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  • RNA干擾相關知識RNARISC

    RNA-induced silencing complex(RISC):一種RNA-蛋白質復合物,通過與目標mRNA完全或者部分的互補配對來實施切割或者翻譯抑制功能。SiRNA組裝siRISC,miRNA組裝miRISC。RISCs(無論siRISC還是miRISC)包括兩種類型:切割型和不切割型。研究表明,RISC當中的AGO蛋白質決定了RISC是切割型的還是不切割型的。......閱讀全文

    RNA干擾相關知識RNARISC

    RNA-induced silencing complex(RISC):一種RNA-蛋白質復合物,通過與目標mRNA完全或者部分的互補配對來實施切割或者翻譯抑制功能。SiRNA組裝siRISC,miRNA組裝miRISC。RISCs(無論siRISC還是miRISC)包括兩種類型:切割型和不切割型。

    RNA干擾相關知識Microprocessor

    Microprocessor:一種核內的復合物,主要由Drosha和Pasha兩者組成,在miRNA的生物合成中促使原始的miRNA成為miRNA前體。

    RNA干擾相關知識Slicer

    Slicer:在切割型RISC中的內切酶的另外一種表述方法。

    RNA干擾相關知識RNARITS)

    RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing(RITS):是一種組織染色質變型的復合物。RITS復合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白質,通過結合到異染色質的基因池上來促使異染色質上基因的沉默。

    RNA干擾相關知識Holo-RISC

    Holo RISC:是在果蠅中發現的有著RISC活性的最大的RNA-蛋白質復合物(80S)。Holo RISC的生物學活性牽涉到幾乎所有的RISC的成員,RLC成員,和一些其他通路上的蛋白質分子。Holo RISC的存在,表明了RISC組裝不是孤立的,同時還是一個有序的過程。以RISC為中心的RNA

    RNA干擾相關知識Dicer(DCR)

    Dicer(DCR):是RNAase Ⅲ家族中的一員,主要切割dsRNA或者莖環結構的RNA前體成為小RNAs分子。對應地,我們將這種小RNAs分子命名為siRNAs和miRNA。Dicer有著較多的結構域,最先在果蠅中發現,并且在不同的生物體上表現出很高的保守性。

    RNA干擾相關知識Core-RISC

    Core RISC:是介導目標mRNA切割過程或者翻譯抑制的最小的RNA-蛋白質復合物。在人和果蠅身上發現的分子量少于200kDa的RISCs可能就是core RISC的重要代表。AGO蛋白質和Core RISC密切相關。

    RNA干擾相關知識Argonaute(AGO)

    Argonaute(AGO):一類龐大的蛋白質家族,是組成RISCs復合物的主要成員。AGO蛋白質主要包含兩個結構域:PAZ和PIWI兩個結構域,但具體功能尚不清楚。研究表明,PAZ結構域結合到siRNA 的3’的二核苷酸突出端;一些AGO蛋白質的PIWI結構域賦予slicer以內切酶的活性。PAZ

    RNA干擾相關知識MicroRNA(miRNA)

    MicroRNA(miRNA):是含有莖環結構的miRNA前體,經過Dicer加工之后的一類非編碼的小RNA分子(~21-23個核苷酸)。MiRNA,以及miRISCs(RNA-蛋白質復合物)在動物和植物中廣泛表達。因之具有破壞目標特異性基因的轉錄產物或者誘導翻譯抑制的功能,miRNA被認為在調控發

    RNA干擾相關知識Small-interfering-RNA(siRNA)

    Small interfering RNA(siRNA):是一種小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成員,激發與之互補的目標mRNA的沉默。

    RNA干擾相關知識RISC-loading-complex(RLC)

    RISC loading complex(RLC):是一種促使RISC形成的復合物。RLC有方向性地調節小RNA雙螺旋,為以后的RISC組裝作好鋪墊。siRISC loading complexes (siRLCs)在果蠅中研究最多。有研究者認為在果蠅中的siRLCs包含DCR2-R2D2異型二聚體

    RNA干擾(RNA-interference,RNAi)基礎知識(1)

    Rnai最近由于RNA 干擾(RNA interference,RNA i)的發現使反義領域的研究增多。這種自然發生的現象最早是在秀麗線蟲中發現的(1),是序列特異性地使轉錄后的基因沉默的有力機制。由于最近兩年在 RNA i領域取得的進步,已經有許多這方面的綜述發表(2-4)。RNA 干擾是

    RNA干擾(RNA-interference,RNAi)基礎知識(3)

    SiRNASmall interfering RNA (siRNA):是一種小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成員,激發與之互補的目標mRNA的沉默。ShRNAshRNA 短發夾RNAshRNA

    RNA干擾(RNA-interference,RNAi)基礎知識(2)

    1RNA i的發現RNA i是在研究秀麗新小桿線蟲(C. elegans)反義RNA (antisenseRNA )的過程中發現的,由dsRNA 介導的同源RNA 降解過程。1995年,Guo等發現注射正義RNA (senseRNA )和反義RNA 均能有效并特異性地抑制秀麗新小桿線蟲par

    RNA干擾主體實驗的相關介紹

      siRNA表達載體構建好后,即可進行RNA干擾主體實驗。  RNA干擾主體實驗的重點在于:  成功將siRNA表達載體導入目的細胞  如果目的細胞的質粒轉染效率較低(低于70%),則應采用腺病毒或慢病毒載體,利用病毒載體的高感染率、高表達特性,更好地開展RNA干擾主體實驗。  設置好分組和對照 

    RNA干擾的體外轉錄的相關介紹

      以DNA Oligo為模版,通過體外轉錄合成siRNAs,成本相對化學合成法而言比較低,而且能夠比化學合成法更快的得到siRNAs。不足之處是實驗的規模受到限制,雖然一次體外轉錄合成能提供足夠做數百次轉染的siRNAs,但是反應規模和量始終有一定的限制。而且和化學合成相比,還是需要占用研究人員相

    RNA干擾技術(RNA-interference,RNAi)

    1995年,康乃爾大學的Su Guo博士在試圖阻斷秀麗新小桿線蟲(C. elegans)中的par-1基因時,發現了一個意想不到的現象。她們本是利用反義RNA技術特異性地阻斷上述基因的表達,而同時在對照實驗中給線蟲注射正義RNA(sense RNA)以期觀察到基因表達的增強。但得到的結果

    RNA干擾的簡介

      RNAi研究取得了突破性進展,被《Science》雜志評為2001年的十大科學進展之一,并名列2002年十大科學進展之首。由于使用RNAi技術可以特異性剔除或關閉特定基因的表達,所以該技術已被廣泛用于探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的基因治療領域。

    RNA干擾主體實驗

    siRNA表達載體構建好后,即可進行RNA干擾主體實驗。RNA干擾主體實驗的重點在于:成功將siRNA表達載體導入目的細胞如果目的細胞的質粒轉染效率較低(低于70%),則應采用腺病毒或慢病毒載體,利用病毒載體的高感染率、高表達特性,更好地開展RNA干擾主體實驗。設置好分組和對照按照nature的標準

    RNA干擾功能特點

    1.高效性:Elbashir等在研究中發現分別為25 nmol/L與100 nmol/L的起始雙鏈RNA產生的結果是一樣的,只是高濃度起始的更有效些。將雙鏈RNA濃度降低到1.5 nmol/L時產生的基因沉默效果變化不大,只有當濃度降低到0.05 nmol/L時,沉默的效果才消失。Holen等也證實

    RNA干擾回復實驗

    RNA干擾回復實驗,主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects(脫靶效應)最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出(Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce

    RNA干擾的概念

    RNA干擾(RNA interference,RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。基因沉默,主要有轉錄前水平的基因沉默(TGS)和轉錄后水平的基因沉默(PTGS)兩類:TGS是指由于DNA修

    RNA干擾回復實驗

    RNA干擾回復實驗,主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects(脫靶效應)最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出(Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce

    RNA干擾的概念

    RNA干擾(RNA interference,RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。基因沉默,主要有轉錄前水平的基因沉默(TGS)和轉錄后水平的基因沉默(PTGS)兩類:TGS是指由于DNA修

    RNA干擾制備方法

    化學合成許多國外公司都可以根據用戶要求提供高質量的化學合成siRNA。主要的缺點包括價格高,定制周期長,特別是有特殊需求的。由于價格比其他方法高,為一個基因合成3—4對siRNAs 的成本就更高了,比較常見的做法是用其他方法篩選出最有效的序列再進行化學合成。最適用于:已經找到最有效的siRNA的情況

    RNA干擾回復實驗

    RNA干擾回復實驗,主要是為了說明Off-target效應。Off-target效應Off-target effects(脫靶效應)最早由Dharmacon科學家Jackson和他的同事們提出(Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce

    RNA干擾的特點

    1.高效性:Elbashir等在研究中發現分別為25 nmol/L與100 nmol/L的起始雙鏈RNA產生的結果是一樣的,只是高濃度起始的更有效些。將雙鏈RNA濃度降低到1.5 nmol/L時產生的基因沉默效果變化不大,只有當濃度降低到0.05 nmol/L時,沉默的效果才消失。Holen等也證實

    RNA干擾實驗技術

    實驗概要本文介紹了RNA干擾的原理及基本實驗方法,包括了siRNA的設計、siRNA的制備和siRNA的轉染等方法,及RNA干擾實驗中的注意事項。實驗原理近年來的研究表明,將與mRNA對應的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導入細胞,可以使mRNA發生特異性的降解,導致其相應的基因

    RNA干擾主體實驗

    siRNA表達載體構建好后,即可進行RNA干擾主體實驗。RNA干擾主體實驗的重點在于:成功將siRNA表達載體導入目的細胞如果目的細胞的質粒轉染效率較低(低于70%),則應采用腺病毒或慢病毒載體,利用病毒載體的高感染率、高表達特性,更好地開展RNA干擾主體實驗。設置好分組和對照按照nature的標準

    RNA干擾的定義

    RNA干擾(RNA interference,RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。

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