高效穩定！譜聚醫療LCMS／MS助力毒物臨床篩查

　　項目背景

　　作為農業大國，我國對農藥的使用歷史悠久、種類繁多。然而農藥的使用給農業帶來產量保證的同時，也由于把控不嚴，很容易產生濫用情況。污染環境是其一，更深層次的是容易使人誤食農藥殘留超標的農產品，輕則對人身健康造成危害，重則危及生命。

　　常見的農藥主要包括有機磷類、擬除蟲菊酯類、氨基甲酸酯類、除草劑及其它水溶性農藥。大量研究表明，農藥暴露與某些慢性疾病的發生率升高之間存在著聯系，包括癌癥、帕金森病、阿爾茨海默病、多發性硬化癥、糖尿病、心血管疾病、慢性腎臟病及不育癥等。此外，由于意外、自殺或故意犯罪而導致的急性農藥中毒案例也時見報道。

　　由于毒物分析所面對的測定對象多為未知物，并且含量較低，同時檢測樣品多為血液、尿液、組織及嘔吐物等復雜樣品，因此研究和尋找適合多種化合物同時分析，具有一定通用性的快速分析篩選方法就成為急救醫學的重要研究內容之一。

　　隨著質譜技術的發展，色譜-質譜聯用技術（LC-MS/MS）由于具有靈敏度高、檢測范圍廣的特點，已成為較為成熟且被廣泛運用。

　　故根據臨床市場檢測需求，基于液質平臺開發針對血液中常見數十種農藥精準篩查的方法， 一方面可做到對農藥中毒的定性診斷：對于一些患者診斷不明確，需要與中毒鑒別診斷時，可以第一時間實現農藥中毒的定性診斷，為臨床醫生早期采取積極治療提供了客觀依據；

　　另一方面可做到對于農藥中毒的定量檢測：對于診斷明確的中毒患者，體內毒物的定量檢測，不僅可以評估患者的預后，還可以指導制定最佳的毒物清除方案，如指導血液凈化清除相關毒物，既能防止對患者的過度醫療，浪費患者的物力財力、又能避免治療不足，增加患者的死亡風險。

　　臨床報道案例

　　患者信息：2019 年 9 月，甘肅省某男子在家中用餐后中毒死亡，經調查其妻子在該名男子所喝菜湯中加入了農藥，農藥來自于一標有 “氯氰菊酯”字樣的塑料瓶，瓶內農藥已被倒光。送檢檢材包括塑料瓶的甲醇提取液約 5 mL，死者血液樣品約 3 mL。

　　臨床檢測：取 10 μL 塑料瓶提取液用甲醇逐級稀釋 1 000 倍進行分析，檢出高濃度的敵敵畏、毒死蜱和氯氰菊酯。

　　結果：取死者血液樣品 200 μL 按照本研究所建立的方法進行分析，檢出敵敵畏 189. 04 ng /mL，tＲ = 4. 93 min，定量離子對 220. 9 /109. 0( m/z) ； 毒死蜱 171. 32 ng /mL，tＲ =11. 79 min，定量離子對 349. 9 /197. 9( m/z) ； 氯氰菊酯 106. 50 ng /mL，tＲ =12. 73 min，定量離子對 433. 1 /191. 0( m/z) ，其色譜圖見下圖。

三種農藥的色譜圖

　　結論：實驗結果表明該LC-MS/MS方法可應用于實際案例的檢測，為法醫毒理學生物基質中多農藥的檢驗鑒定提供了高效可靠的途徑。

　　項目內容

　　本研究結合實際中毒案例，選取了常見的數十種農藥( 詳見第三部分藥物種類) 。結合高效液相色譜 -串聯質譜(LC-MS /MS) 技術進行分析研究，通過優化前處理和分析條件，建立了同時測定血液中農藥的方法。該方法簡單高效，實現了一針進樣同時對數十種農藥進行分析的目的，對臨床和法醫毒物檢驗工作具有重要意義。

　　儀器設備

圖片型號：PreMed 5200 （浙械注淮20222220115）

　　標準品、試劑

　　數十種農藥標準品（20mg/L）、甲醇、甲酸銨、甲酸為色譜級，檸檬酸鈉、檸檬酸氫二鈉、氯化鈉、乙酸鈉、無水硫酸鎂為分析純，乙腈為色譜純。

　　質譜條件

　　監測模式為多反應監測(MRM)，部分化合物監測離子對、碰撞電壓(CE)等參數見下表。

　　樣品前處理

　　詳見杭州譜聚醫療的毒物篩選檢測試劑說明書。

　　結果

　　典型圖譜。數十種農藥的MRM疊加色譜圖如下圖所示：

　　重復性。經過驗證，測得農藥及其代謝物的峰面積重復性RSD均小于10%，滿足方法學驗證要求。

　　結論

　　本項目建立了液相色譜-串聯質譜同時測定血液中數十種農藥的方法。該方法簡便快速、靈敏度高、穩定性好，滿足了實際工作中一針進樣同時對數十種農藥進行定性定量分析的需求，為臨床多農藥的檢驗鑒定提供了高效可靠的途徑。

　　藥物種類

　　解決方案

　　檢測方法：液相色譜-串聯質譜法（LC-MS/MS）。

　　專業高效的檢測流程：血樣采集——>高通量的樣本前處理方案——>上機檢測——>自動審核數據及生成報告。

　　儀器：超高效液相色譜儀（具體配有二元超高壓輸液泵、超高壓自動進樣器、柱溫箱）、PreMed 5200 液相色譜串聯質譜系統。

　　質譜條件：使用APCI源，監測模式為多反應監測(MRM)。為提高檢測靈敏度，可根據保留時間分段監測各化合物。

　　關于譜聚

　　聚光科技生命科學板塊旗下譜聚醫療是一家醫療臨床質譜產品服務平臺，聚焦于質譜硬件及配套個性化定制、臨床醫學樣本檢測體外診斷試劑盒產品及應用技術、臨床科研合作等領域，將竭誠為客戶提供集成化、自動化、標準化和流程化的臨床質譜解決方案，使客戶享受一站式的定制化服務。并致力于提供普惠大眾的臨床質譜技術，推動中國臨床質譜深入發展和突破卡脖子關鍵難題。

　　參考文獻：杜秋瑤，張云峰，王繼芬，超高效液相色譜 -串聯質譜法同時測定血液中 115 種農藥[J] 2020,39(4) : 485 ～ 491.