酵母遺傳學方法10：固定化細胞的肌動蛋白染色
固定化細胞的肌動蛋白染色1．培養細胞到對數生長期（約107細胞/ml）。2．直接取0.1ml甲醛加到含有1ml培養物的離心管中固定細胞（甲醛濃度為3.7％；標準母液是37％）。3．在甲醛中培養細胞30分鐘或稍長時間。4．用PBS洗兩次，離心5分鐘收集細胞。5．用50μl的PBS懸浮細胞，加5個單位的羅丹明或熒光素連接的鬼筆環肽。6．用PBS洗3次，重新懸浮在小體積的封固劑中。7．用羅丹明或熒光素濾片觀察。......閱讀全文
酵母遺傳學方法10：固定化細胞的肌動蛋白染色
固定化細胞的肌動蛋白染色1．培養細胞到對數生長期（約107細胞/ml）。2．直接取0.1ml甲醛加到含有1ml培養物的離心管中固定細胞（甲醛濃度為3.7％；標準母液是37％）。3．在甲醛中培養細胞30分鐘或稍長時間。4．用PBS洗兩次，離心5分鐘收集細胞。5．用50μl的PBS懸浮細胞，加5個單位的
酵母遺傳學方法8：酵母活體染色
酵母活體染色1）核DNA和線粒體DNA1．當細胞培養到約107細胞/ml時，離心（5秒）收集細胞，再懸浮在70％乙醇中。2．固定5分鐘或5分鐘以上，用水洗2次。3．將細胞懸浮在含有50ng/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚的封固劑中。1mg/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚母液可在－20℃下貯存。4
技術和方案13－已固定細胞的肌動蛋白染色
試劑、試劑盒PBS固定液實驗步驟鬼筆環肽專一性地結合 F 肌動蛋白，熒光標記的鬼筆環肽染細胞與肌動蛋白抗體的染色模式類似。1.在 500 ml 三角瓶中振蕩培養 25 ml 酵母菌至密度為 2X107 個/ml。2.添加 17 ml 10% 甲醛（EM 電子顯微級）到培養基中至終濃度 4%，在酵母菌
固定化細胞的方法
細胞的種類多種多樣，大小和特性個不相同，故此細胞固定化的方法有很多種。歸結起來，主要可以分為吸附法和包埋法兩大類。吸附法利用各種吸附劑，將細胞吸附在其表面而使細胞固定的方法稱為吸附法。用于細胞固定化的吸附劑主要有硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、多孔塑料、金屬絲網、微載體、和中空纖維等。酵母細胞帶有負電荷
固定化細胞的固定化原理及方法簡介
細胞的種類多種多樣，大小和特性個不相同，故此細胞固定化的方法有很多種。歸結起來，主要可以分為吸附法和包埋法兩大類。 吸附法 利用各種吸附劑，將細胞吸附在其表面而使細胞固定的方法稱為吸附法。 用于細胞固定化的吸附劑主要有硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、多孔塑料、金屬絲網、微載體、和中空纖維等。
酵母活細胞染色
實驗步驟展
酵母遺傳學方法12：酵母菌落PCR方法
酵母菌落PCR方法1．在冰上配制反應混合液：2μl??????????????????10×菌落PCR緩沖液1.2μl?????????????????25mmol/L MgCl20.4μl?????????????????10mmol/L dNTPs10pmol????????????????引物
固定化細胞和固定化酶比較
固定化細胞：優點： 固定化細胞內酶的活性基本沒有損失。缺點： 固定化細胞只能用于生產細胞外酶。固定化酶：優點：容易與水溶性反應物和產物分離。缺點： 一種酶只催化一種化學反應,而產物形成是通過一系列酶促反應得到的.
酵母遺傳學方法9：酵母免疫熒光
酵母免疫熒光1）細胞制備1．培養5ml酵母至對數生長早期（106～107細胞/ml）。2．直接加1/10體積的甲醛到培養基里固定細胞（加入的甲醛終濃度為3.7％，標準母液是37％）。3．細胞在甲醛中培養至少1小時。4．離心收集細胞，用0.1mol/L磷酸鉀（pH7.5）洗一次。5．把細胞懸浮在1ml
LSCM細胞固定和染色
細胞固定和染色除了上述使用多聚甲醛固定細胞的方法外，還有一種普遍使用的方法是:培養細胞在?- 20?°C?預冷的甲醇中孵育?5 min。但這種方法對于固定表達熒光蛋白的細胞及?FRET?實驗中并不推薦。這是因為:這種處理方法是沉淀細胞內的蛋白，而不是使蛋白質發生交聯。此外，為了盡可能減少抗體的用量，
酶固定化技術固定化方法比較
?1 吸附法吸附法是利用物理吸附法，將酶固定在纖維素、瓊脂糖等多糖類或多孔玻璃、離子交換樹脂等載體上的固定方式。顯著特點是：工藝簡便及條件溫和，包括無機、有機高分子材料，吸附過程可同時達到純化和固定化；酶失活后可重新活化，載體也可再生。但要求載體的比表面積要求較大，有活潑的表面。2 包埋法包埋固定化
固定化細胞的分類
無載體的固定無載體固定主要目的是將吸附或者共價交聯的細胞，彼此分成自身獨立的區域。所謂吸附過程是指細胞發酵過程中產生的細胞體絮凝或者呈丸粒狀；或通過二級過程，在適應的參數變化之下，簡單有效地制各出具有觸媒活性的顆粒。在此過程中。往往加入少量絮凝劑(即聚合物)，加入的聚合物可直接參與細胞間的相互作用。
固定化細胞概述
固定化細胞是指固定在水不溶性載體上，在一定的空間范圍進行生命活動（生長、發育、繁殖、遺傳和新陳代謝等）的細胞。 固定化細胞技術是用于獲得細胞的酶和代謝產物的一種方法，起源于20世紀70年代，是在固定化酶的基礎上發展起來的新技術。由于固定化細胞能進行正常的生長、繁殖和新陳代謝，所以又稱固定化活細
酶固定化技術固定化方法結合法
酶蛋白分子上與不溶性固相支持物表面上通過離子鍵結合而使酶固定的方法，叫離子鍵結合法。其間形成化學共價鍵結合的固定化方法叫共價鍵結合法。共價鍵結合法結合力牢固，使用過程中不易發生酶的脫落，穩定性能好。該法的缺點是載體的活化或固定化操作比較復雜，反應條件也比較強烈，所以往往需要嚴格控制條件才能獲得活力較
酶固定化技術固定化方法吸附法
吸附法是利用物理吸附法，將酶固定在纖維素、瓊脂糖等多糖類或多孔玻璃、離子交換樹脂等載體上的固定方式。顯著特點是：工藝簡便及條件溫和，包括無機、有機高分子材料，吸附過程可同時達到純化和固定化；酶失活后可重新活化，載體也可再生。但要求載體的比表面積要求較大，有活潑的表面。
酶固定化技術固定化方法吸附法
吸附法是利用物理吸附法，將酶固定在纖維素、瓊脂糖等多糖類或多孔玻璃、離子交換樹脂等載體上的固定方式。顯著特點是：工藝簡便及條件溫和，包括無機、有機高分子材料，吸附過程可同時達到純化和固定化；酶失活后可重新活化，載體也可再生。但要求載體的比表面積要求較大，有活潑的表面。
酶固定化技術固定化方法包埋法
包埋固定化法是把酶固定聚合物材料的格子結構或微囊結構等多空載體中，而底物仍能滲入格子或微囊內與酶相接觸。這個方法比較簡便，酶分子僅僅是被包埋起來，生物活性被破壞的程度低，但此法對大分子底物不適用。1) 網格型將酶或包埋在凝膠細微網格中，制成一定形狀的固定化酶，稱為網格型包埋法。也稱為凝膠包埋法。2)
酶固定化技術固定化方法特點對比
各類固定化方法的特點比較:比較項目吸附法結合法交聯法包埋法物理化學方法分類物理吸附化學共價鍵結合物理離子鍵結合化學鍵連接物理包埋制備難易易難易較難較難固定化程度弱強中等強強活力回收率較高低高中等高載體再生可能不可能可能不可能不可能費用低高低中等低底物專一性不變可變不變可變不變適用性酶源多較廣廣泛較廣
酶固定化技術固定化方法交聯法
交聯法是用多功能試劑進行酶蛋白之間的交聯，使酶分子和多功能試劑之間形成共價鍵，得到三向的交聯網架結構，除了酶分子之間發生交聯外，還存在著一定的分子內交聯。多功能試劑制備固定化酶方法可分為：( 1) 單獨與酶作用；( 2) 酶吸附在載體表面上再經受交聯；( 3) 多功能團試劑與載體反應得到有功能團的載
酵母遺傳學方法3：RNA的分離
酵母RNA的分離1）總酵母RNA的分離1．在每毫升培養物中加入50μg環乙酰亞胺，在30℃下振蕩15分鐘。此步亦可省略，但是有人認為環乙酰亞胺可防止mRNA凝集在多核糖體上。2．迅速冷凍收集細胞，在大離心管中加入約一半體積的碎冰，將培養物倒入，振蕩，在4℃下以5000r/min離心5分鐘。3．加入1
酵母遺傳學方法1：DNA分離
酵母DNA分離1）酵母DNA微量制備（40ml）1．在125ml三角瓶中用40ml YPD培養液在30℃條件下培養細胞達最大生長量（過夜）。2．將上述培養物移入螺蓋離心管，用醫用離心機或Sorvall SS－34轉頭以5000r/min離心5分鐘，棄去上清液。3．將細胞懸浮在3ml的0.9mol/L
關于酶固定化技術的新型固定化方法介紹
1、光耦聯法 光偶聯法是使用光敏性單體聚合物包埋具有光敏基團載體的共價固定化酶或者普通的固定化酶，在溫和的條件下實現轉化，因此獲得的固定化酶往往有著比較高的酶活力。 2、等離子體法 等離子體可以修飾載體材料表面，從而實現活性基團引入，達到固定化的目的。
細胞遺傳學——染色體
Chromosome Staining and Banding Technique?(Primate Cytogenetics Network)Protocols for different staining method, each is in great detail.??Karyotype A
固定化細胞技術簡介
所謂固定化細胞技術，就是將具有一定生理功能的生物細胞，例如微生物細胞、植物細胞或動物細胞等，用一定的方法將其固定，作為固體生物催化劑而加以利用的一門技術。
酵母遺傳學方法5：酵母β－半乳糖苷酶的測定
酵母β－半乳糖苷酶的測定1）??粗提取物測定1．在適當溫度下（通常30℃），用適當培養液將5ml細胞培養物培養到濃度為1×107～2×107細胞/ml。如果自主復制質粒的雜合基因表達，可使用一種適當培養基對存在質粒的菌株進行篩選。2．在冰上冷卻細胞，離心收集。注意：以下步驟保持細胞在冰上。3．棄上清
固定細胞的PI單染色法
方法一1．收集細胞（1～5）×106個，500～1000r/min離心5min，棄去培養液。2．3ml PBS洗一次。3．離心去PBS，加入冰預冷的70％的乙醇固定，4℃，1h。4．離心棄去固定液，3ml PBS重懸5min。5．400目的篩網過濾1次，500～1000r/min離心5min，棄去P
酵母遺傳學方法7：隨機孢子分析
隨機孢子分析1）孢子形成1．挑已形成孢子的二倍體單菌落接種在YPD平板上，盡可能把細胞涂薄一些，在30℃下培養12～16小時，超過16小時將明顯降低孢子的形成率。2．上午，用一個無菌殼板釘取相當一火柴頭量的細胞，轉到含有2.5ml產孢培養基試管中，在25℃下旋轉振蕩培養。3．用光學顯微鏡檢測孢子形成
酵母遺傳學技術
Genome-wide Gene Expression Analysis?(Richard Young Research Group,Whitehead Institute for Biomedical Research)A genoe-wide gene expression analysis u
酵母人工染色體的標記方法
YAC 載體的選擇標記主要采用營養缺陷型基因，如色氨酸、亮氨酸和組氨酸合成缺陷型基因 trp 1、 leu 2和 his 3、尿嘧啶合成缺陷型基因 ura3 等，以及赭石突變抑制基因 sup4 。與 YAC 載體配套工作的宿主酵母菌（如AB1380）的胸腺嘧啶合成基因帶有一個赭石突變ade 2-1。
酵母染色體沉淀分析方法
ABSTRACTThis protocol describes a method for the detection of proteins bound to specific regions of chromatin in yeast. There are many variations of t