位點特異性核酸內切酶的蛋白質工程實驗
實驗材料pMQ402試劑、試劑盒阿拉伯糖苯甲基磺酰氟Ni-NTA 瓊脂糖結合緩沖液清洗緩沖液洗脫緩沖液透析緩沖液儀器、耗材超聲破碎器冷凍離心機實驗步驟3. 方法此處列出的方法概括了為定點突變而做的氨基酸位點選擇（見 3.1)、為在細菌細胞中表達而做的 MutH 蛋白突變 （ 見 3.2 ) 和 MutH 變體的鑒定（見 3.3 )。3.1 為定點突變對氨基酸的選擇從生物技術信息國家中心基因組基本局部比對搜索工具（basic local alignment search tool，BLAST) 頁面（ http : //www. ncbi. nlriLnih. gov /BLAST/) [ 24 ] 得到 MutH 蛋白和相關限制性內切核酸酶的序列。更多的序列從 PSI BLAST 服務器 [ 25 ] 得到。使......閱讀全文
位點特異性核酸內切酶的蛋白質工程實驗
實驗材料 pMQ402試劑、試劑盒 阿拉伯糖苯甲基磺酰氟Ni-NTA 瓊脂糖結合緩沖液清洗緩沖液洗脫緩沖液透析緩沖液儀器、耗材 超聲破碎器冷凍離心機實驗步驟 3. 方法此處列出的方法概括了為定點突變而做的氨基酸位點選擇（見 3.1)、為在細菌細胞中表達而做的 MutH 蛋白突變 （ 見 3.2 )
位點特異性核酸內切酶的蛋白質工程實驗
實驗材料pMQ402試劑、試劑盒阿拉伯糖苯甲基磺酰氟Ni-NTA 瓊脂糖結合緩沖液清洗緩沖液洗脫緩沖液透析緩沖液儀器、耗材超聲破碎器冷凍離心機實驗步驟3. 方法此處列出的方法概括了為定點突變而做的氨基酸位點選擇（見 3.1)、為在細菌細胞中表達而做的 MutH 蛋白突變 （ 見 3.2 ) 和 Mu
位點特異性核酸內切酶的蛋白質工程實驗
位點特異性核酸內切酶的蛋白質工程 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 pMQ402 試劑、試劑盒
核酸內切酶的簡介
30多年前，當人們在對噬菌體（細菌病毒）的宿主特異性的限制-修飾現象進行研究時，首次發現了限制性內切酶。細菌可以抵御新病毒的入侵，而這種"限制"病毒生存的辦法則可歸功于細胞內部可摧毀外源DNA的限制性內切酶。首批被發現的限制性內切酶包括來源于大腸桿菌的EcoR I和EcoR II，以及來源于He
關于核酸內切酶的相關介紹
核酸內切酶催化水解多核苷酸內部的磷酸二酯鍵。有些核酸內切酶僅水解5′磷酸二酯鍵，把磷酸基團留在3′位置上，稱為5′-內切酶；而有些僅水解3′-磷酸二酯鍵，把磷酸基團留在5′位置上，稱為3′-內切酶。還有一些核酸內切酶對磷酸酯鍵一側的堿基有專一要求，例如胰臟核糖核酸酶（RNaseA）即是一種高度專
關于核酸內切酶的基本介紹
核酸內切酶催化水解多核苷酸內部的磷酸二酯鍵。有些核酸內切酶僅水解5′磷酸二酯鍵，把磷酸基團留在3′位置上，稱為5′-內切酶；而有些僅水解3′-磷酸二酯鍵，把磷酸基團留在5′位置上，稱為3′-內切酶。還有一些核酸內切酶對磷酸酯鍵一側的堿基有專一要求，例如胰臟核糖核酸酶（RNaseA）即是一種高度專
核酸內切酶的影響及因素
限制性酶切反應速度與底物的性質有很大的關系，底物的單雙鏈結構、分子的構型、DNA鏈中酶識別位點的數目以及位點附近的序列等都影響著酶的催化反應。共價閉合環(超螺旋構型)DNA比其相應的線性分子的酶解作用要慢，要使超螺旋構型DNA徹底降解，需要的酶量就大。對于DNA-RNA雜合雙鏈的酶切作用，Mol
DNA的限制性核酸內切酶酶切實驗和連接實驗
一）酶切實驗 本實驗學習用限制性核酸內切酶（Restriction endonuclease）EcoRI 切割λDNA及質粒pBR322DNA，瓊脂糖凝膠電泳后觀察酶切結果。? 【原理】? λDNA 是大腸桿菌的一種溫和噬菌體DNA，雙股線狀，分子大小為48.5 kb。 EcoRI酶可識別DN
用核酸內切酶構建亞克隆
實驗概要所謂亞克隆就是對已經獲得的目的DNA片段進行重新克隆，其目的在于對目的DNA進行進一步分析，或者進行重組改造等。亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接；(3)連接產物的轉化；(4)重組子篩選。主要試劑1．LB液體培養基：胰化蛋白胨（細菌培養用
限制性核酸內切酶的定義
用來識別特定的脫氧核苷酸序列，并對每條鏈中特定部位的兩個脫氧核糖核苷酸之間的磷酸二酯鍵進行切割的一類酶
限制性核酸內切酶的命名
1、寄主菌屬名的第一個字母和種名的頭兩個字母組成3個斜體字母的略語表示酶來源的菌種名稱，如大腸桿菌Escherichia coli 表示為Eco , 流感嗜血菌Haemophilus influenzae 表示為Hin；2、用一個正體字母表示菌株的類型，比如EcoR、Hind；3、如果一種特殊的寄主
限制性核酸內切酶的分類
限制性核酸內切酶的分類分為I型、II型和III型。
限制性核酸內切酶的來源
一般是以微生物屬名的第一個字母和種名的前兩個字母組成，第四個字母表示菌株（品系）。例如，從Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性內切酶稱為Bam H，在同一品系細菌中得到的識別不同堿基順序的幾種不同特異性的酶，可以編成不同的號，如HindⅡ、HindⅢ，HpaI、H
核酸內切酶的操作步驟及應用
1.操作步驟 以動物病毒為例說明酶切反應步驟。 (1) 病毒DNA的提取和純化 當繁殖病毒的細胞出現80%-100%的細胞病變時(CPE)，收獲并凍融三次使細胞破裂釋放出病毒，3 000r/min離心10分鐘，吸出上清，加10% SDS至終濃度為1%，于56℃水浴作用30分鐘，加等體積的飽和酚
限制性核酸內切酶及其應用
（一）限制性核酸內切酶的發現當λ(k)噬菌體侵染E.coliB時，由于其DNA中有EcoB核酸酶特異識別的堿基序列，被降解掉。而E.coliB的DNA中雖然也存在這種特異序列，但可在EcoB甲基化酶的作用下，催化S-腺苷甲硫氨酸（SAM）將甲基轉移給限制酶識別序列的特定堿基，使之甲基化。 EcoB核
限制性核酸內切酶的消化反應
一個限制酶單位（U）指：在理想的反應條件（適宜的緩沖液和反應溫度，通常為37℃）下，1h內中完全降解1 mg l DNA所需要的酶量。影響酶活性的因素很多，最重要的有：⑴ DNA的純度⑵ DNA的甲基化程度⑶ 酶切反應的溫度（通常為37℃ ）⑷ DNA的分子結構⑸ 核酸內切限制酶的緩沖液在“非最
限制性核酸內切酶的分類性質
根據酶的功能特性、大小及反應時所需的輔助因子，限制性內切酶可分為兩大類，即I類酶和Ⅱ酶。最早從大腸桿菌中發現的EcoK、EcoB就屬于I類酶。其分子量較大；反應過程中除需Mg2+外，還需要S-腺苷-L甲硫氨酸、ATP；在DNA分子上沒有特異性的酶解片斷，這是I、Ⅱ類酶之間最明顯的差異。因此，I類酶作
限制性核酸內切酶的研究歷史
一般是以微生物屬名的第一個字母和種名的前兩個字母組成，第四個字母表示菌株（品系）。例如，從Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性內切酶稱為Bam H，在同一品系細菌中得到的識別不同堿基順序的幾種不同特異性的酶，可以編成不同的號，如HindⅡ、HindⅢ，HpaI、H
限制性核酸內切酶的生理意義
限制作用實際就是限制酶降解外源DNA ，維護宿主遺傳穩定的保護機制。甲基化是常見的修飾作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保護。通過甲基化作用達到識別自身遺傳物質和外來遺傳物質的目的。所以，能產生防御病毒侵染的限制酶的細菌，其自身的基因組中可能有該酶識別的序列，只是該識別序列或酶切位點被甲基化了
關于限制性核酸內切酶的概述
限制性核酸內切酶（restrictionendonuclease），又簡稱限制酶或內切酶。它們是基因工程和基因診斷重要的一類工具酶。它們的發現和應用為從基因組中分離目的基因提供了必要的手段.限制酶能特異地識別和切割特異的核苷酸序列，將雙鏈DNA切成較小的片段。酶切后目的基因可能完整地或部分地保存
限制性核酸內切酶的發現歷史
當λ(k)噬菌體侵染E.coliB時，由于其DNA中有EcoB核酸酶特異識別的堿基序列，被降解掉。而E.coliB的DNA中雖然也存在這種特異序列，但可在EcoB甲基化酶的作用下，催化S-腺苷甲硫氨酸（SAM）將甲基轉移給限制酶識別序列的特定堿基，使之甲基化。 EcoB核酸酶不能識別已甲基化的序列。
限制性核酸內切酶的功能介紹
限制性核酸內切酶（restrictionendonuclease），又簡稱限制酶或內切酶。它們是基因工程和基因診斷重要的一類工具酶。它們的發現和應用為從基因組中分離目的基因提供了必要的手段.限制酶能特異地識別和切割特異的核苷酸序列，將雙鏈DNA切成較小的片段。酶切后目的基因可能完整地或部分地保存于某
限制性核酸內切酶的來源分布
限制性核酸內切酶分布極廣，幾乎在所有細菌的屬、種中都發現至少一種限制性內切酶，多者在一屬中就有幾十種，例如在嗜血桿菌屬中（Haemophilus）現已發現的就有22種。有的菌株含酶量極低，很難分離定性；然而在有的菌株中，酶含量極高．如E. coli的pMB4(EcoRI酶）和H. aegyptius
限制性核酸內切酶的分類性質
用于DNA基因組物理圖譜的組建；基因的定位和基因分離；DNA分子堿基序列分析；比較相關的DNA分子和遺傳工程；進行基因工程編輯。限制性核酸內切酶是由細菌產生的，其生理意義是提高自身的防御能力.限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA。
限制性核酸內切酶的消化反應
一個限制酶單位（U）指：在理想的反應條件（適宜的緩沖液和反應溫度，通常為37℃）下，1h內中完全降解1 mg l DNA所需要的酶量。影響酶活性的因素很多，最重要的有：⑴ DNA的純度⑵ DNA的甲基化程度⑶ 酶切反應的溫度（通常為37℃ ）⑷ DNA的分子結構⑸ 核酸內切限制酶的緩沖液在“非最
限制性核酸內切酶的分類性質
根據酶的功能特性、大小及反應時所需的輔助因子，限制性內切酶可分為兩大類，即I類酶和Ⅱ酶。最早從大腸桿菌中發現的EcoK、EcoB就屬于I類酶。其分子量較大；反應過程中除需Mg2+外，還需要S-腺苷-L甲硫氨酸、ATP；在DNA分子上沒有特異性的酶解片斷，這是I、Ⅱ類酶之間最明顯的差異。因此，I類酶作
限制性核酸內切酶的檢測方法
DNA的多態性雖可通過DNA測序檢出，但用限制酶消化卻是最常用的檢測方法。1．RFLP由于堿基的變異可能導致酶切點的消失或新的切點出現，從而引起不同個體在用同一限制酶切時，DNA片段長度出現差異，這種由于內切酶切點變化所導致的DNA片段長度的差異，稱為限制性片段長度多態性（restriction f
限制性核酸內切酶的生理意義
限制作用實際就是限制酶降解外源DNA?，維護宿主遺傳穩定的保護機制。甲基化是常見的修飾作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保護。通過甲基化作用達到識別自身遺傳物質和外來遺傳物質的目的。所以，能產生防御病毒侵染的限制酶的細菌，其自身的基因組中可能有該酶識別的序列，只是該識別序列或酶切位點被甲基化了
限制[性酶切]位點的定義和應用
中文名稱限制[性酶切]位點英文名稱restriction site定 義限制性內切酶在DNA雙鏈上所識別的一些特殊序列。在分子生物學和基因工程中常用的Ⅱ型限制性內切酶識別的多為4、6或8對核苷酸的雙鏈回文序列。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），方法與技術（二級學科）
限制性內切酶酶切反應實驗原理
限制性內切酶已有百余種，每種酶有其特定的核苷酸序列識別特異性，酶的活性需Mg2+來激活。不同的酶也有許多差別：有些酶除需Mg2+外，還需ATP等其他輔助因子的激活；切割位點和識別序列間的距離不同；某些內切酶同時具有甲基化作用。根據這些差別，可將限制性內切酶分為Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型。Ⅱ型限制性內切酶只需要