簡述單克隆抗體技術的基本原理
哺乳類細胞DNA合成可分為兩條途徑,①從頭(de novo)合成途徑,利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶,可被氨基蝶呤(A)阻斷;②補救(salvag-e)合成途徑,在次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶( HGPRT)存在下利用次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。 單克隆抗體技術的流程為:脾細胞和骨髓瘤細胞在聚乙二醇(PEG)作用下發生細胞融合;加入HAT選擇培養基(含H、A和T)后,未融合的骨髓瘤細胞因其從頭合成途徑被氨基蝶呤阻斷,而又缺乏HGPRT不能利用補救途徑合成DNA,從而死亡;未融合的脾細胞難以在體外培養而死亡;融合細胞因從脾細胞獲得HGPRT,故可在HAT選擇培養基中存活和增殖。......閱讀全文
簡述單克隆抗體技術的基本原理
哺乳類細胞DNA合成可分為兩條途徑,①從頭(de novo)合成途徑,利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶,可被氨基蝶呤(A)阻斷;②補救(salvag-e)合成途徑,在次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶( HGPRT)存在下利用次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。 單克隆抗體技術的流程為:脾細胞和骨髓瘤細胞在聚乙二醇
單克隆抗體技術的基本原理
要制備單克隆抗體需先獲得能合成專一性抗體的單克隆 B 淋巴細胞,但這種 B 淋巴細胞不能在體外生長。而實驗發現骨髓瘤細胞可在體外生長繁殖,應用細胞雜交技術使骨髓瘤細胞與免疫的淋巴細胞二者合二為一,得到雜種的骨髓瘤細胞。這種雜種細胞繼承了兩種親代細胞的特性,既具有 B 淋巴細胞合成專一抗體的特性,也有
單克隆抗體技術的基本原理
哺乳類細胞DNA合成可分為兩條途徑,①從頭(de novo)合成途徑,利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶,可被氨基蝶呤(A)阻斷;②補救(salvag-e)合成途徑,在次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶( HGPRT)存在下利用次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。單克隆抗體技術的流程為:脾細胞和骨髓瘤細胞在聚乙二醇(PEG
簡述單克隆抗體技術的凍存與復蘇
(1)雜交瘤細胞的凍存。在建立雜交瘤細胞的過程中,有時一次融合產生很多“陽性”孔,來不及對所有的雜交瘤細胞作進一步的工作,需要把其中一部分細胞凍存起來;另一方面,為了防 止實驗室可能發生的意外事故,如停電、污染、培養箱的溫度或CO2控制器失靈等給正在建立中的雜交瘤帶來災難,通常盡可能早地凍存一部
簡述基因擴增技術的基本原理
PCR擴增DNA的原理是:先將含有所需擴增分析序列的靶DNA雙鏈經熱變性處理解開為兩個寡聚核苷酸單鏈,然后加入一對根據已知DNA序列由人工合成的與所擴增的DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段作為引物,即左右引物。此引物范圍就在包括所欲擴增的DNA片段,一般需20-30個堿基對,過少則難保持與D
簡述HIFU微創技術的基本原理
在組織病理學上表現為凝固性壞死,從而達到破壞病變目的;HIFU微創技術所產生的高溫效應、空化效應、機械效應和超聲生化等效應,使腫瘤組織凝固性壞死,瞬態失去增殖、浸潤和轉移的能力并最終被機體吸收。這個過程是不可逆的,徹底達到“消融”的目的。
簡述核酸分子雜交技術的基本原理
具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補還原成雙鏈。雜交的雙方是待測核酸序列及探針(probe),待測核酸序列可以是克隆的基因征段,也可以是未克隆化的基因組DNA和細胞總RNA。核酸探針是指用放射性核素、生物素或其他活性物質標記的,能與特定的核酸序列發生
單克隆抗體技術的技術特點
一是特異性,針對特定的單一抗原表位,它具有高度的特異性,抗腫瘤抗體藥物的研究表明,其特異性主要表現為特異性結合、選擇性殺傷靶細胞、體內靶向性分布以及具有更強的療效。二是多樣性,主要表現在靶抗原的多樣性、抗體結構的多樣性、作用機制的多樣性等方面。三是定向性,抗體藥物可以定向制造,就是根據需要制備具有不
單克隆抗體技術的技術應用
疾病診斷利用單抗進行疾病的診斷目前主要表現在人類疾病和畜禽傳染病的診斷方面,尤其在一些感染性疾病和腫瘤的診斷方面。主要通過鑒定病原體或腫瘤抗原來診斷人是否感染相應疾病。疾病治療目前利用單抗對疾病進行治療已取得了很大的成果,主要是將單抗同藥物耦聯,再與病原體或腫瘤的特異抗原結合后發揮作用。食品衛生目前
單克隆抗體技術的技術特點
①蛋白質的精細結構;②淋巴細胞亞群的表面新抗原;③組織相容性抗原;④激素和藥物的放射免疫(或酶免疫)分析;⑤腫瘤的定位和分類;⑥純化微生物和寄生蟲抗原;⑦免疫治療和與藥物結合的免疫-化學療法?(“導彈”療法,利用單克隆抗體與靶細胞特異性結合,將藥物帶至病灶部位。因此,單克隆抗體可直接用于人類疾病的診
單克隆抗體技術的技術特點
一是特異性,針對特定的單一抗原表位,它具有高度的特異性,抗腫瘤抗體藥物的研究表明,其特異性主要表現為特異性結合、選擇性殺傷靶細胞、體內靶向性分布以及具有更強的療效。二是多樣性,主要表現在靶抗原的多樣性、抗體結構的多樣性、作用機制的多樣性等方面。三是定向性,抗體藥物可以定向制造,就是根據需要制備具有不
簡述單克隆抗體的動物免疫
單克隆抗體制備的宿主動物一般選用BALB/c小鼠,鼠單抗的應用范圍相當廣泛,一些國內外公司均開發出了兔的單克隆抗體制備技術。 免疫原分為可溶性抗原和顆粒性(細胞)抗原,用無菌鹽水稀釋并與佐劑混合,腹腔注射抗原與佐劑徹底混勻后形成的穩定乳狀液,在免疫原提供持續的免疫應答基礎上進行加強免疫 周期
簡述單克隆抗體的制備過程
1.對小鼠注射特定的抗原蛋白,使小鼠產生免疫反應;2.得到相應的B淋巴細胞;3.將小鼠骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合,再用特定的選擇培養基進行篩選;4.在該培養基上,未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡,只有融合的雜種細胞才能生長(這種雜種細胞的特點是既能迅速大量繁殖又能產生專一的抗體)5.
簡述單克隆抗體的抗原準備
抗原,是指能夠刺激機體產生(特異性)免疫應答,并能與免疫應答產物抗體和致敏淋巴細胞在體外結合,發生免疫效應(特異性反應)的物質。 抗原的基本特性有兩種, 一是誘導免疫應答的能力,也就是免疫原性, 二是與免疫應答的產物發生反應,也就是抗原性。 很多物質都可以成為抗原,抗原的具體分類可以參見
單克隆抗體技術
實驗概要顯微鏡下觀察血片或骨髓片,找出異常細胞。實驗原理B淋巴細胞能夠產生抗體,但在體外不能進行無限分裂;而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代,但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后,用一特殊選擇培養基(HAT)阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路,而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存,且既能產
單克隆抗體技術
實驗原理 B淋巴細胞能夠產生抗體,但在體外不能進行無限分裂;而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代,但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后,用一特殊選擇培養 基(HAT)阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路,而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存,且既能產生抗體,又能無限增殖,并以此生產抗
單克隆抗體技術
實驗概要顯微鏡下觀察血片或骨髓片,找出異常細胞。實驗原理B淋巴細胞能夠產生抗體,但在體外不能進行無限分裂;而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代,但不能產生抗體。將這兩種細胞融合后,用一特殊選擇培養基(HAT)阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路,而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存,且既能產
單克隆抗體制備的基本原理與過程
單克隆抗體制備的原理:B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續分化增殖下去,因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞,再進一步克隆化,這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤
單克隆抗體技術的技術類型劃分
鼠源性抗體雜交瘤單克隆抗體制備技術的基本原理是利用聚乙二醇作為細胞融合劑,使免疫的小鼠脾細胞與具有不斷繁殖能力的小鼠骨髓瘤細胞在體外進行融合,在HAT選擇性培養基的作用下,只讓融合成功的雜交瘤細胞生長,經過反復的免疫學檢測篩選和單個細胞培養(克隆化),最終獲得既能產生所需單克隆抗體,又能不斷繁殖的雜
單克隆抗體技術的介紹
單克隆抗體技術(monoclonal antibody technique) 1975年英國科學家Milstein和Kohler所發明,并獲得1984年諾貝爾醫學獎。 1984 德國人G. J. F.Kohler、阿根廷人C. Milstein[3]和丹麥科學家N. K. Jerne由于發展了單
單克隆抗體技術的特點
一是特異性,針對特定的單一抗原表位,它具有高度的特異性,抗腫瘤抗體藥物的研究表明,其特異性主要表現為特異性結合、選擇性殺傷靶細胞、體內靶向性分布以及具有更強的療效。 二是多樣性,主要表現在靶抗原的多樣性、抗體結構的多樣性、作用機制的多樣性等方面。 三是定向性,抗體藥物可以定向制造,就是根據需
單克隆抗體技術的方法
1、抗原準備抗原(Ag)是指所有能誘導機體發生免疫應答的物質。即能被 T/B 淋巴細胞表面的抗原受體(TCR/BCR)特異性識別與結合,活化 T/B 細胞,使之增殖分化,產生免疫應答產物(致敏淋巴細胞或抗體),并能與相應產物在體內外發生特異性結合的物質。因此,抗原物質具備兩個重要特性:一是誘導免疫應
單克隆抗體技術的原理
哺乳類細胞DNA合成可分為兩條途徑,①從頭(de novo)合成途徑,利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶,可被氨基蝶呤(A)阻斷;②補救(salvag-e)合成途徑,在次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶( HGPRT)存在下利用次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。 單克隆抗體技術的流程為:脾細胞和骨髓瘤細胞在聚乙二醇
單克隆抗體技術簡介
一種免疫學技術,將產生抗體的單個B淋巴細胞同骨髓腫瘤細胞進行細胞融合, 獲得既能產生抗體, 又能無限增殖的雜種細胞,并以此生產抗體。是僅由一種類型的細胞制造出來的抗體,對應于多克隆抗體、多株抗體——由多種類型的細胞制造出來的一種抗體。
簡述疫苗的基本原理
疫苗是將病原微生物(如細菌、立克次氏體、病毒等)及其代謝產物,經過人工減毒、滅活或利用轉基因等方法制成的用于預防傳染病的自動免疫制劑。疫苗保留了病原菌刺激動物體免疫系統的特性。當動物體接觸到這種不具傷害力的病原菌后,免疫系統便會產生一定的保護物質,如免疫激素、活性生理物質、特殊抗體等;當動物再次
簡述質譜法的基本原理
質譜法的基本原理是通過分析離子化樣品的質荷比來實現對被測化合物定性定量分析。當被檢測樣品進入質譜儀,在質譜儀離子源中,化合物被離子轟擊,電離成分子離子和碎片離子,這些離子在質量分析器中,由于質荷比不同,運動軌跡不同,通過電子倍增管檢測放大的信號傳入顯示器,展現出一幅完整的質譜圖。一般質譜圖的橫坐
簡述糖原的基本原理
糖原由D-葡萄糖的分支或直鏈組成,在肝和肌肉最豐富。過碘酸是一種強氧化劑,能將葡萄糖中乙二醇基(CHOH-CHOH)氧化成二個游離醛基(—CHO),游離醛基與Schiff's試劑反應生成紫紅色產物,顏色深淺與多糖含量成正比。由于單糖在固定、脫水和包埋等組織化學操作過程中被抽提掉,故一般組
簡述醛固酮的基本原理
醛固酮進入遠曲小管和集合管上皮細胞后,與胞漿內受體結合,形成激素-受體復合體,后者通過核膜,與核中DNA特異性結合位點相互作用,調節特異性mRNA轉錄,最終合成多種醛固酮誘導蛋白,進而使管腔膜對Na+的通透性增大,線粒體內ATP合成和管周膜上鈉泵的活動性增加。從而導致對Na+的重吸收增強,對水的
簡述XRF的基本原理
X射線光管發射的原級X射線射入至樣品,激發樣品中各元素的特征譜線; 探測器記錄特征波長的X射線光子N; 根據特定波長X射線光子N的強度,計算出該波長對應的元素濃度。
單克隆抗體技術的特點簡介
一是特異性,針對特定的單一抗原表位,它具有高度的特異性,抗腫瘤抗體藥物的研究表明,其特異性主要表現為特異性結合、選擇性殺傷靶細胞、體內靶向性分布以及具有更強的療效。 二是多樣性,主要表現在靶抗原的多樣性、抗體結構的多樣性、作用機制的多樣性等方面。 三是定向性,抗體藥物可以定向制造,就是根據需