度為60 °C。隨后，SDS軟件計算所收集到的熒光強度的平均值，提取結果并保存到校正文
PCR常見問題及回答
?PCR常見問題及回答?1. cDNA產量的很低?可能的原因：*RNA模板質量低*對mRNA濃度估計過高*反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足*同位素磷32過期*反應體積過大，不應超過50μl?2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺?*zui常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系