酵母遺傳學方法7：隨機孢子分析
隨機孢子分析1）孢子形成1．挑已形成孢子的二倍體單菌落接種在YPD平板上，盡可能把細胞涂薄一些，在30℃下培養12～16小時，超過16小時將明顯降低孢子的形成率。2．上午，用一個無菌殼板釘取相當一火柴頭量的細胞，轉到含有2.5ml產孢培養基試管中，在25℃下旋轉振蕩培養。3．用光學顯微鏡檢測孢子形成情況。要使5％以上的細胞形成孢子需花2～10天。 2）隨機孢子4．取1ml形成孢子的培養物轉到15ml的錐形聚苯乙烯離心管，用醫用離心機離心5分鐘沉淀細胞。5．徹底除去上清液，把細胞懸浮在0.2ml無菌水和5μl β-葡糖苷酸酶（約500個單位）。6．在30℃條件下旋轉振蕩培養1小時。7．加0.1ml（約0.15克）滅菌的0.5mm玻珠，在30℃條件下旋轉振蕩培養1小時。8．加1ml無菌水。9．振蕩1～2分鐘，用光學顯微鏡檢查子囊是否完全破裂。10． 加4ml無菌水。11． &nbs......閱讀全文
酵母遺傳學方法7：隨機孢子分析
隨機孢子分析1）孢子形成1．挑已形成孢子的二倍體單菌落接種在YPD平板上，盡可能把細胞涂薄一些，在30℃下培養12～16小時，超過16小時將明顯降低孢子的形成率。2．上午，用一個無菌殼板釘取相當一火柴頭量的細胞，轉到含有2.5ml產孢培養基試管中，在25℃下旋轉振蕩培養。3．用光學顯微鏡檢測孢子形成
隨機孢子分析
實驗步驟展開
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案7
技術和方案7 質粒 DNA 的羥胺突變試劑、試劑盒羥胺溶液氯化銫純化的質粒DNANaCl牛血清白蛋白無水乙醇TE 緩沖液實驗步驟1.臨用之前制備羥胺溶液，置冰上待用。2.將用 CsCl 純化的 10 埤質粒 DNA 加到含 500ul 羥胺溶液的微量離心管中。3.在 37°C 下溫育 20 h。4.
有絲分裂重組和隨機孢子分析實驗
實驗材料酵母菌株儀器、耗材YPD 平板無菌接種環實驗步驟展開
酵母菌隨即孢子分析實驗
實驗材料 酵母菌試劑、試劑盒 2-疏基乙醇乙醇酵母裂解液儀器、耗材 超聲發生器探頭離心機實驗步驟 1. ?制備可供剖分四分體用的細胞。如果孢子在平板上形成，可用牙簽挑起孢子放入裝有5 ml 水的50 ml 燒瓶中；如果孢子在液體培養基中形成，可將1 ml 培養液加入5 ml 水中。然后加入0
酵母菌隨即孢子分析實驗
將減數分裂產物從子囊中釋放出來，通過超聲破裂，直接鋪在瓊脂平板上，孢子菌落可以通過影印平板法來篩選目的基因型。實驗材料酵母菌試劑、試劑盒2-疏基乙醇乙醇酵母裂解液儀器、耗材超聲發生器探頭離心機實驗步驟1. ?制備可供剖分四分體用的細胞。如果孢子在平板上形成，可用牙簽挑起孢子放入裝有5 ml 水的50
酵母遺傳學方法8：酵母活體染色
酵母活體染色1）核DNA和線粒體DNA1．當細胞培養到約107細胞/ml時，離心（5秒）收集細胞，再懸浮在70％乙醇中。2．固定5分鐘或5分鐘以上，用水洗2次。3．將細胞懸浮在含有50ng/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚的封固劑中。1mg/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚母液可在－20℃下貯存。4
酵母遺傳學方法12：酵母菌落PCR方法
酵母菌落PCR方法1．在冰上配制反應混合液：2μl??????????????????10×菌落PCR緩沖液1.2μl?????????????????25mmol/L MgCl20.4μl?????????????????10mmol/L dNTPs10pmol????????????????引物
酵母遺傳學方法9：酵母免疫熒光
酵母免疫熒光1）細胞制備1．培養5ml酵母至對數生長早期（106～107細胞/ml）。2．直接加1/10體積的甲醛到培養基里固定細胞（加入的甲醛終濃度為3.7％，標準母液是37％）。3．細胞在甲醛中培養至少1小時。4．離心收集細胞，用0.1mol/L磷酸鉀（pH7.5）洗一次。5．把細胞懸浮在1ml
酵母遺傳學方法1：DNA分離
酵母DNA分離1）酵母DNA微量制備（40ml）1．在125ml三角瓶中用40ml YPD培養液在30℃條件下培養細胞達最大生長量（過夜）。2．將上述培養物移入螺蓋離心管，用醫用離心機或Sorvall SS－34轉頭以5000r/min離心5分鐘，棄去上清液。3．將細胞懸浮在3ml的0.9mol/L
分子遺傳學詞匯隨機誘變
中文名稱：隨機誘變英文名稱：random mutagenesis定 義：非定點地誘發基因產生突變。應用學科：遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）
分子遺傳學詞匯隨機引物
中文名稱：隨機引物外文名稱：random primer定義：隨機引物是指當特定mRNA由于含有使逆轉錄酶終止的序列而難于拷貝其全長序列時，可采用隨機六聚體這一非特異的引物來拷貝全長mRNA。
酵母遺傳學方法3：RNA的分離
酵母RNA的分離1）總酵母RNA的分離1．在每毫升培養物中加入50μg環乙酰亞胺，在30℃下振蕩15分鐘。此步亦可省略，但是有人認為環乙酰亞胺可防止mRNA凝集在多核糖體上。2．迅速冷凍收集細胞，在大離心管中加入約一半體積的碎冰，將培養物倒入，振蕩，在4℃下以5000r/min離心5分鐘。3．加入1
酵母遺傳學技術
Genome-wide Gene Expression Analysis?(Richard Young Research Group,Whitehead Institute for Biomedical Research)A genoe-wide gene expression analysis u
酵母遺傳學方法5：酵母β－半乳糖苷酶的測定
酵母β－半乳糖苷酶的測定1）??粗提取物測定1．在適當溫度下（通常30℃），用適當培養液將5ml細胞培養物培養到濃度為1×107～2×107細胞/ml。如果自主復制質粒的雜合基因表達，可使用一種適當培養基對存在質粒的菌株進行篩選。2．在冰上冷卻細胞，離心收集。注意：以下步驟保持細胞在冰上。3．棄上清
分子遺傳學詞匯局部隨機誘變
中文名稱：局部隨機誘變英文名稱：localized random mutagenesis定 ：一種在體外將克隆的基因專一性地突變后用于置換受體生物中該基因的野生型拷貝的實驗技術。應用學科：遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案
技術和方案6 酵母 RNA 的分離試劑、試劑盒環乙酰亞胺苯酚LETS緩沖液LiCl乙醇SDS乙酸鈉AE 緩沖液儀器、耗材大離心瓶玻璃珠離心管oligo (dT) 柱實驗步驟大量 RNA 分離程序酵母總 RNA 的分離1.在每毫升培養物中加入 50ug 環乙酰亞胺，在 30°C 下搖晃 15 min。
酵母遺傳學方法4：質粒DNA的羥基突變
質粒DNA的羥基突變1．臨用之前制備羥胺溶液，置冰上待用。2．將用氯化銫純化的10μg質粒DNA加到含500μl羥胺溶液的微型離心管。3．在37℃下培養20小時。4．加入10μl的5mol/L NaCl、50μg 1mg/ml的牛血清蛋白（BSA）和1ml無水乙醇終止反應，置－70℃沉淀DNA10分
酵母遺傳學方法11：PCR介導基因破壞法
PCR介導基因破壞法1．反應混合物：5μl?????????????10×Taq緩沖液5μl?????????????25mmol/L MgCl22μl?????????????10mmol/L dNTPs10~100ng?????????模板DNA25pmols??????????引物（每種引物）
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案3
技術和方案3 酵母 DNA 分離實驗材料質粒DNA玻璃珠試劑、試劑盒YPD消解酶 100TTris-HClSDS乙酸鉀TE 緩沖液RNaseA 溶液山梨醇無水異丙醇裂解緩沖液儀器、耗材三角瓶離心管實驗步驟一、酵母 DNA 微量制備（40 ml)1.在 125 ml 三角瓶中用 40 mlYPD 培養
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案1
技術和方案1 酵母的高效轉化實驗步驟展開
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案2
技術和方案2 快速粗放的酵母菌落質粒轉化法實驗步驟展
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案4
技術和方案4 酵母蛋白質的抽提試劑、試劑盒NaOHPAGE 樣品緩沖液Tris-HCl甘油β-巰基乙醇溴酚藍實驗步驟1.從液體培養物中或用細菌接種環在平板表面刮菌，收集大約 2.5 OD的細胞量（大約 2.3 mg 濕重）。將細胞重懸于 100ul 蒸餾水中，加入 100ul O.2mol/L Na
酵母遺傳學方法實驗指南——技術和方案5
技術和方案5 TAP純化方法試劑、試劑盒NP-40緩沖液TEV C 緩沖溶液鈣調蛋白結合緩沖液（CBB)鈣調蛋白洗脫緩沖液（CEB)實驗步驟1.培養 3~6L 細胞至濃度為 2X107~3X107 個/ml(OD50=1.0~1.3)。2.離心收集細胞，并用冰預冷的水洗一次。3.用冰預冷的 NP-4
酵母菌子囊孢子的觀察
實驗概要學習并掌握酵母菌子囊孢子（ascospore）的觀察方法。實驗原理酵母菌的子囊孢子生成與否及其形狀，是酵母分類上的重要依據。一部分酵母菌只有當它在最適條件下，才能觀察到形成的子囊孢子，不同種屬的酵母菌，形成子囊孢子的條件不同。葡萄糖-醋酸鹽培養基特別有利于釀酒酵母子囊孢子的形成。本實驗用生長
酵母菌子囊孢子的觀察實驗_子囊孢子的觀察
實驗方法原理酵母菌的子囊孢子生成與否及其形狀，是酵母分類上的重要依據。一部分酵母菌只有當它在最適條件下，才能觀察到形成的子囊孢子，不同種屬的酵母菌，形成子囊孢子的條件不同。葡萄糖-醋酸鹽培養基特別有利于釀酒酵母子囊孢子的形成。本實驗用生長在此培養基上的釀酒酵母為材料，進行子囊孢子的觀察。實驗材料釀酒
酵母遺傳學方法2：蛋白質的抽提
酵母蛋白質的抽提此法抽提的酵母蛋白適用于SDS凝膠電泳和Western印跡分析。1．從OD600＝2的細胞培養物中抽提酵母蛋白質。培養物的一種簡單制備方法是將細胞接種到5ml YPD中，過夜培養后獲得指數培養物（OD600＝0.5～2.0）。2．在水浴上把OD600＝2的細胞培養物轉到含有2ml的5
酵母遺傳學方法6：羧肽酶Y的平板鑒定
羧肽酶Y的平板鑒定1．在YPD平板上培養菌落和菌苔（通常菌落長3天，菌苔長1天即可）。2．小心把涂蓋液加在平板的表面使之完全覆蓋細胞。3．待瓊脂凝固5～10分鐘后，小心用新鮮Fast Garnet GBC溶液沖刷表面。4．顯色5分鐘，野生型菌株將變紅，而羧肽酶Y－菌株將呈現黃色或粉紅色。5．倒出Fa
酵母菌子囊孢子的觀察實驗
實驗方法原理?酵母菌的子囊孢子生成與否及其形狀，是酵母分類上的重要依據。一部分酵母菌只有當它在最適條件下，才能觀察到形成的子囊孢子，不同種屬的酵母菌，形成子囊孢子的條件不同。葡萄糖-醋酸鹽培養基特別有利于釀酒酵母子囊孢子的形成。本實驗用生長在此培養基上的釀酒酵母為材料，進行子囊孢子的觀察。實驗材料?
酵母遺傳學方法10：固定化細胞的肌動蛋白染色
固定化細胞的肌動蛋白染色1．培養細胞到對數生長期（約107細胞/ml）。2．直接取0.1ml甲醛加到含有1ml培養物的離心管中固定細胞（甲醛濃度為3.7％；標準母液是37％）。3．在甲醛中培養細胞30分鐘或稍長時間。4．用PBS洗兩次，離心5分鐘收集細胞。5．用50μl的PBS懸浮細胞，加5個單位的