以胚胎小鼠為例進行原代培養的方法
1.取材:將孕鼠拉頸椎處死,投入75%酒精浸泡數秒消毒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蠟盤中用大頭針固定。用手術器械逐層分離皮膚和肌肉組織,打開腹腔。注意不同的解剖層次使用不同的消毒器械。最后取出雙角子宮置于無菌平皿內。2.用Hanks液洗滌3次,剪開子宮取出胚胎。除去子宮、血液和筋膜等組織。3.用彎頭剪把胚胎盡量剪碎,每個組織塊小于1mm3。在操作時應盡量將平皿蓋半蓋住平皿以防空氣中塵埃落下污染組織。再用Hanks液洗滌2~3次,自然沉淀。用吸管吸去上清液。以下可按兩種方法進行,即消化法和組織塊培養法。4.若使用消化法,則將組織塊放人三角燒瓶內加入10~30mL0.125%胰蛋白酶,37℃磁力攪拌消化20多min。然后加人少量血清終止消化。用幾層無菌紗布過濾。取過濾液,800r/min離心5~10min收集細胞。棄上清,加入帶有雙抗的培養基,放入培養瓶中培養。注:細胞分離的方法各實驗室不同,所采用的消化酶也不相同(如膠原酶,透明質酶......閱讀全文
以胚胎小鼠為例進行原代培養的方法
1.取材:將孕鼠拉頸椎處死,投入75%酒精浸泡數秒消毒,提出孕鼠控掉酒精,放置于蠟盤中用大頭針固定。用手術器械逐層分離皮膚和肌肉組織,打開腹腔。注意不同的解剖層次使用不同的消毒器械。最后取出雙角子宮置于無菌平皿內。2.用Hanks液洗滌3次,剪開子宮取出胚胎。除去子宮、血液和筋膜等組織。3.用彎頭剪
原代細胞培養小鼠胚胎分離實驗
鼠胚原代細胞培養 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 原代細胞培養,是指直接從動物體內獲取的細胞、組織或器官,在體外培養,直到第一次傳代為止。這種培養,首先用無菌操作的方法,從動物
原代細胞培養小鼠胚胎分離實驗
鼠胚原代細胞培養 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 原代細胞培養,是指直接從動物體內獲取的細胞、組織或器官,在體外培養,直到第一次傳代為止。這種培養,首先用無菌操作的方法,從動物
原代細胞培養小鼠胚胎分離實驗
原代細胞培養可應用于:(1)分子生物學;(2)細胞生物學;(3)遺傳學;(4)免疫學;(5)腫瘤學;(6)病毒學等領域。實驗方法原理原代細胞培養,是指直接從動物體內獲取的細胞、組織或器官,在體外培養,直到第一次傳代為止。這種培養,首先用無菌操作的方法,從動物體內取出所需的組織(或器官),經胰酶消化,
小鼠胚胎成纖維細胞的原代培養
實驗概要小鼠胚胎成纖維細胞的原代培養主要試劑75%酒精、0.05%Trypsin、SP、DPBS、細胞基礎培養液?主要設備35 mm培養皿、60 mm培養皿、100 mm培養皿、15 mL離心管、50 mL離心管、凍存管、眼科剪、眼科彎鑷、離心機實驗材料懷孕13.5天【將成年雌、雄小鼠放在同籠中飼養
小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養
實驗方法原理 將小鼠的胚胎成纖維細胞(MEF)從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置MEF生長培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。實驗材料 孕鼠試劑、試劑盒 PBSEDTA胰酶MEF生長培養基FBS高糖DMEM儀器、耗材 眼科直剪眼科直鑷眼科彎鑷玻璃平皿3尼龍濾網離
小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養實驗
小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養可以:(1)用于細胞保種;(2)用于分子生物學研究;(3)用于基因治療相關研究。實驗方法胰酶消化法1胰酶消化法2實驗方法原理將小鼠的胚胎成纖維細胞(MEF)從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置MEF生長培養基中培養,使細胞得以生存、生
小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養實驗
胰酶消化法1 胰酶消化法2 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將小鼠的胚胎成纖維細胞(MEF)從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置MEF
小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養實驗
胰酶消化法1 胰酶消化法2 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將小鼠的胚胎成纖維細胞(MEF)從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置MEF
胚胎小鼠紋狀體神經干細胞分離培養鑒定_原代傳代培養
實驗材料孕13d的昆明種二級小鼠試劑、試劑盒胎牛血清青霉素鏈霉素胰酶阻斷劑葡萄糖臺盼藍蔗糖酚紅磷酸氫二鉀磷酸氫二鈉FITC 偶聯熒光抗小鼠二抗氯化鈉氯化鉀碘酒乙醇儀器、耗材解剖剪虹膜剪眼科剪離心機自動雙重純水蒸餾器微孔濾膜濾器培養箱體視顯微鏡無菌超凈工作臺培養瓶96孔細胞培養板24孔細胞培養板6 孔
斑馬魚胚胎細胞的培養——原代培養
實驗方法原理收集胚胎,除去絨毛膜,用胰蛋白酶分散胚胎細胞,然后在胚胎成纖維細胞飼養層上培養從斑馬魚囊胚和原腸期胚獲得的原代細胞。實驗材料鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA胚胎成纖維細胞飼養層人重組白血病抑制因子試劑、試劑盒LDF基礎培養液LDF原代培養液LDF維持培
小鼠肝細胞原代培養
實驗方法原理 將小鼠的肝細胞從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。實驗材料 小鼠試劑、試劑盒 DMEM無血清DMEM培養基胰酶PBS儀器、耗材 飯盒紗布剪子鑷子燒杯平皿研磨玻片濾網離心管6孔培養板吸管移液管手套微量加樣器實驗
小鼠原代海馬神經元細胞的分離培養方法
原代小知識——小鼠原代海馬神經元細胞的分離培養方法海馬體主要負責記憶和學習,日常生活中的短期記憶都儲存在海馬體中。神經元是構成神經系統結構和功能的基本單位。神經元具有長突起,由細胞體和細胞突起構成。小鼠海馬神經元細胞的組織來源于實驗小鼠的正常腦組織,因為海馬神經元細胞類似于干細胞屬于高分度分化的細胞
小鼠肝細胞原代培養實驗
胰酶消化法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將小鼠的肝細胞從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。?
小鼠肝細胞原代培養實驗
胰酶消化法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將小鼠的肝細胞從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。?
小鼠腹腔巨噬細胞原代培養
實驗方法原理 巨噬細胞屬免疫細胞,有多種功能,是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得,便于培養,并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群,在條件適宜下可生活2-3周,多用做原代培養,難以長期生存。 巨噬細胞也建有無限細胞系,大多來自小鼠,如P331、S774A.1、RAW309
小鼠肝細胞原代培養實驗
小鼠肝細胞原代培養可以:(1)用于細胞保種;(2)用于分子生物學研究;(3)用于基因治療研究。實驗方法胰酶消化法實驗方法原理將小鼠的肝細胞從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。實驗材料小鼠試劑、試劑盒DMEM 無血清DMEM
小鼠胚胎干細胞的培養
實驗概要了解小鼠胚胎干細胞的培養方法。主要試劑1. 貯存液 DMEM(高糖) 胎牛血清 L-谷氨酰胺(200mM) MEM NEAA(10mM) HEPES(1M) β-巰基乙醇(55Mm) 轉鐵蛋白50mg/ml 胰島素5mg/ml 亞硒酸鈉300μM 黃體酮(20μM) 腐
小鼠胚胎干細胞的培養
完全培養基: 高糖DMEM (GIBCO 12430); 15%胎牛血清(BIOCHROM S0615); 0.1 mmol/L非必需氨基酸(GIBCO 11140-050); 2 mmol/L谷氨酰胺(GIBCO 25030); 0.1 mmol/L β-巰基乙醇(GIBCO 21985); 1
原代胚胎成纖維細胞培養
實驗方法原理細胞培養是模擬機體內生理條件,將細胞從機體內取出,在人工條件下培養,使細胞生存、生長、繁殖和傳代,從而可以進行細胞生命過程、細胞癌變等問題的研究。由體內直接取出組織或細胞進行細胞培養叫做原代細胞培養,也有的把第1代細胞與傳10代以內的細胞培養統稱為原代細胞培養。一般來說,用幼嫩狀態的組織
原代胚胎成纖維細胞培養
實驗器材手術小直剪刀三把、眼科直鑷子三把、眼科彎鑷子兩把、玻璃平 皿三套、200目尼龍濾網、50ML、15ML離心管和手術刀片。以上物品均需要高壓滅菌消毒處理。實驗試劑無Ca2+和Mg2+的 PBS、0.05%胰酶0.53mmol/L EDTA溶液、小鼠胚成纖維細胞(MEF)生長培養基:高糖DMEM
原代胚胎成纖維細胞培養
原代胚胎成纖維細胞培養 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 細胞培養是模擬機體內生理條件,將細胞從機體內取出,在人工條件下培養,使細胞生存、生長、繁殖和傳代,從而可以進行細胞生命過
小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養實驗_胰酶消化法2
小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養可應用于:(1)細胞保種;(2)分子生物學研究;(3)基因治療相關研究。實驗方法原理將小鼠的成纖維細胞(MEF)從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置MEF生長培養基培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。實驗材料小鼠試劑、試劑盒PB
小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)原代培養實驗_胰酶消化法1
實驗方法原理將小鼠的胚胎成纖維細胞(MEF)從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置MEF生長培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。實驗材料孕鼠試劑、試劑盒PBSEDTA胰酶MEF生長培養基FBS高糖DMEM儀器、耗材眼科直剪眼科直鑷眼科彎鑷玻璃平皿3尼龍濾網離心管手術
毛冠鹿胚胎有限細胞系的原代培養方法
毛冠鹿細胞原代培養參見施立明等的方法,在無菌條件下取出毛冠鹿胚胎的肺和腎組織,用含雙抗(青霉素、鏈霉素各0.1U/mL)的磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次,去血污,再用GIBCO199培養液洗1次。在無菌培養皿中剪成1mm×1mm×1mm大小的組織塊,置培養瓶中貼壁,翻轉180°,CO2培養箱內靜置3
小鼠腹腔巨噬細胞原代培養實驗
腹腔取材法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 巨噬細胞屬免疫細胞,有多種功能,是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得,便于培養,并可進行純化。巨噬細胞
小鼠腹腔巨噬細胞原代培養實驗
小鼠腹腔巨噬細胞原代培養可以:(1)用于細胞保種;(2)用于分子生物學研究;(3)用于基因治療研究。實驗方法腹腔取材法實驗方法原理巨噬細胞屬免疫細胞,有多種功能,是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得,便于培養,并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群,在條件適宜下可生活2-3
小鼠腹腔巨噬細胞原代培養實驗
腹腔取材法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 巨噬細胞屬免疫細胞,有多種功能,是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得,便于培養,并可進行純化。巨噬細胞
如何進行細胞原代培養
如何進行細胞原代培養細胞原代培養和傳代培養的區別原代細胞(primary cell) 是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養的細胞,稱為原代細胞。一般認為,培養的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。
如何進行細胞原代培養
如何進行細胞原代培養細胞原代培養和傳代培養的區別原代細胞(primary cell) 是指從機體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經蛋白酶或其它的方法獲得單個細胞并在體外進行模擬機體培養的細胞,稱為原代細胞。一般認為,培養的原代的第1代細胞和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。