二．靜脈注射AAV9
（一）新生小鼠的顳靜脈注射
1. 調整光源位置以便照亮顯微鏡區域，中等強度的光照最佳。
2. 將一個新生幼鼠直接置于冰上1-3min，進行麻醉。
3. 當動物在冰上麻醉時，在注射器中注滿AAV病毒。體積不應超過100μL，體積在30到100μL之間不會影響轉導效率。
4. 在顯微鏡下觀察幼鼠。用不持注射器的手的食指放在幼鼠口鼻處，中指放在耳芽處，以便拉伸幼鼠的皮膚，可見顳淺靜脈。
5. 確定顳淺靜脈。可通過皮膚看到位于耳芽前部，周圍毛細血管下部，有一條隱約可見的靜脈血管，從背部到腹部，匯入頸靜脈，這就是顳淺靜脈。
6. 注射器針尖斜面插入顳靜脈。可以看到針尖斜面通過皮膚的以后被血填充。輕壓注射器，并注意幼鼠臉側面的靜脈變白。
（二）成年小鼠的尾靜脈注射
1. 確保動物進入約束裝置。
2. 用酒精擦拭尾巴。
3. 把尾巴置于溫水中。
4. 將注射器吸滿AAV病毒懸液。
5. 將注射器插入尾靜脈中。如果沒有瞄準，可以靠近尾巴根部再試一次。
6. 注射病毒溶液。體積控制在100-250μL。
7. 將小鼠放回籠內。
圖2：動物約束裝置
三．AAV從周圍神經到目標神經元的逆行運輸
1.選取250g左右的大鼠，通過25 G 1毫升注射器注射甲苯噻嗪（10mg/kg）和氯胺酮（100mg/kg）。
2.將麻醉后的大鼠置于無菌布上。在每只眼睛中滴入一滴聚丙烯酸，以防麻醉造成眼睛干燥。
3.刮去肌肉附近的毛發并用酒精清潔。用刀片在皮膚上切一個小口，并用鉗保持刀口開放，以暴露肌肉。
4.使用超微量注射器吸入AAV病毒懸液，并排除空氣和氣泡。
5.擠壓肌肉以使肌肉建立起一定的厚度，并把針尖置于肌肉上。
6.緩緩插入針尖，并在肌肉中靜置1min。然后以10μl/min的速度注入10-20μl的AAV懸液。
7.注射結束后，將針在肌肉中靜置2min，然后緩緩拔出。可進行多次注射。
8.縫合皮膚并做耳標。將大鼠單獨放在一個干凈的籠子里，直到醒來
9.先用0.1 M NaOH or 10%氯漂白劑清洗手術工具，并用蒸餾水沖洗，最后用酒精沖洗。
圖3：超微量注射器
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