原位PCR實驗相關
所需設備 原位PCR反應是在載玻片的平面上進行，保持水平可以使反應各組分均勻地分布在組織切片上，所以須在原位PCR儀上進行，該儀器不但可以使載玻片保持水平，而且還可以給載玻片進行均勻地加熱，保證擴增反應的順利進行。 探針種類 與原位雜交一樣，檢測原位PCR結果的探針可以是DNA探針，也可以是寡核苷酸探針，DNA探針的長度在100－200bp為宜，寡核苷酸探針為多個，在20－40bp為宜。 探針標記物種類 常用標記物有地高辛半抗原（digaoxigenin），生物素（biotin），過氧化物酶（HRP），還可以標記一些熒光物質如異硫氰酸熒光素（FITC），花青（cyanine，Cy2，Cy3，Cy5）等。......閱讀全文
原位PCR的基本方法
①固定組織或細胞:將組織細胞固定于預先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛處理，再滅活除去細胞內源性過氧化物酶.②蛋白酶K消化處理:用60ug/ml的蛋白酶K將固定好的組織細胞片55℃消化處理2h后，96℃2min以滅活蛋白酶K.③PCR擴增:在組織細胞片上，加PCR反應液，覆蓋并加液體石蠟后，直接
原位PCR的應用范圍
組織處理的要求 處理后的標本，既要保持組織，細胞的形態結構，并增加細胞膜通透性，又要充分暴露擬擴增的目的DNA或RNA，使引物、探針能有效進入胞漿中發生反應。 應用范圍 主要應用于兩方面： （1）檢測外源性基因片段，提高檢出率，集中在病毒感染的檢查上，如HIV、HPV、HBV、CMV等；
原位PCR的反轉錄
原位PCR的反轉錄不同于原位PCR的過程包括兩個：即蛋白酶消化后用無RNA酶的DNA酶消化過夜和原位PCR的反轉錄過程。此處主要介紹這兩個過程，其余方法同原位PCR。1．DNA酶消化【試劑與配制】無RNA酶的DNA酶10×緩沖液：35μl 3mol/L NaAc，5μl 1mol/L MgSO4，6
直接原位PCR（In－situ－PCR）操作方法
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。1．組織切片和細胞樣品的制備【試劑與配置】10%福爾馬林二甲苯PBS【
實驗相關技術－|－PCR方法簡介
PCR是聚合酶鏈式反應的簡稱，是一種酶促化學反應，可以在試管里將待測的目的基因在很短的時間內擴增物十萬倍乃至上百萬倍，大大提高了基因診斷的靈敏度，降低了分析的難度。PCR法是目前基因診斷中使用最多的方法。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點；能在一個試管內將所要研究
普通PCR梯度PCR－原位PCR－熒光定量PCR儀的區別
普通PCR儀： 一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀，也就是傳統的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。如；（ABI 2720） 梯度PCR儀： 一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱
原位PCR的優勢和不足
PCR雖然能擴增包括福爾馬林固定、石蠟包埋組織的各種標本的DNA，但擴增的DNA或RNA產物不能在組織細胞中定位，因而不能直接與特定的組織細胞特征相聯系，這是該技術一個局限性。原位雜交雖具有良好的定位能力，但由于其敏感性問題，尤其是在石蠟切片中，尚不能檢測出低含量的DNA或RNA序列。而原位PC
分子雜交技術菌落原位雜交的實驗相關介紹
對分散在若干個瓊脂平板上的少數菌落（100-200）進行克隆篩選時，可采用本方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張硝酸纖維素濾膜上。經培養一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應貯存于4℃直至得到篩選結果。 1、材料：待檢測的細菌平皿，已標記好的探針，硝酸纖維素
普通PCR儀/梯度PCR儀/實時熒光定量PCR儀/原位PCR儀應用對比
PCR：聚合酶鏈式反應。是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。 PCR原理示意圖： 1589863475231958.jpg PCR儀的種類有：常規的普通PCR儀，梯度P
普通PCR儀/梯度PCR儀/實時熒光定量PCR儀/原位PCR儀應用對比
PCR：聚合酶鏈式反應。是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。PCR原理示意圖：PCR儀的種類有：常規的普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實時熒光定量PCR儀四類！1、普通PCR儀一般把一次PCR
原位免疫PCR的IHC增敏方法
（一）基本原理Sano等（1992）率先利用基因工程的方法表達了A蛋白與鏈霉親和素的嵌合體分子獲得成功，建立了免疫PCR技術。這是一種新的抗原檢測系統，利用細胞工程和基因工程技術，巧妙地將抗原抗體反應的特異性同PCR的敏感性相結合，通過構建單克隆抗體與重組核酸的嵌合體分子，使得利用PCR技術檢測蛋白
原位PCR技術的定義和方法介紹
1.概述：原位PCR就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。原位PCR是Hasse等于1990年建立的，實驗用的標本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落細胞、血細胞等.2.其基本方法為? ?
關于PCR實驗室的布局相關介紹
PCR實驗室按規定需要四間，分別是1 試劑儲存和準備區、2 標本制備區、3擴增反應混合物配制和擴增區、4擴增產物分析區，四間PCR實驗室區域設置 如果使用全自動分析儀，各區域可適當合并，我們建議將擴增區和產物分析區合并為擴增檢測區即共三個間。 三間PCR實驗室區域設置 按國家衛生部的要求，
原位聚合酶鏈式反應（in－situ－PCR）和原位反轉錄
一、儀器設備英國Thermo Hybaid原位PCR儀。二、操作流程（一）原位PCR步驟1、預處理： （1）切片常規脫蠟； （2）0.2mol/L HCl處理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化組織37℃10min； （4）Nase消化組織37℃ 30min； （5）梯度酒精脫水，
原位雜交儀—原位雜交實驗（三）
原位雜交第三天 1） 用1ml含10%熱滅活血清的MABT溶液置換抗體溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，最后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。 2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置
原位雜交儀—原位雜交實驗（二）
原位雜交第二天 1. 1）將探針回收，放于－20C保存（通常探針可重復使用十次左右）。 2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復一次。 3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。 4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復一次。
原位雜交儀—熒光原位雜交相關解釋
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH）是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法，探針首先與某種介導分子（reporter molecule
熒光原位雜交（FISH）之二：實驗用具、材料及相關溶液...
實驗用具及材料相關溶液的配制1）20×SSC：175.3g?NaCl，88.2g檸檬酸鈉，加水至1000mL（用10mol/L?NaOH調pH?至7.0）。2）去離子甲酰胺（DF）：將10g混合床離子交換樹脂加入100mL甲酰胺中。電磁攪拌30min，用Whatman?l號濾紙濾。3）體積分數70％
FISH熒光原位雜交實驗（原位雜交）
1. 實驗目的??????? 通過實驗了解熒光原位雜交技術的基本原理和在生物學、醫學領域的應用。掌握原位雜交技術的操作方法，熟練掌握熒光顯微鏡的使用方法。2. 實驗原理??????? 熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門新興的分子細胞遺
熒光原位雜交實驗——熒光原位雜交技術
熒光原位雜交可應用于：（1）動植物基因組結構研究；（2）染色體精細結構變異分析；（3）病毒感染分析；（4）腫瘤遺傳學和基因組進化研究。實驗方法原理用已知的標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱
關于克隆PCR產物的對照實驗相關介紹
A）涂布未轉化的感受態細胞。 如有菌落，表明氨芐失效，或污染上帶有氨芐抗型的質粒，或產生氨芐抗型的菌落。 B）轉化完整質粒，計算菌落生長數，測定轉化效率。 例如，將1ug/ul質粒1:100稀釋，1ul用于100ul感受態細胞轉化。用SOC稀釋到1000ul后，用100ul鋪板。培養過夜，
熒光原位雜交實驗
實驗方法原理 熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門新興的分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性原位雜交技術。目前這項技術已經廣泛應用于動植物基因組結構研究、染色體精細結構變
原位雜交實驗步驟
原位雜交實驗步驟一質粒制備1質粒的轉化和擴增1.1制備XL1-Blue感受態細菌1．??取400uL?XL1-Blue菌種加入到含200ml?LB培養基的錐形瓶中，37?℃、100??rpm培養4h，離心，倒置，以冰冷的0.1?mol／L?CaCl_2重懸細菌，冰浴30?min，??離心，棄上清，倒
RNA原位雜交實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 原位雜交的原理是含有互補序列（探針）的被標記的單鏈 DNA 或 RNA 片段在適當 的條件下與細胞的 DNA 或 RNA 雜交形成穩定的雜交體。無論是 DNA( dsDNA、寡核苷酸和 ssDNA ) 或是 RNA( SSC
RNA原位雜交實驗
原位雜交（msituhybridization，ISH)，也稱作雜交組織化學或細胞學的雜交，是一種能夠從形態學上證明特異性的 DNA 或 RNA 序列存在于制備的個別細胞、組織部分、單細胞或染色體中的技術。原位雜交是研究異質細胞群中 DNA 和 RNA 序列的細胞定位的唯一方法。本實驗來源「RNA
RNA原位雜交實驗
實驗方法原理 原位雜交的原理是含有互補序列（探針）的被標記的單鏈 DNA 或 RNA 片段在適當 的條件下與細胞的 DNA 或 RNA 雜交形成穩定的雜交體。無論是 DNA( dsDNA、寡核苷酸和 ssDNA ) 或是 RNA( SSC RNA) 探針均能用于定位 DNA 和 mRNA，并
熒光原位雜交實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 用已知的標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而可以探針直接與染色體進行雜交從而將特定的基因在染色體上
熒光原位雜交實驗
?實驗原理熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一門新興的分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性原位雜交技術。目前這項技術已經廣泛應用于動植物基因組結構研究、染色體精細結構變異分析、
原位雜交實驗步驟
原位雜交實驗步驟?一質粒制備1質粒的轉化和擴增1.1制備XL1-Blue感受態細菌1．?取400uL XL1-Blue菌種加入到含200ml LB培養基的錐形瓶中，37?℃、100rpm培養4h，離心，倒置，以冰冷的0.1 mol／L CaCl_2重懸細菌，冰浴30 min，離心，棄上清，倒置，再加
PCR的相關技術
隨著人們對PCR基本原理的認識和技術的掌握，通過對PCR 技術的大量改進，派生發展出一系列新的相關技術和改良方法。 逆轉錄PCR（RT-PCR）: 以由mRNA逆轉錄而來的cDNA為模板，也因為是從表現型基因來進行增量的，由此產生出來的cDNA產物不帶有內含子，常應用于分子克隆技術[6]。