PCR污染與對策
PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生.污染原因 (一)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染. (二)PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染. (三)PCR擴增產物污染.這是PCR反應中最主要最常見的污染問題.因為PCR產物拷貝量大(一般為1013拷貝/ml)，遠遠高于PCR檢測數個拷貝的極限，所以極微量的PCR產物污染，就可造成假陽就可形成假陽性. 還有一種容易忽視，最可能造成PCR產物污染的形式是氣溶膠污染；在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠，在操作時比較劇烈地......閱讀全文
PCR污染與對策
PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生.污染原因 (一)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污
PCR污染與對策
PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生. 一、污染原因 1、標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣
PCR的污染與對策
?一、污染原因 ?（一）標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于 密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提 取過程中，由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠 或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染. （二）P
PCR實驗污染與對策
PCR反應的zui大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生。一、污染原因1、標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍
PCR技術（四）：PCR污染與對策
PCR反應的最大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污 染，極其微量的污染即可造成假陽性的產生.一、污染原因 (一)標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于 密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提 取過程中，由
PCR污染及解決對策
?聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法，在微生物感染的診斷中具有重要的價值。在PCR擴增過程中，擴增的DNA產量是呈指數上升的，經過n個循環的擴增，一個DNA分子的產量便達到2n個拷貝。PCR產物一般為1013拷貝/
PCR常見問題分析與對策
1.PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?2.假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白
淺談PCR方法中常見的污染問題及對策
淺談RT-PCR實驗方法中常見污染問題及對策 河南出入境檢驗檢疫局技術中心 李軻 反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）是一種體外核酸擴增技術，它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點，能在幾個小時內完成從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產物供分析研究和檢測鑒定，所以
PCR中常見問題分析與對策
PCR產物的電泳檢測時間?一般認為PCR產物應在48h以內完成電泳檢測，有些zui好于當日電泳檢測，大于48h后帶型就會出現不規則，甚至消失。?1? 假陰性，不出現擴增條帶???? PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節
河湖污染現狀與治理對策
城市現代化建設腳步不斷加快下， 社會生產生活中排放了大量的廢水和污水，這些廢水和污水如果未經充分處理直接排入到河湖中，將會導致河湖水環境污染，增加好氧有機物含量，甚至出現嚴重的黑臭問題。所以，需要根據實際情況，尋求合理的河湖治理對策，尋求科學合理的治理對策。通過河湖污染和治理相關研究，了解河湖
PCR技術（五）：常見問題分析與對策
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚致消失。?假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模
淺談RTPCR實驗方法中常見污染問題及對策
李軻反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）是一種體外核酸擴增技術，它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點，能在幾個小時內完成從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產物供分析研究和檢測鑒定，所以近年來RT-PCR技術被廣泛應用于人和動物的多種傳染病早期診斷。筆者一直從事實
淺談RTPCR實驗方法中常見污染問題及對策
李軻反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)是一種體外核酸擴增技術，它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點，能在幾個小時內完成從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產物供分析研究和檢測鑒定，所以近年來RT-PCR技術被廣泛應用于人和動物的多種傳染病早期診斷。 筆者一直
火電大氣污染面臨的挑戰與對策
盡管中國燃煤發電大氣污染物控制技術處于世界領先水平，常規三大污染物（煙塵、SO2、NOx）實現了燃煤電廠與燃氣電廠同等清潔，但未來火電發展仍然面臨挑戰，主要表現在以下6個方面。圖片來源于網絡 1.溫室氣體排放量巨大 燃煤發電機組單位發電量產生的CO2排放量約0.76~0.92kg/(kWh)
PCR常見問題及對策
PCR常見問題及對策（一）沒有得到擴增產物（1）酶失活或在反應體系中未加入酶。Taq?DNA聚合酶因保存或運輸不當而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結果。（2）模板含有雜質。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的結果。（3）變性溫度是否準確：PCR
重金屬污染防治環境標準的現狀與對策
近幾年來，我國重金屬污染事件多發頻發。這些事件中有不少排污企業達標排放，卻同樣引起所在地污染物總量超標，或者當地人體內重金屬超過健康標準的現象，其中較為典型的是發生在陜西省鳳翔縣的鉛污染事件。這其中暴露了我國重金屬污染防治環境標準制定中存在的諸多問題。 標準制定存在的問題 第一，原則
細菌耐藥與臨床對策
近年來由于抗生素的廣泛應用，細菌的耐藥問題越來越嚴重。歷史和現實的教訓告訴我們：任何一種抗生素一旦問世，很快就會產生耐藥株，產生耐藥株的時間周期短則幾年，長則十幾年（表1）。目前，細菌的耐藥問題已成為全球的嚴重問題，為此WHO專門發表了針對細菌耐藥問題的專家建議(WHO／CDS／CS
細菌耐藥與臨床對策
近年來由于抗生素的廣泛應用，細菌的耐藥問題越來越嚴重。歷史和現實的教訓告訴我們：任何一種抗生素一旦問世，很快就會產生耐藥株，產生耐藥株的時間周期短則幾年，長則十幾年（表1）。目前，細菌的耐藥問題已成為全球的嚴重問題，為此WHO專門發表了針對細菌耐藥問題的專家建議(WHO／CDS／CS
細菌耐藥與臨床對策
近年來由于抗生素的廣泛應用，細菌的耐藥問題越來越嚴重。歷史和現實的教訓告訴我們：任何一種抗生素一旦問世，很快就會產生耐藥株，產生耐藥株的時間周期短則幾年，長則十幾年（表1）。目前，細菌的耐藥問題已成為全球的嚴重問題，為此WHO專門發表了針對細菌耐藥問題的專家建議(WHO／CDS／CSR／DRS／20
PCR反應出現非特異性擴增帶的原因與對策
PCR 擴增后出現的條帶與預計的大小不一致，或大或小，或者同時出現特異性擴增帶與非特異性擴增帶。可能出現的原因有以下幾點： 1)引物與靶序列不完全互補或引物聚合形成二聚體; 2)Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低及PCR循環次數過多有關; 3)其次是酶的質和量，往往一些來源的酶易出現非特
水庫水質檢測污染分析及對策
一、概述水庫是大型的水利樞紐工程，修建水庫最主要的作用是防洪防汛抗旱，還有供水、灌溉、旅游等其他作用，其中供水也是水庫至關重要的作用之一。如果要達到供水標準，就必須符合國家《地表水環境質量標準》中三類標準，如果要達到可供飲用就要達到二類標準。我國有湖北三峽、廣西龍灘、青海龍羊峽等758 座大型水庫，
處理膜污染，有了自清洗對策
南京大學環境學院教授高冠道課題組開發了一種自清潔壓電陶瓷濾膜(PiezoMem)，創建了一種利用膜過程中固有水壓驅動壓電陶瓷濾膜產生壓電電壓并用于免溶劑清洗膜污染的方法，實現了膜分離過程與抗膜污染過程的統一，為典型膜分離技術面臨的共性挑戰提供了新策略。近日，相關研究成果以《脈沖水壓響應自清洗濾膜》，
PCR拖尾及假陽性的原因及對策
拖尾 現象：產物在凝膠上呈Smear狀態。 原因： 1.模板不純 2.Buffer不合適 3.退火溫度偏低 4.酶量過多 5.dNTP、Mg2+濃度偏高 6.循環次數過多 對策： 1.純化模板 2.更換Buffer 3.適當提高退火溫度 4.適量用酶 5.適當降低dNTP
“我國土壤重金屬污染問題與治理對策”總結會召開
4月18日，由傅家謨院士主持的中國科學院學部咨詢項目“我國土壤重金屬污染問題與治理對策”總結會在廣州召開。來自中科院南京土壤所、廣州地化所、煙臺海岸帶所以及廣東省生態環境與土壤所的咨詢項目組專家及成員參加了會議。 與會人員對我國土壤重金屬污染的現狀、成因與治理對策等進行了討論，對前期所做大
細菌耐藥與臨床對策（二）
1.2.2 DNA拓撲異構酶的改變引起喹諾酮類抗生素耐藥 喹諾酮類藥物的作用機制主要是通過抑制DNA拓撲異構酶而抑制DNA的合成，從而發揮抑菌和殺菌作用。細菌DNA拓撲異構酶有I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，喹諾酮類藥物的主要作用靶位是拓撲異構酶Ⅱ和拓撲異構酶Ⅳ。拓撲異構酶Ⅱ又稱DNA促旋酶，參與DNA超螺旋的形
細菌耐藥與臨床對策（一）
近年來由于抗生素的廣泛應用，細菌的耐藥問題越來越嚴重。歷史和現實的教訓告訴我們：任何一種抗生素一旦問世，很快就會產生耐藥株，產生耐藥株的時間周期短則幾年，長則十幾年（表1）。目前，細菌的耐藥問題已成為全球的嚴重問題，為此WHO專門發表了針對細菌耐藥問題的專家建議(WHO／CDS／CSR／DRS／
大氣污染防治面臨的挑戰及對策
近年，隨著我國經濟快速發展，城市建設不斷擴大，環境污染問題日益嚴峻，其中最為突出的一項就是大氣污染。大氣污染主要體現在空氣中的浮塵顆粒較大、污染物超標，尤其是在高密度人口的經濟及社會活動中，大量細顆粒物的排放超過大氣循環能力和承載度而形成霧霾，其不僅造成了大氣污染，更直接影響了人們的身體健康。為
如何避免支原體污染的應對策略
培養細胞時，發現細胞增殖變慢、形態漸漸改變，是血清或培養基的問題嗎？很有可能是你的細胞污染了~~~~~支 原 體 污 染細胞污染可分為細菌、霉菌、酵母菌、支原體污染，其中支原體污染發生的概率>50%。支原體(Mycoplasma) 是最小的原核生物，約0.1-0.3μm，可穿透0.22-0.45 μ
大氣污染防治面臨的挑戰及對策
隨著時代的進步發展，我國在不斷加強城市文明建設的進程中取得了顯著成效，但與此同時隨之而來的是日益嚴峻的環境污染問題，當各類環境污染成為民生之患、民心之痛，環境治理就應運而生。對此，我國對大氣污染治理力度在不斷加大，制定了相關的大氣污染預防措施，取得了一定的成效，但是還需進一步加強大氣污染的防治工
如何預防PCR污染？
? 進行 PCR 反應時，遵照下列規則有助于防止 PCR 的污染。（1）PCR 的前處理和后處理在不同的房間或不同的隔離工作臺上進行。即整個 PCR 操作要在不同的隔離區（標本處理區，PCR 擴增區，產物分析區）進行，特別是陽性對照需在另一個隔離環境中貯存、加入。（2）試劑要分裝，每次取完試劑后蓋緊