新策略助力蛋白蛋白相互作用先導化合物設計
中國科學院上海藥物研究所研究員羅成、周兵、陳奕和華東師范大學研究員陳示潔合作，提出“強支點占據-杠桿干擾”（FOLP）的蛋白-蛋白相互作用（PPI）先導化合物設計策略，為PPI領域研究提供新的概念和方法，將有助于未來其他PPI調控劑的開發。相關研究8月19日發表于《德國應用化學》，并被推薦為“Hot Paper”。 PPI參與信號轉導、結構組裝以及細胞周期調控等過程，其失衡或異常可直接引發癌癥、神經退行性病變及自身免疫病等一系列疾病。與傳統藥物靶標相比，PPI界面具有開放性、動態性、廣泛性等特點。但受限于界面平坦、親和力低等問題，難以快速獲得高活性、高選擇性的PPI先導化合物。 針對以上問題，研究團隊提出FOLP新策略，即將已知高親和力片段作為“支點”穩固錨定正構口袋，再利用分子模擬技術設計“杠桿”伸入鄰近的互作界面處潛在變構口袋，擾動互作界面，快速獲得高活性PPI抑制劑，從而實現撬動PPI、最終破壞PPI的目的。 在......閱讀全文
相互作用蛋白鑒定實驗——相互作用蛋白捕獲
實驗方法原理實驗要經過兩次連續大量的酵母菌平板篩選過程。酵母菌含有 LexA 融合探針、報道基因和插入PJG4-5（見圖19.1.6）的 GAL 啟動子控制下的 cDNA 表達文庫。最近，已有可供用于這個系統的文庫。實驗材料攜帶適當質粒組合的酵母菌試劑、試劑盒完全（CM）缺失成分液體培養基含有如下指
蛋白蛋白相互作用技術內容
技術內容 蛋白質并非孤立存在的生物分子，而是具有特定三維空間結構并與其他蛋白質相互作用，共同執行功能。因此，蛋白質的模塊及空間組織與其表達水平具有同樣的重要性。為了解析蛋白質組的組織結構單元而開發的基于質譜的蛋白質組學方法通常結合了質譜檢測與各種生化試驗。其中最經典的技術為1999[1]
蛋白蛋白相互作用技術介紹
技術內容蛋白質并非孤立存在的生物分子，而是具有特定三維空間結構并與其他蛋白質相互作用，共同執行功能。因此，蛋白質的模塊及空間組織與其表達水平具有同樣的重要性。為了解析蛋白質組的組織結構單元而開發的基于質譜的蛋白質組學方法通常結合了質譜檢測與各種生化試驗。其中最經典的技術為1999[1]首次報導的親和
相互作用蛋白鑒定實驗
鑒定誘餌蛋白（半乳糖苷酶） 鑒定誘餌蛋白（LacZ 的活性分析） 相互作用蛋白捕獲 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是構建能夠表達
相互作用蛋白鑒定實驗
實驗方法原理 捕捉相互作用蛋白的第一步是構建能夠表達 LexA 與目的蛋白的融合體的質粒。這種質粒轉化到包含 LEU2 和lacZ 報道基因的報道酵母株中，并要行一系列的對照實驗來鑒定所構建的誘餌蛋白是否適用，是否需要修飾，或是否應改變酵母菌報道條件。這些對照實驗實現了誘餌蛋白在酵母菌中作為
蛋白質相互作用
Interaction Trap/Trap Two-Hybrid System·?????????Yeast Two-Hybrid System?(Finley Lab)This is one of the most comprehensive and detailed guide to yeast
相互作用蛋白的捕獲實驗
實驗材料?酵母菌試劑、試劑盒?CM培養基乙酸鋰PEGTEDMSO甘油氨芐青霉素儀器、耗材?離心機分光光度計搖床培養箱實驗步驟?1.? 為了轉化文庫，將約20 ml 含pSH18-34和pBait 的酵母菌EGY48培養液接種到Glc/CM-Ura-His 省卻成分液體培養基中，于30℃培養過夜。2.
相互作用蛋白的捕獲實驗
基本實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 酵母菌 試劑、試劑盒
相互作用蛋白的捕獲實驗
相互作用蛋白的捕獲試驗要經過兩次連續大量的酵母菌平板篩選過程。酵母菌含有lexA 融合合探針，報道基因和插入pJG4-5的GAL啟動子控制下的cDNA表達文庫。實驗材料酵母菌試劑、試劑盒CM培養基乙酸鋰PEGTEDMSO甘油氨芐青霉素儀器、耗材離心機分光光度計搖床培養箱實驗步驟1. ?為了轉化文庫，
蛋白與蛋白相互作用分析—免疫共沉淀
?實驗原理免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是以抗體和抗原之間的特異性結合以及細菌蛋白質的“protein A/G"特異性地結合抗體Fc段的現象而開發出來的方法，是研究蛋白質相互作用的經典方法，主要用于確定兩種蛋白質在完整細胞內是否存在生理性相互作用。其原理是：當
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
? ? ? ? ? ? 實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白 試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
實驗材料 結合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白試劑、試劑盒 堿性緩沖液 封閉緩沖液 相互作用緩沖液PK 緩沖液還原型谷胱甘肽于 Tris-Cl中洗滌緩沖液 1 洗滌緩沖液 2蛋白酶蛋白激酶 A[y-32P]ATP儀器、耗材 與待篩選蛋白結合的膜或濾膜Sephadex G-50 轉柱實驗步驟 材
用－GST－融合蛋白檢測蛋白質蛋白質相互作用實驗
GST 融合蛋白作為在細菌中表達的重組蛋白，從它們被介紹以來，已用于成千上萬個研究項目中（Smith and johnson 1988)。它們常常被用于制備抗體，這些抗體可用于研究蛋白質-蛋白質相互作用以及分析生化反應。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W
相互作用蛋白鑒定實驗——鑒定誘餌蛋白（LacZ的活性分析）
實驗方法原理捕捉相互作用蛋白的第一步是構建能夠表達 LexA 與目的蛋白的融合體的質粒。這種質粒轉化到包含 LEU2 和lacZ 報道基因的報道酵母株中，并要行一系列的對照實驗來鑒定所構建的誘餌蛋白是否適用，是否需要修飾，或是否應改變酵母菌報道條件。這些對照實驗實現了誘餌蛋白在酵母菌中作為一種穩定蛋
蛋白質與水的相互作用
水和蛋白質是構成一切生命的基礎材料。對人體來說，我們需要有二十種氨基酸才能保證細胞的正常工作。其中，有八種氨基酸是人體無法自行合成，必須由食物中攝取，稱作“必需氨基酸”，又稱作完全蛋白。資料表明：這八種中如果缺少任何一種，其他則毫無用處。另外十二種是人體可以自行合成的，稱作“非必需氨基酸”。人體
酵母雙雜交原理（蛋白相互作用）
?概述酵母雙雜交系統由Fields和Song等首先在研究真核基因轉錄調控中建立。典型的真核生長轉錄因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二個不同的結構域: DNA結合結構域（DNA-binding domain）和轉錄激活結構域（transcription-activating domain）。前者
JBC：凋亡通路關鍵蛋白的相互作用
耶路撒冷的希伯來大學和魏茨曼科學研究所的研究人員發現了兩種線粒體凋亡通路關鍵蛋白相互作用的分子機制，提出了誘導細胞凋亡或細胞程序性死亡的新方法，有望引導人們研發新的癌癥治療手段。 凋亡是機體對抗異常細胞(如癌細胞)擴散的必要防御機制，是經由相互作用的蛋白網絡發生的復雜生物學過程。癌細胞常常
蛋白質與水的相互作用
蛋白質與水之間的作用力主要是蛋白質中的肽鍵（偶極-偶極相互作用或氫鍵），或氨基酸的側鏈（解離的、極性甚至非極性基團）同水分子之間發生了相互作用。影響蛋白質水溶性的應素很多：（1）pH>pI 時，蛋白質帶負電荷，pH=pI 時，蛋白質不帶電荷，pH 時，蛋白質帶正電荷。溶液的pH 低于或高于蛋白質的p
人硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP）酶聯免疫分析（ELISA）
本試劑僅供研究使用???????目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP）的含量。實驗原理：??本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP）水平。用純化的人硫氧還蛋白相互作用蛋白(TXNIP）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被
相互作用蛋白鑒定實驗——鑒定誘餌蛋白（半乳糖苷酶）
通過確定與之結合的其他蛋白質來理解某種特定蛋白質的功能，常常是十分有用的方法。這可以通過從文庫中選擇或篩選與靶蛋白相互作用的新蛋白來實現。現有一種特別有用的方法即雙雜交系統或相互作用阱， 用來測定新的相互作用蛋白，這種方法采用充當「試管」的酵母菌和一種報道系統的轉錄激活作用來識別結合蛋白。本方法也可
研究蛋白質相互作用的新技術
近期，來自多倫多大學Lunenfeld-Tanenbaum Research Institute (LTRI)和Donnelly中心的一組研究人員，開發出一種新技術，可以將細胞內的DNA條形碼拼接在一起，以同時搜尋數百萬個蛋白質配對，用以分析蛋白質相互作用。相關研究結果發表在4月22日的《Mol
Far－Western分析蛋白質相互作用實驗
分析蛋白質混合物 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 待分析的樣品 編碼目的蛋白的
RNA－蛋白質的相互作用1
葉綠體RNA的體外加工與紫外交聯分析RNARNA的合成l??????DNA模板的線性化1．根據供應商的指導用合適的限制酶酶解含有DNA模板（如亞克隆在轉錄載體如pBluescript?（Stratagene）上的菠菜葉綠體psbA基因）的質粒（Schuster and Gruissem1991）。2
利用－BIAcore－分析相互作用的蛋白質
試劑、試劑盒 EDC氨基乙醇ExtracleanHEPES 緩沖的鹽水緩沖液HClNHS小鼠抗-TSH 單克隆抗體兔抗小鼠-Fc 結構域TSHTSH 稀釋液儀器、耗材 BIAcore 儀器CM-5 傳感芯片實驗步驟 第一階段 ?捕獲表面的制備和結合試驗材料緩沖液和溶液將貯存溶液稀釋到適當的濃度。ED
蛋白質間相互作用研究方法1
LY: 宋體; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman'">融合蛋白進行Far Western印跡來檢測蛋白質-蛋白質相互作用 ?放射標記蛋白探
蛋白質相互作用如何驅動細胞凋亡
細胞敢死隊 “健康的身體取決于嚴格按規定執行的細胞分裂和死亡，波鴻“Resolv” 卓越電子順磁共振光譜研究組Stephanie Bleicken博士說。“當它們失控時，癌癥和神經退行性疾病就會發生。”細胞凋亡是身體擺脫損害、老化或不需要的細胞的重要安全機制。 Bcl-2蛋白家族決定細胞何時
Far－Western分析蛋白質相互作用實驗
實驗方法原理 實驗材料 待分析的樣品編碼目的蛋白的 cDNA（已經克隆到體外表達載體中）試劑、試劑盒 1 × SDS 上樣緩沖液麗春紅 S 染液封閉緩沖液 I封閉緩沖液 II體外轉錄 翻譯試劑盒PBS35S-甲硫氨酸探針純化緩沖液探針稀釋緩沖液儀器、耗材 微量過濾離心柱聚偏氟乙烯（PVDF）／硝化纖
RNA－蛋白質的相互作用2
葉綠體mRNA3’末端的體外加工l??????RNA加工反應1．在1.5ml微量離心管中加入下列反應液：緩沖液IVT（20×）????????????????????????????0.5μl葉綠體蛋白提取物（20μg）??????????????????????Lμl緩沖液E???????????
利用－BIAcore－分析相互作用的蛋白質
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 Biacore是基于表面等離子體共振（SPR）技術來實時跟蹤在天然狀態下生物分子間的相互作用，無需任何標記物。表面等離子體共振（surface plasmonresonance，SPR）是一種光學現象，在傳感芯片發生全反
利用－BIAcore－分析相互作用的蛋白質
BIAcore表面等離子共振廣泛應用于：（1）研究各種生物分子（如多肽、蛋白質、寡核苷酸，以及病毒、細菌、小分子化合物）之間的相互作用過程；（2）特異性抗體檢測或質控、疾病機制、藥物篩選；（3）相關藥物動力學實時監測、配體垂釣、免疫調節、結構-功能關系等。實驗方法原理Biacore是基于表面等離子體