關于反相色譜技術的影響因素的介紹
(1)柱長 有機小分子和肽類的分辨率隨柱長的增加而增加.但是柱長增加并不能使蛋白質和核酸等生物大分子的分辨率顯著增加.它們在較短的柱子上往往也有很好的分離效果。 (2)流動相的流速。 有機小分子和肽類的分辨率對流動相流速非常敏感。而蛋白質和核酸等生物大分子的分辨率則不然。流速越小,柱子越長,色譜峰的寬度就越大,分辨率就越小。制備色譜上樣過程中的流速對動態吸附容量影響很大。 (3)溫度。 溫度上升,流動相黏度下降,流動速度加快,且流動相與固定相之間的傳質速度加快,使分辨率增加。同時,溫度上升,分子熱運動增加,疏水性作用減弱。升高溫度要考慮目標物質的熱穩定性。 (4)流動相組成。 流動相的極性越大,溶質的分配系數越大,洗脫時間越長。RPC多采用降低流動相極性(水含量)的線性梯度洗脫法。水是極性最強的溶劑,在反相色譜中常常和基礎溶劑配合使用,向流動相中加入不同濃度的、可以與水混溶的有機溶劑,以得到不同強度的流動相,這......閱讀全文
關于反相色譜技術的影響因素的介紹
(1)柱長 有機小分子和肽類的分辨率隨柱長的增加而增加.但是柱長增加并不能使蛋白質和核酸等生物大分子的分辨率顯著增加.它們在較短的柱子上往往也有很好的分離效果。 (2)流動相的流速。 有機小分子和肽類的分辨率對流動相流速非常敏感。而蛋白質和核酸等生物大分子的分辨率則不然。流速越小,柱子越長
反相色譜柱的影響因素
液相色譜柱通常分為正相柱和反相柱。正相色譜柱大多以硅膠為柱,或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱;反相色譜柱填料主要以硅膠為基質,在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(ODS)稱為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料
反相色譜法的影響因素
1、溶質的分子結構(極性)極性越弱,疏水性越強,k越大,tR也越大。同系物碳數越多,極性越弱,k越大;引入極性取代基,降低疏水性,k值變小。2、固定相鍵合烷基的疏水性隨碳鏈的延長而增加,溶質的k也增大。硅膠表面鍵合烷基的濃度越大,則溶質的k越大。3、流動相極性越強,洗脫能力越弱,使溶質的k越大;溶劑
反相色譜柱的優點和影響因素
液相色譜柱通常分為正相柱和反相柱。正相色譜柱大多以硅膠為柱,或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱;反相色譜柱填料主要以硅膠為基質,在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(ODS)稱為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料柱等
關于吸附色譜的影響因素介紹
吸附色譜的分離效果,決定于吸附劑、溶劑和被分離化合物的性質這三個因素。 (1)吸附劑 凡能夠將其他物質聚集到自己表面上的物質,都稱為吸附劑。能聚集于吸附劑表面的物質稱為被吸附物。在吸附色譜中應用的吸附劑一般為固體。常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、活性炭、硅酸鎂、聚酰胺、硅藻土等。 ①硅膠 色
關于反相色譜的介紹
根據流動相和固定相相對極性不同,液相色譜分為正相色譜和反相色譜。流動相極性大于固定相極性的情況,稱為反相色譜。非極性鍵合相色譜可作反相色譜。在現代液相色譜中應用最廣泛,現代液相色譜分析工作的70%以上是在非極性鍵合固定相上進行的。
能影響到反相色譜柱的因素有哪些?
反相色譜柱是指利用非極性的反相介質為固定相,極性有機溶劑的水溶液為流動相,根據溶質極性(疏水性)的差別進行溶質分離與純化的洗脫色譜法。與HIC一樣,RPC中溶質也通過疏水性相互作用分配于固定相表面,但是,RPC固定相表面完全被非極性基團所覆蓋,表現出強烈的疏水性。因此,必須用極性有機溶劑(如甲醇
影響反相液相色譜儀ODS柱性能的因素
影響反相液相色譜儀ODS柱性能的因素有色譜柱物理性質和化學性質。一、色譜柱物理性質:1、硅膠純度:硅膠純度指填料硅膠的純度和殘留金屬離子的濃度。A類硅膠由于帶負電荷的殘留硅羥基和酸性表面上金屬的含量高(硅羥基pKa低),導致堿性化合物發生拖尾。B類硅膠(高純)由于金屬含量低,硅羥基pKa高,堿性化合
影響反相離子對色譜儀色譜保留的因素
影響反相離子對色譜儀色譜保留的因素有流動相pH值、離子對試劑種類、離子對試劑濃度、有機溶劑性質、有機溶劑濃度、緩沖鹽濃度和柱溫等。一、流動相pH值:反相離子對色譜常用的流動相是甲醇-水、乙腈-水,流動相中一般含有3~10mol/L的離子對試劑。流動相pH值決定離子化合物的解離度,合適的pH值是反相離
關于反相色譜的應用的介紹
反相介質性能穩定。分離效率高,可分離蛋白質、肽、氨基酸、核酸、甾類、脂類、脂肪酸、糖類、植物堿等含有非極性基團的各種物質。 例如使用C8和C18改造的硅膠柱的高壓液相來制備和分析四環素類抗生素,對于四環素類抗生素來說.用氧化鋁、硅膠、離子交換樹脂等來進行制備性分離會顯得極性太強。反相色譜硅膠L
影響反相液相色譜儀溶質保留值的因素
反相液相色譜儀分析中溶質保留值主要由鍵合相種類、固定相表面積和流動相組成決定。 一、鍵合相種類: 溶質保留值通常隨鏈長增長或鍵合相疏水性增強而增大。 二、固定相表面積: 溶質保留值與固定相表面積成正比。當其它條件相同時,溶質在低表面積色譜柱上的保留值小。 三、流動相組成: 溶質保留值
影響反相液相色譜儀溶質保留值的因素
反相液相色譜儀分析中溶質保留值主要由鍵合相種類、固定相表面積和流動相組成決定。一、鍵合相種類:溶質保留值通常隨鏈長增長或鍵合相疏水性增強而增大。二、固定相表面積:溶質保留值與固定相表面積成正比。當其它條件相同時,溶質在低表面積色譜柱上的保留值小。三、流動相組成:溶質保留值可通過改變流動相組成或溶劑強
影響親和色譜的因素介紹
1、上樣體積 若目標產物與配基的結合作用較強,上樣體積對親和色譜效果影響較小。若二者間結合力較弱,樣品濃度要高一些,上樣量不要超過色譜柱載量的5%~10%。(這個載量是指色譜柱所吸附的配體的量) 2、柱長 親和柱的長度需要根據親和介質的性質確定。如果親和介質的載量高,與目標產物(目標物)的
影響反相離子對色譜儀保留值的因素
氣相色譜儀的柱溫直接影響色譜柱的使用壽命、柱的選擇性、柱效能和分析速度,是重要的操作條件。 柱溫低有利于分配,有利于組分的分離。 但柱溫過低,組分可能在色譜柱冷凝或傳質阻力增加,使色譜峰擴張,甚至拖尾。 柱溫高,雖有利于傳質,但分配系數變小,不利于分離。 一般通過
影響反相離子對色譜儀保留值的因素
影響反相離子對色譜儀保留值的因素有PH值、離子對試劑的性質與濃度、溶劑極性、離子強度等。一、PH值:對于陰離子的分離,PH值下降,k減小。改善分離選擇性的有效方法。二、離子對試劑的性質與濃度:離子對試劑烷基鏈越長,疏水性越大,k越大。三、溶劑極性:甲醇和乙腈等含量增加,洗脫強度增大,k減小。洗脫強度
影響正相硅膠反相洗脫色譜儀保留值的因素
影響正相硅膠反相洗脫色譜儀保留值的因素:一、色譜流動相保持一定的PH值和離子強度。隨著流動相中水的比例增加,洗脫能力減小。 二、流動相中三乙胺濃度升高,對含堿性基團組分的洗脫能力提高,保留時間縮短。三乙胺為陰離子競爭離子,用于競爭硅羥基,以消除硅羥基對生物間的吸附。三、堿性組分的保留隨緩沖鹽濃度的增
影響反相鍵合相液相色譜儀溶質保留的因素
影響反相鍵合相液相色譜儀溶質保留的因素有溶質的極性、溶質分子中非極性部分的總表面積、鍵合相上的烷基總面積和流動相的表面張力等。一、溶質的極性:溶質的極性越弱,疏水性越強,保留值越大。二、溶質分子中非極性部分的總表面積:溶質和固定相接觸的總表面積越大,保留值越大。三、鍵合相上的烷基總面積:烷基鍵合相的
反相色譜介紹
反相液相色譜柱效高、分離能力強、保留機理清楚,是液相色譜分離模式中使用zui為廣泛的一種,對于生物大分子、蛋白質及酶的分離分析,反相液相色譜正受到越來越多的關.反相色語法是以表面非極性載體為固定相,面以比固定相極性強的溶劑為流動相的—種液相色譜分離模式.反相色譜固定相大多是硅膠表面鍵合疏水基團,基于
影響反相鍵合固定相色譜儀溶質保留值的因素
影響反相鍵合固定相色譜儀溶質保留值的因素有流動相、鍵合固定相和溶質等。一、流動相:組分的保留值隨流動相極性的減小而減小。二、鍵合固定相:1、烷基覆蓋量增加,k值增大。2、烷基鏈長增加,k值增大。三、溶質:1、非離子化合物:極性大,k值小。2、非極性化合物:分子表面積大,k值大。3、同系物:鏈長增大,
影響反相離子對色譜儀分離選擇性的因素
影響反相離子對色譜儀分離選擇性的因素有溶劑極性、離子強度、pH值、離子對試劑性質及濃度、溫度等。一、溶劑極性:溶劑極性小,洗脫能力強,k值小。二、離子強度:水溶液中離子強度大,洗脫能力強,k值小。三、pH值:對于弱酸,pH值接近7,組分完全電離,zui易形成離子對,k值zui大。pH值降低,固定相中
導致液相色譜儀反相色譜柱污染的因素
反相色譜在高效液相色譜中是應用最廣泛的技術,主要是因為它適用于分析極大多數的非極性物質和離子化合物。大多數用于反相色譜的固定相都是天然的疏水物質,因此,分析物是按照它們與固定相的疏水相互作用的大小來分離的。? ? 反相色譜柱在分離檢測過程中,分析物和基質污染能使固定相受到影響,使用過程中應當注意固定
影響電泳技術的因素介紹
1.電泳介質的pH值溶液的pH值決定帶電物質的解離程度,也決定物質所帶凈電荷的多少。對蛋白質,氨基酸等類似兩性電解質,pH值離等電點越遠,粒子所帶電荷越多,泳動速度越快,反之越慢。因此,當分離某一種混合物時,應選擇一種能擴大各種蛋白質所帶電荷量差別的pH值,以利于各種蛋白質的有效分離。為了保證電泳過
影響色譜柱分離度的因素介紹
影響色譜柱分離度的因素是固定相的種類、性質(粒度、粒徑分布等)、填充狀況、柱長、流動相的種類和流速及測定柱效所用物質的性質等。具體如下:(1)色譜長度和填料的性質,色譜柱越長,組分之間分析越好,但色譜柱越長壓降越大,而輸入的壓力是有限的。色譜柱過長會增大進出口壓力比,相反會影響色譜峰分離;(2)色譜
親和色譜的影響因素
1、上樣體積若目標產物與配基的結合作用較強,上樣體積對親和色譜效果影響較小。若二者間結合力較弱,樣品濃度要高一些,上樣量不要超過色譜柱載量的5%~10%。(這個載量是指色譜柱所吸附的配體的量)2、柱長親和柱的長度需要根據親和介質的性質確定。如果親和介質的載量高,與目標產物(目標物)的作用力強,可以選
關于阿斯巴甜合成的影響因素介紹
合成影響因素(乙醇),有研究表明,阿斯巴甜在水中溶解度一般較小,約為1%(25℃),但隨著溶劑中乙醇含量的不斷增加,阿斯巴甜的溶解度也逐漸上升,當阿斯巴甜在乙醇水溶液中溶解度到達峰值時,隨著乙醇繼續加入,阿斯巴甜溶解度會逐漸降低。 合成影響因素(溫度),常溫下配置相同甜度的阿斯巴甜溶液和白砂糖
關于吸附層析的影響因素介紹
吸附色譜的分離效果,決定于吸附劑、溶劑和被分離化合物的性質這三個因素。 (1)吸附劑 凡能夠將其他物質聚集到自己表面上的物質,都稱為吸附劑。能聚集于吸附劑表面的物質稱為被吸附物。在吸附色譜中應用的吸附劑一般為固體。常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、活性炭、硅酸鎂、聚酰胺、硅藻土等。 ①硅膠 色
關于反相色譜法的基本信息介紹
一般用非極性固定相(如C18、C8);流動相為水或緩沖液,常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用最為廣泛,據統計,它占整個HPLC應用的80%左右。
高速逆流色譜的影響因素及技術發展
影響因素 1.固定相的保留值 在逆流色譜中,留在管中固定相的量是影響溶質峰分離度的一個重要因素,高保留量將會大大改進峰分離度。 儀器對保留值的影響(外因) 研究表明:螺旋管支持件的自轉半徑r與公轉半徑R之比B值是一個影響兩相互不混溶溶劑在旋轉螺旋管內保留的關鍵因素。用大直徑的支持件使值進一
關于內標法的影響因素的介紹
影響內標和被測組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學方面的、色譜方面的和儀器方面的三類。 由化學方面的原因產生的面積比的變化常常在分析重復樣品時出現。 化學方面的因素包括: 1、內標物在樣品里混合不好; 2、內標物和樣品組分之間發生反應, 3、內標物純度可變等。 對于一個比較成熟的方法
反相色譜的樣品保留的介紹
反相色譜中樣品的保留值主要由固定相比表面積、鍵合相種類和濃度決定,保留值通常隨鏈長增長或鍵合相的疏水性增強而增大.對于非極性化合物通常遵循以下規則:(弱)非鍵合硅膠《氰基