比較液相色譜法中正相色譜法與反相色譜法的異同
正相色譜:流動相極性小于固定相極性反相色譜:流動相極性大于固定相極性正相色譜用的固定相通常為硅膠，以及其他具有極性官能團，如胺基團和氰基團的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基或其他團的極性較強，因此，分離的次序是依據樣品中的各組份的極性大小，即極性強弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如:正乙烷、氯仿、二氯甲烷等。反相色譜填料常是以硅膠為基礎，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色色譜所使用的流動相極性較強，通常為水，緩沖液與甲醇，已腈等混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合最先被沖出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。常用的反相填料有C18、C8、C4、C6H5等。以上樣品出峰順序為一般情況，而鑒于實際應用中影響色譜峰的諸多因素，可能會違背以上一般規律。因此欲深入詳細的了解，建議參考相關書籍。......閱讀全文
正相色譜和反相色譜的區別
在正相色譜中，一般采用極性鍵合固定相，硅膠表面鍵合的是極性的有機基團，鍵合相的名稱由鍵合上去的基團而定。最常用的有氰基（-CN）、氨基（-NH2）、二醇基（DIOL）鍵合相。流動相一般用比鍵合相極性小的非極性或弱極性有機溶劑，如烴類溶劑，或其中加入一定量的極性溶劑（如醇、乙腈等），以調節流動相的洗脫
正相色譜和反相色譜的區別
1、固定相不同：正相硅膠具有極性基的表面，而反相硅膠是經過改性，表面鍵合烷基鏈（例如 C-18），極性更小，因此對極性化合物有較小的保留。2、適用的樣品類型不同：由于反相條件下，修飾了硅膠表面的羥基，使其極性降低，使得其適用性變得更加寬廣（相對比反相而言），各類極性的大小分子，天然產物，都可以在反相
正相色譜和反相色譜的區別
1、固定相不同：正相硅膠具有極性基的表面，而反相硅膠是經過改性，表面鍵合烷基鏈（例如 C-18），極性更小，因此對極性化合物有較小的保留。2、適用的樣品類型不同：由于反相條件下，修飾了硅膠表面的羥基，使其極性降低，使得其適用性變得更加寬廣（相對比反相而言），各類極性的大小分子，天然產物，都可以在反相
反相色譜與正相色譜的差異
在液-固吸附色譜,，液-液分配色譜這兩種液相色譜中才涉及到正相色譜及反相色譜。液-固吸附色譜（固定相是固體吸附劑，它是根據物質在固定相是吸附作用差異來分離的。吸附作用越強，K值越大，保留時間越長）液-液分配色譜（是將固定液涂在擔體上作為固定相的，它的分離原理與液液萃取的原理相同，從而服從分配定律。在
正相色譜和反相色譜的區別
1、固定相不同：正相硅膠具有極性基的表面，而反相硅膠是經過改性，表面鍵合烷基鏈（例如 C-18），極性更小，因此對極性化合物有較小的保留。2、適用的樣品類型不同：由于反相條件下，修飾了硅膠表面的羥基，使其極性降低，使得其適用性變得更加寬廣（相對比反相而言），各類極性的大小分子，天然產物，都可以在反相
反相色譜柱的平衡方法
聚合物基質的反相色譜柱采用了聚甲基丙烯酸酯聚合物，制備而成具有不同孔徑和粒徑大小的各種規格的產品。TSKgel?聚合物基質反相色譜柱適用于較寬的pH范圍，即使在高pH下也具有很好的重復性。這類色譜柱在pH2-12下表現出極其穩定的化學特性。因此，在硅膠基質色譜柱適用受限的堿性pH下仍然可以使用。??
反相高效液相色譜1
方案1 蛋白質 RP-HPLC 的標準色譜條件實驗材料蛋白質標樣試劑、試劑盒乙睛（HPLC級）去離子水（HPLC級）三氟乙酸（TFA)儀器、耗材HPLC 色譜系統反相柱實驗步驟1.進行空白或對照層析譜分析（即在步驟①中不加樣）。一般這是進行一天層析工作的開始。下面是推薦使用的用于 RP-HPLC 系
反相高效液相色譜2
方案2 填充 RP-HPLC 毛細管微柱試劑、試劑盒甲醇n-丙醇反相硅膠TFA 乙腈溶劑體系儀器、耗材水浴超聲波儀色譜加樣器層析柱玻璃料末端接口環氧樹脂流動池正向光學掃描檢測器加熱槍加樣器液相色譜柱填充泵微柱聚丙烯離心管聚硅酸鹽管藍寶石切刀信號數據收集裝置硅膠隔膜Teflon接頭UV檢測器實驗步驟一
反相高效液相色譜3
方案3 不易分離的大分子量多肽的純化實驗實驗材料大分子量非極性多肽或蛋白質儀器、耗材層析柱HPLC 系統冷凍干燥器微量離心機標準的或專用 HPLC 儀器氮氣實驗步驟一、用于 RP-HPLC 純化的大分子非極性多肽或蛋白質樣品的制備1.將多肽樣品（如果蛋白質是通過固相化學合成法得到的，質量在 30~5
反相高效液相色譜5
方案5 用 RP-HPLC 技術對多肽和蛋白質混合物進行脫鹽實驗實驗材料蛋白質或多肽樣品試劑、試劑盒乙腈（HPLC級）2 -丙醇硝酸鈉硫脲三氟乙酸儀器、耗材分析型 HPLC 裝置色譜柱洗脫液瓶Hamilton 玻璃注射器氮氣量筒微量離心機流動相過濾裝置實驗步驟一、流動相的配制1.配制緩沖液 A(弱流
反相液相色譜儀種類
反相液相色譜儀種類有多種。1、按分離目的可分：實驗室反相液相色譜儀和工業反相液相色譜儀。2、按色譜柱形狀可分：反相液相填充柱色譜儀和反相液相毛細管柱色譜儀。3、按分離規模可分：微型反相液相色譜儀、小型反相液相色譜儀和大型反相液相色譜儀。4、按分離對象的離子性質可分：陰離子反相液相色譜儀和陽離子反相液
反相色譜柱的影響因素
液相色譜柱通常分為正相柱和反相柱。正相色譜柱大多以硅膠為柱，或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱；反相色譜柱填料主要以硅膠為基質，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團（ODS）稱為C18柱，其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱，GPC柱，聚合物填料
反相色譜柱的平衡方法
反相色譜柱的平衡方法????聚合物基質的反相色譜柱采用了聚甲基丙烯酸酯聚合物，制備而成具有不同孔徑和粒徑大小的各種規格的產品。TSKgel?聚合物基質反相色譜柱適用于較寬的pH范圍，即使在高pH下也具有很好的重復性。這類色譜柱在pH2-12下表現出極其穩定的化學特性。因此，在硅膠基質色譜柱適用受限的
反相高效液相色譜4
方案4 用 RP-HPLC 對固相合成的多肽進行純化實驗實驗材料用于分析的肽或蛋白試劑、試劑盒丙酮乙腈（HPLC級）2 -丙醇乙醇硝酸鈉硫酸鈉硫脲三氟乙酸儀器、耗材分析型 HPLC 裝置離心機錐形瓶玻璃容器Hamilton 玻璃注射器氮氣冷凍干燥機流動相過濾裝置氦氣制備型 HPLC 裝置實驗步驟一、
反相高效液相色譜概述
結果與保留值之間的關系：利用RP-HPLC 分離多肽首先得確定不同結構的多肽在柱上的保留情況。為了獲得一系列的保留系數，Wilce 等利用多線性回歸方法對2106 種肽的保留性質與結構進行分析，得出了不同氨基酸組成對保留系數影響的關系，其中極性氨基酸殘基在2～20 氨基酸組成的肽中，可減少在柱上
反相高效液相色譜6
方案6 計算機輔助方法優化梯度條件的 RP-HPLC 蛋白質分離實驗實驗材料HPLC 肽標準品蛋白質樣品試劑、試劑盒丙酮乙腈（HPLC級）磷酸磷酸二氫鈉硫脲硝酸鈉三氟乙酸儀器、耗材分析型 HPLC 裝置色譜柱洗脫液瓶Hamilton 玻璃注射器氮氣量筒微量離心機流動相過濾裝置實驗步驟一、配制流動相以
反相色譜法的簡介
“反相”這個詞有著其歷史背景。在1970年代，大多數液相色譜是在未修飾的氧化硅或氧化鋁上完成的，他們表面的化學性質是親水性的，對于極性化合物具有更強的親和力，因此也叫做“正相”（正常）色譜。若采用烷基鏈共價鍵合到支持表面上，則會倒換洗脫順序。在反相色譜法中，極性化合物先被洗脫出來，而非極性化合物被保
什么是反相色譜法？
反相色譜法（英語：Reversed-phase chromatography，RPC）反相色譜法(IGC)一反普通氣相色譜的測定方式。以被測的高分子為固定相、以惰性氣體為流動相，為了測定需要，在流動相中加入一些探針分子，它們是揮發性的低分子。將探針分子注入氣化室氣化后，由載氣帶入色譜柱，測定它們在兩
液相色譜儀反相色譜柱的平衡
液相色譜儀反相色譜柱是保存在乙腈中，新柱應先用10～20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱，一定確保分析樣品所使用的流動相與乙腈－水互溶。每天用足夠的時間以流動相平衡色譜柱，會在處理問題方面獲得zui大的“補償”，而且色譜柱的壽命會變得更長。平衡操作步驟：1、平衡開始時，將流速緩慢提高，用流動相平衡色譜
什么是正相色譜－什么是反相色譜
正相和反相的區別主要指是填料(固定相)的不同。正相色譜柱填料極性強,洗脫順序由弱到強；反相色譜柱填料極性弱，洗脫順序由強到弱。1、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其他具有極性官能團胺基團，如（NH2，APS）和氰基團（CN，CPS）的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基（SiO
反相色譜柱與正向色譜柱的區別
倒置或法線相位是基于相對于固定相位的移動相位的極性。如果流動相的極性強于固定相，則稱為反相色譜；如果流動相的極性弱于固定相，則稱為正相色譜。反相色譜流動相極性強，易攜帶極性分子，留下非極性分子。主要用于非極性樣品的分離。常用的高壓液相色譜就是這樣，有些人喜歡說，反相液相色譜其實是一種意義，也就是說，
色譜柱沖洗的那些事兒（反相色譜柱）
衣服穿久了要洗，色譜柱用久了要沖，不過沖洗色譜柱可不像洗衣服那么簡單，到底該怎么洗，還是有些門道的：第一個問題：用什么沖1.1：什么叫沖洗色譜柱通常，色譜柱沖洗就是把色譜柱上的臟東西和對色譜柱有損壞的東西沖出來，并且保存在合適的溶劑中；還有另一種情況，也可以算作沖洗的范疇，就是梯度方法間重新平衡色譜
什么是正相色譜－什么是反相色譜
正相和反相的區別主要指是填料(固定相)的不同。正相色譜柱填料極性強,洗脫順序由弱到強；反相色譜柱填料極性弱，洗脫順序由強到弱。1、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其他具有極性官能團胺基團，如（NH2，APS）和氰基團（CN，CPS）的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基（SiO
色譜柱沖洗的那些事兒（反相色譜柱）
衣服穿久了要洗，色譜柱用久了要沖，不過沖洗色譜柱可不像洗衣服那么簡單，到底該怎么洗，還是有些門道的：第一個問題：用什么沖1.1：什么叫沖洗色譜柱通常，色譜柱沖洗就是把色譜柱上的臟東西和對色譜柱有損壞的東西沖出來，并且保存在合適的溶劑中；還有另一種情況，也可以算作沖洗的范疇，就是梯度方法間重新平衡色譜
Spursil極性改性反相色譜柱特性
Spursil?HPLC 柱是以高純硅膠為基質，采用獨特的極性改性技術生產的色譜柱。這個系列的色譜柱不但保留了傳統硅膠基質反相色譜柱的性能，而且又增加了一些新的特性：?* 填料表面具有極性基團，適合于高水相流動相條件下的分離；* 增強了對親水性、極性化合物的保留能力；* 獨特的選擇性和優異的分離度；
反相色譜法的特點介紹
一般用非極性固定相（如C18、C8)；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用最為廣泛，據統計，它占整個HPLC應用的80%左右。
關于反相色譜的應用的介紹
反相介質性能穩定。分離效率高,可分離蛋白質、肽、氨基酸、核酸、甾類、脂類、脂肪酸、糖類、植物堿等含有非極性基團的各種物質。 例如使用C8和C18改造的硅膠柱的高壓液相來制備和分析四環素類抗生素,對于四環素類抗生素來說．用氧化鋁、硅膠、離子交換樹脂等來進行制備性分離會顯得極性太強。反相色譜硅膠L
反相高效液相色譜的原理
在反相液相色譜中，固定相的極性小于流動相，洗脫順序取決于溶質分子的疏水性，疏水性強的保留時間長！
毛細管反相色譜（CCIGC）介紹
將已經決定濃度的去除氣體的高聚物溶液裝入小尺寸的石英毛細管（直徑為0.053cm）中就可以制得毛細管柱。毛細管的一端密封，然后在另一端抽真空，當溶劑揮發后，就有一層薄的高聚物留在了毛細管的內壁。如果毛細管的表面均勻?，溶劑的揮發和濕潤性質合適，溶液的粘度可以接受，那么毛細管內部表面形成的膜將十分均勻
反相專用色譜儀類型
反相專用色譜儀類型有多種。1、按分離目的可分：化驗室反相專用色譜儀和工業反相專用色譜儀。2、按功能可分：分析型反相專用色譜儀和制備型反相專用色譜儀。3、按分離原理可分：反相專用分配色譜儀和反相專用離子色譜儀。4、按進樣自動性可分：自動進樣反相專用色譜儀和手動進樣反相專用色譜儀。5、按固定相性質可分：