研究人員在樹鼩APOBEC3限制HBV復制及機制方面獲進展

　　乙型肝炎病毒(human hepatitis B virus，HBV)是引起人類乙型肝炎的病原體，能引起急慢性肝炎、肝硬化、肝癌等多種臨床疾病，是我國最常見的病毒性肝炎。雖然目前有HBV疫苗，但對慢性HBV感染仍無有效治療手段。HBV感染仍然是世界性的嚴重公共衛生問題。缺乏合適的HBV感染動物模型是研究發病機制和研發藥物及疫苗的瓶頸。樹鼩是靈長類動物親緣關系較近的新型實驗動物，有研究發現HBV可感染樹鼩，也能檢測到乙肝表面抗原和e抗原(HBsAg和HBeAg)。基于樹鼩對HBV的易感性，發現鑒定出HBV功能受體——鈉離子-牛磺膽酸共轉運蛋白(sodium taurocholate cotransporting polypeptide， NTCP)，為新藥研發提供了重要治療靶點。但HBV對成年樹鼩的感染率較低以及難以形成持續性感染等缺點限制了該模型的推廣應用。

　　宿主限制因子是限制病毒跨種傳播和模型建立的主要原因之一。宿主限制因子APOBEC3家族成員能夠通過胞嘧啶脫氨基作用導致病毒基因組突變來抑制病毒的復制。在中國科學院昆明動物研究所研究員鄭永唐的指導下，博士研究生羅夢婷對樹鼩APOBEC3家族基因序列特征、進化、表達和抗HBV作用及機制進行了研究。首次鑒定發現，樹鼩有5個APOBEC3基因家族成員，分別為APOBEC3A，-3C，-3F，-3G，-3H，也命名為A3Z1a、A3Z2a-Z2b、A3Z2d-Z2e、A3Z2c-Z1b、A3Z3。樹鼩A3Z1的2個基因和A3Z2的5個基因分別獨立進化而來，并且在免疫器官中表達較高。樹鼩APOBEC3A和APOBEC3H能夠形成同源二聚體。干擾素和HBV感染刺激能夠上調樹鼩APOBEC3家族基因的mRNA表達水平，提示樹鼩APOBEC3可能有限制HBV復制的能力(Gene， 2018， 646：143-152)。隨后在樹鼩原代肝細胞中發現，使用干擾素后確實能夠限制HBV在樹鼩原代肝細胞中的復制水平，cccDNA指標甚至能夠下降至與使用拉米夫定陽性藥物相似水平。同時檢測到干擾素刺激樹鼩原代肝細胞后APOBEC3家族表達上調。體外實驗驗證，除A3Z2d-Z2e外，樹鼩APOBEC3能夠通過其基因編輯作用以及非編輯作用，在體外發揮較強抗HBV活性。在HBV的X蛋白存在情況下，APOBEC3的胞內水平降低，限制HBV能力減弱。這一現象在加入外泌體抑制劑GW4869或MG132后得到恢復。這提示X蛋白能夠降解樹鼩A3Z2d-Z2e，還能通過外泌體途徑外排其余樹鼩APOBEC3家族成員，從而降低胞內APOBEC3蛋白水平，增強病毒復制效率。雖然HBV的X蛋白能夠降低胞內APOBEC3的蛋白水平，但卻不能完全抵消APOBEC3的抗病毒作用。這說明X蛋白雖然能夠在一定程度上降低APOBEC3的抗病毒水平，但卻不能像HIV-1 Vif對抗APOBEC3G那樣完全抑制宿主限制因子的作用。同時，外泌體外排的APOBEC3可能能夠增強相鄰細胞的抗病毒能力。提示即使X蛋白存在情況下，樹鼩APOBEC3仍能發揮抗病毒作用。這可能是HBV在樹鼩中難以形成持續性感染的原因。因此，在樹鼩HBV動物模型研究中，考慮宿主天然免疫的存在是十分必要的(Cell Mol Immunol， 2020， doi： 10.1038/s41423-020-0369-z.)。