胰島素親和層析實驗
試劑、試劑盒部分純化的胰島素受體NaCl胰島素瓊脂糖溶液 F溶液 G溶液 H儀器、耗材一次性小型塑料柱CentriconTM 濃縮器銀染試劑盒實驗步驟材料與設備部分純化的胰島素受體，得自 WGA-瓊脂糖柱層析（見本單元實驗 3)NaCl(5mol/L)胰島素瓊脂糖（~2 ml 預裝膠）（SigmaChemicalCo-)一次性小型塑料柱（Bio-Rad Laboratories)CentriconTM 濃縮器（Amicon，Inc.)銀染試劑盒（Bio-Rad Laboratories 161-0449)試劑溶液 F溶液 G溶液 H(配方，見 試劑的配制，pp.234~240)操作程序1) 加 0.75 ml 5mol/L NaCl 于經 WGA-瓊脂糖柱部分純化的胰島素受體溶液（~3 ml) 中，調溶液 NaCl 濃度為 1mol/L。2) 用 40 ml 溶液 F 沖洗胰島素瓊脂糖，去除可能影響固定化步驟的所有未偶......閱讀全文
胰島素親和層析實驗
試劑、試劑盒部分純化的胰島素受體NaCl胰島素瓊脂糖溶液 F溶液 G溶液 H儀器、耗材一次性小型塑料柱CentriconTM 濃縮器銀染試劑盒實驗步驟材料與設備部分純化的胰島素受體，得自 WGA-瓊脂糖柱層析（見本單元實驗 3)NaCl(5mol/L)胰島素瓊脂糖（~2 ml 預裝膠）（SigmaC
胰島素親和層析實驗
胰島素親和層析實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 部分純化的胰島素受體 NaCl 胰島素瓊脂糖
親和層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 TrisTSA裂解緩沖液脫氧膽酸鈉洗滌緩沖液三乙醇氨緩沖液儀器、耗材 層析柱離心管離心機實驗步驟 1. ?準備一支活化后被淬滅的Sepharose預柱（5 ml 柱床）和一支Ab-Spharose免疫親和層析柱，并將它們串聯起來。2. ?以冰冷TSA溶液重懸50 g 細
親和層析實驗
可溶性抗原或膜結合抗原的分離 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
免疫親和層析實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 免疫親和介質 溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4B HCl 55% 飽和 AMS 沉淀物 偶聯緩沖液
免疫親和層析實驗
試劑、試劑盒免疫親和介質溴化氰（CNBr)活化的 Sepharose 4BHCl55% 飽和 AMS 沉淀物偶聯緩沖液乙醇胺緩沖液 BLAC 洗脫緩沖液二硫蘇糖醇硫氰酸鉀疊氮鈉儀器、耗材Econo-柱SDS-PAGE 電泳裝置實驗步驟材料與設備免疫親和介質（帶固定化的 MAb NT73; 見下文)溴
免疫親和層析實驗
試劑、試劑盒 免疫親和介質溴化氰（CNBr) 活化的 Sepharose 4BHCl55% 飽和 AMS 沉淀物偶聯緩沖液乙醇胺緩沖液 BLAC 洗脫緩沖液二硫蘇糖醇硫氰酸鉀疊氮鈉儀器、耗材 Econo-柱SDS-PAGE 電泳裝置實驗步驟 材料與設備免疫親和介質（帶固定化的 MAb NT73; 見
親和層析的操作實驗
試劑、試劑盒 非特異性競爭 DNA液氮緩沖液 Z緩沖液 Ze 柱再生緩沖液 柱保存緩沖液儀器、耗材 EconoCoIumn 柱實驗步驟 材料與設備EconoCoIumn 柱。（Bio Rad Laboratories731-1550)非特異性競爭 DNA液氮試劑緩沖液 Z緩沖液 Ze柱再生緩沖液柱保
親和層析的操作實驗
親和層析的操作實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 非特異性競爭 DNA 液氮 緩沖液 Z
親和層析實驗：常規方法
實驗步驟 一、親和介質的選擇 親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標，既保證較弱的非特異性吸附，又可以在整個過
親和層析實驗：常規方法
實驗步驟一、親和介質的選擇親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標，既保證較弱的非特異性吸附，又可以在整個過程中維持良好的流動特征。優選介質應具備便宜、易獲取和使用簡便的特點。
親和層析實驗技術方法
INTRODUCTIONThis protocol describes a method for removing antibodies that react with bacterially encoded proteins by passing a crude preparation of im
親和層析的操作實驗
試劑、試劑盒非特異性競爭 DNA液氮緩沖液 Z緩沖液 Ze柱再生緩沖液柱保存緩沖液儀器、耗材EconoCoIumn 柱實驗步驟材料與設備EconoCoIumn 柱。（Bio Rad Laboratories731-1550)非特異性競爭 DNA液氮試劑緩沖液 Z緩沖液 Ze柱再生緩沖液柱保存緩沖液(
金屬螯合親和層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 IPTGNiSO4蛋白酶抑制劑MCAC-EDTATriton儀器、耗材 層析柱轉子實驗步驟 1. ?接種含以pET載體表達帶組氨酸尾融合蛋白的大腸扦菌BL21（DE3）pLyaS菌株于10 ml M9ZB/氨芐青霉素/氯霉素培養基。于37℃搖蕩培養過夜。2. ?轉接1
親和層析實驗：常規方法（一）
一、親和介質的選擇親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標，既保證較弱的非特異性吸附，又可以在整個過程中維持良好的流動特征。優選介質應具備便宜、易獲取和使用簡便的特點。親和介質
親和層析實驗：常規方法（四）
2.配基吸附對于多肽、蛋白質或核酸，通常采用的共價吸附是, 通過胺反應將配基上的氨基吸附在樹脂表面。溴化氰活化表面與伯胺發生反應形成亞胺碳酸鹽是最常見的胺反應吸附。最典型的伯胺是賴氨酸側鏈（Hermanson,1992;PorathetaU1%7)(詳見第 28 章）。這種活化形式的優點在于可以使用
親和層析實驗：常規方法（二）
二、配基的選擇選擇合適的配基，需要對配基和靶分子之間的天然相互作用有一定的認知及理解。靶分子與配基的相互作用必須是特異性結合，并且在不同的結合和洗脫條件下均應該穩定。此外，制訂親和純化的方案時，需著重考慮能否購買到商品化配基，還是需要從頭研制配基和介質。后者的成功在很大程度上取決于對蛋白質結構和相互
親和層析實驗：常規方法（三）
6.仿生配基大部分的親和層析配基是天然存在的，其優點在于具有高度選擇性和強結合能力，但也存在某些缺點。這種配基穩定性低，需要進行純化，使用過程中批間差異大，易被其他生物分子污染，對滅菌方法敏感，并且成本高。為了克服這些局限性，加速親和層析在治療性蛋白質純化中的應用, 仿生型配基 (biomime
金屬螯合親和層析實驗
天然MCAC純化帶組氨酸尾的可溶性融合蛋白 變性條件下用MCAC純化帶組氨酸尾的不溶性融合蛋白 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質
金屬螯合親和層析實驗（二）
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒GuMCAC-EDTA緩沖液鹽酸胍儀器、耗材轉子離心機實驗步驟1. ?制備表達帶組氨酸尾的融合蛋白的大腸桿菌菌體沉淀。2. ?準備NTA介質層析柱，但柱子最后以GuMCAC-0緩沖液洗滌.3. ?在冰浴中凍融菌體沉淀。加5 ml GuMCAC-0緩沖液，用吸管抽吸重懸，超聲
胰島素測定實驗
實驗材料 胰島素標準品125 I－胰島素試劑、試劑盒 抗血清第二抗體PBS正常兔血清儀器、耗材 計數儀試管加樣器離心機實驗步驟 一、材料及試劑?1. ?胰島素標準品(不同濃度的)?2、125 I－胰島素?3、抗血清?4、第二抗體?5、分析試劑 ?為0.05 mol/L pH7.4 PBS液＋1%正常
序列特異性DNA結合蛋白親和層析純化實驗_DNA親和層析法
實驗材料制備性的DNA親和層析樹脂試劑、試劑盒緩沖液Z或其他柱緩沖液（如緩沖液Ze或TM)配制時含不同的KCl濃度（從緩沖液 Z 0.1 mol L KCl 至緩沖液 Z 1 mol L KCl對緩沖液Z 0. 1 mol L KCl透析的部分純化的蛋白質組分非特異性的競爭DNA柱再生緩沖液柱儲存緩
溶解受體的凝集素親和層析實驗
溶解受體的凝集素親和層析實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 麥胚凝集素（WGA)-瓊脂糖 溶解的胰島素受體
親和層析法去除交叉反應性抗體實驗
試劑、試劑盒 緩沖液和溶液細胞裂解緩沖液NaOHTris-緩沖鹽溶液TBSTriton X-100 溶菌酶胰 DNA 酶 I制備用于文庫篩選的抗體大腸桿菌培養液儀器、耗材 離心和轉子親和層析柱溴化氫活化的 Sepharose 4B實驗步驟 材料緩沖液和溶液貯存液，緩沖液和試劑的組分請見附錄 12將貯
溶解受體的凝集素親和層析實驗
試劑、試劑盒 麥胚凝集素（WGA)-瓊脂糖溶解的胰島素受體牛血清白蛋白[125I] 胰島素（受體級）豬胰島素牛γ-球蛋白聚乙二醇 6000溶液 D溶液 E結合緩沖液儀器、耗材 一次性小型塑料柱實驗步驟 材料與設備麥胚凝集素（WGA)-瓊脂糖（~2.5 ml 沉積的微球）（Vector Laborat
核酸親和層析法純化蛋白質實驗
步驟一 偶聯寡核苷酸到溴化氰活化的 Sepharose 4B 步驟二 核酸親和層析 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4
核酸親和層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4B 是通過它們本身的堿基實現的。從理論上講，該方法也許干擾最佳結合序列的接近路徑，但是這樣一個簡單的方法一直被廣泛地成功應用。偶聯效率的定量檢測可經 A260 值測定評估，或者更精確地從偶聯介質上水解核酸和進行磷酸鹽測定。實
親和層析法去除交叉反應性抗體實驗
本節介紹一種利用結合細菌蛋白質的基質去除粗制免疫球蛋白中與細菌編碼蛋白質發生反應成分的方法（de Wet et al.1984)。該方法也適用于利用培養的細胞或組織抽提物去除交叉反應抗體。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒緩沖液和
溶解受體的凝集素親和層析實驗
本實驗介紹關于溶解受體的凝集素親和層析過程。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者：朱厚礎。試劑、試劑盒麥胚凝集素（WGA)-瓊脂糖溶解的胰島素受體牛血清白蛋白[125I] 胰島素（受體級）豬胰島素牛γ-球蛋白聚乙二醇 6000溶液 D溶液 E結合緩沖液儀器、耗材一次性小型塑料柱實驗步驟材料與設
親和層析法去除交叉反應性抗體實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 緩沖液和溶液 細胞裂解緩沖液 NaOH Tris-緩沖鹽溶液 TBS Triton X-100 溶菌酶