通過平板裂解和刮取制備λ噬菌體原種
方法：1、鋪平板感染培養物的制備：對直徑為10cm的培養皿，取105pfu的噬菌體（通常約為一個噬菌斑重懸液的1/10或一個大噬菌斑重懸液的1/100）與0.1ml鋪平板細菌混勻。對直徑為15cm的培養皿，去2*105pfu的噬菌體與0.2ml鋪平板細菌混勻。至少要置一個含為感染細胞的對照管，將感染培養物和對照均置于37℃培養20min，將病毒吸附到細胞上。如果制備不易生長的λ噬菌體原種、則每0.1ml的鋪平板細菌就要接種106pfu的噬菌體。2、3ml已熔化的47℃的瓊脂糖（10cm平板）或7ml（15cm平板）至感染細胞的第一個試管中，通過輕拍或渦旋振蕩數秒混勻，立即倒入已表明的瓊脂平板中央。盡量避免氣泡的產生。選擇平板確保細菌和頂層瓊脂糖分布均勻。重復這一步，知道每管中的東西均轉移至各個平板中。3、將平板于37℃正置約12-16h。在培養過程中平板沒有倒置，是為了防止頂層瓊脂糖滑脫和鼓勵在平皿表面形成水珠，后者使得噬菌體更......閱讀全文
通過平板裂解和刮取制備λ噬菌體原種
方法：1、鋪平板感染培養物的制備：對直徑為10cm的培養皿，取105pfu的噬菌體（通常約為一個噬菌斑重懸液的1/10或一個大噬菌斑重懸液的1/100）與0.1ml鋪平板細菌混勻。對直徑為15cm的培養皿，去2*105pfu的噬菌體與0.2ml鋪平板細菌混勻。至少要置一個含為感染細胞的對照管，將感染
通過平板裂解和洗脫制備λ噬菌體原種實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 來源于單個噬菌斑的 λ 噬菌體原種的制備，通常有兩種方法：① 平板裂解，這是一種噬菌體在生長于頂層瓊脂或瓊脂糖的細菌中增殖的方法；② 小量液體培養，這是用生長于液體培養基中的細菌進行噬菌體增殖的方法。
通過平板裂解和洗脫制備λ噬菌體原種實驗
實驗方法原理 來源于單個噬菌斑的 λ 噬菌體原種的制備，通常有兩種方法：① 平板裂解，這是一種噬菌體在生長于頂層瓊脂或瓊脂糖的細菌中增殖的方法；② 小量液體培養，這是用生長于液體培養基中的細菌進行噬菌體增殖的方法。實驗材料 λ 噬菌體原種大腸桿菌鋪平板細菌試劑、試劑盒 氯仿SM儀器、耗材 LB 或
通過平板裂解和洗脫制備λ噬菌體原種實驗
來源于單個噬菌斑的 λ 噬菌體原種的制備，通常有兩種方法：① 平板裂解，這是一種噬菌體在生長于頂層瓊脂或瓊脂糖的細菌中增殖的方法；② 小量液體培養，這是用生長于液體培養基中的細菌進行噬菌體增殖的方法。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理來源于單個噬菌斑的 λ 噬菌體原種的制備
通過凝膠電泳測定λ噬菌體原種和裂解物中DNA
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案闡述了一種快速估計 λ 噬菌體原種中 DNA 含量的方法。該方法首先可用于發現原種和裂解物中的噬菌體顆粒的得率是否能滿足大量純化的需要，其次可用于檢測純化過程，以找到出問題步驟。
通過凝膠電泳測定λ噬菌體原種和裂解物中DNA的含量實驗
實驗方法原理 本方案闡述了一種快速估計 λ 噬菌體原種中 DNA 含量的方法。該方法首先可用于發現原種和裂解物中的噬菌體顆粒的得率是否能滿足大量純化的需要，其次可用于檢測純化過程，以找到出問題步驟。實驗材料 λ 噬菌體 DNAλ 噬菌體裂解物或原種試劑、試劑盒 2.5X SDS-EDTA 染料混合物
通過凝膠電泳測定λ噬菌體原種和裂解物中DNA的含量實驗
本方案闡述了一種快速估計 λ 噬菌體原種中 DNA 含量的方法。該方法首先可用于發現原種和裂解物中的噬菌體顆粒的得率是否能滿足大量純化的需要，其次可用于檢測純化過程，以找到出問題步驟。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理本方案闡述了一種快速估計 λ 噬菌體原種中 DNA 含量
用小量液體培養物制備λ噬菌體原種實驗
可通過小量液體培養物制備高滴度 λ 噬菌體原種。這一方法最早由 Leder 等（1977）采用。一般來說，它所得到的 λ 噬菌體的產量比平板裂解低且不穩定，另外噬菌體最初的接種量也大。但是，在液體培養物中制備的 λ 噬菌體原種將更清亮，并且也不含污染平板裂解物的硫酸鹽多糖。本實驗來源「分子克隆實驗指
用小量液體培養物制備λ噬菌體原種實驗
實驗方法原理 可通過小量液體培養物制備高滴度 λ 噬菌體原種。這一方法最早由 Leder 等（1977）采用。一般來說，它所得到的 λ 噬菌體的產量比平板裂解低且不穩定，另外噬菌體最初的接種量也大。但是，在液體培養物中制備的 λ 噬菌體原種將更清亮，并且也不含污染平板裂解物的硫酸鹽多糖。
用小量液體培養物制備λ噬菌體原種實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 可通過小量液體培養物制備高滴度 λ 噬菌體原種。這一方法最早由 Leder 等（1977）采用。一般來說，它所得到的 λ 噬菌體的產量比平板裂解低且不穩定，另外噬菌體最初的接種量也大。但是，在液體培養物中制備的 λ 噬菌
λ噬菌體噬菌斑的挑取實驗
遺傳上同源的 λ 噬菌體原種是通過 "挑取” 一個完全獨立的噬菌斑并將含有裂解物的瓊脂/瓊脂糖保存于貯存液中而獲得的。獲得的原種可用于制備噬菌體的平板裂解物或液體培養物，也可用于以后的分析。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理遺傳上同源的 λ 噬菌體原種是通過 "挑取” 一個
噬菌體的檢測為什么要制備雙層平板
加入底層平板后可以彌補培養皿底部不平的缺陷，這樣可以使所有的噬菌斑都位于近乎同一平面上。上層瓊脂層較稀，可以形成形態較大，便于觀察和計數的噬菌斑。
λ噬菌體噬菌斑的挑取實驗
實驗方法原理 遺傳上同源的 λ 噬菌體原種是通過 "挑取” 一個完全獨立的噬菌斑并將含有裂解物的瓊脂/瓊脂糖保存于貯存液中而獲得的。獲得的原種可用于制備噬菌體的平板裂解物或液體培養物，也可用于以后的分析。實驗材料 λ 噬菌體試劑、試劑盒 氯仿SM儀器、耗材 硼硅酸鹽巴斯德設管（配有橡皮球）或微量移液
λ噬菌體噬菌斑的挑取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 遺傳上同源的 λ 噬菌體原種是通過 "挑取” 一個完全獨立的噬菌斑并將含有裂解物的瓊脂/瓊脂糖保存于貯存液中而獲得的。獲得的原種可用于制備噬菌體的平板裂解物或液體培養物，也可用于以后的分析。
從大規模裂解物中制備λ噬菌體顆粒
材料：緩沖液和溶液：氯仿NaCl（固體）聚乙二醇（PEG 8000）SM酶和緩沖液：胰Dnase I (1mg/ml)胰Dnase I (1mg/ml)于TE中（ph7.6）離心機和轉子：Sorvall? GSA 轉子或相當型號專用設備：量筒（2L）載體和菌株：大腸桿菌培養物，經λ噬菌體感染和裂解方
表達β半乳糖苷酶噬菌體的噬菌斑分析
材料：LB或NZCYM頂層瓊脂或瓊脂糖，含有X-gal對于3ml頂層瓊脂，加40ul 2%X-gal。X-gal要在臨用前才加入已冷卻的頂層瓊脂（47℃）中。大腸桿菌鋪平板細菌只有不是β-半乳糖苷酶的過量表達株，可采用任何支持特異性λ噬菌體裂解生長的大腸桿菌。細菌染色體上單拷貝lacZ基因的存在不影
M13噬菌體液體培養
M13 噬菌體原種通常采用液體培養，感染細胞并不裂解而是緩慢生長形成稀懸液。接種幾乎總是用一個新挑取的噬菌斑或單個噬菌斑獲得的噬菌體顆粒懸液。感染細胞含 200 拷貝以上雙鏈 RF DNA，每代分泌數百個噬菌體顆粒。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理M13 噬菌體原種通常采
cDNA的篩選3
免疫學染色1.為了洗去頂層瓊脂上的殘余物和細胞碎片，將硝酸纖維素濾膜一次最多5張轉移放在搖床上的盤子（10×10cm）內，用25ml TBS室溫洗滌10 min 2次。2.然后濾膜用25ml封閉緩沖液（每張90mm直徑的濾膜至少15ml）于室溫溫育 30min，以封閉濾膜上的非特異性結合位點。不斷晃
制備DNA測序模板實驗——小量裂解物中制備λ噬菌體DNA
實驗材料重組λ噬菌體試劑、試劑盒DNA酶ⅠRNA酶ⅠPEGSMSDSEDTA異丙醇乙酸鈉TE儀器、耗材巴斯德吸管試管離心機實驗步驟1. ?在新鮮配制的λ頂層瓊脂糖和λ瓊脂糖平板上，通過在平板上裂解適于λ噬菌體生長的大腸桿菌菌株，制備重組λ噬菌體毒種原液。2. ?取700 μl 毒種液加入無菌的1.5
λ噬菌體DNA的制備
實驗概要本實驗介紹了λ噬菌體DNA的制備、操作步驟和注意事項。實驗原理λ噬菌體是最早使用的克隆載體，λ噬菌體的基因組是一長度約為50kb的雙鏈DNA分子，它在宿主細胞有兩種生活途徑：其一是裂解生長，環狀DNA ? 分子在細胞內多次復制，合成大量噬菌體基因產物，裝配成噬菌體顆粒，裂解宿主菌再進行下一次
從大規模裂解物中制備λ噬菌體顆粒實驗
從大規模培養物中制備的 λ 噬菌體，可在高鹽存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的辦法從裂解物中回收得到。殘余的細胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在進一步純化之前，建議測定噬菌體制備物的得率。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理從大規模培養物中制備的 λ 噬菌體，可在高鹽存
從大規模裂解物中制備λ噬菌體顆粒實驗
實驗方法原理 從大規模培養物中制備的 λ 噬菌體，可在高鹽存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的辦法從裂解物中回收得到。殘余的細胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在進一步純化之前，建議測定噬菌體制備物的得率。實驗材料 大腸桿菌培養物試劑、試劑盒 氯仿NaCl聚乙二醇SM胰 DNaseⅠ儀器、耗材 S
從大規模裂解物中制備λ噬菌體顆粒實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 從大規模培養物中制備的 λ 噬菌體，可在高鹽存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的辦法從裂解物中回收得到。殘余的細胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在進一步純化之前，建議測定噬菌體制備物的得率。
噬菌體文庫的鋪平板和轉移實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 噬菌體 試劑、試劑盒
噬菌體文庫的鋪平板和轉移實驗
實驗材料 噬菌體試劑、試劑盒 瓊脂糖LBNaOHSSCTris·Cl儀器、耗材 硝酸纖維素膜培養箱實驗步驟 1. ?通過系列等比稀釋滴定噬菌體文庫的滴度。?2. ?重組噬菌體與鋪平板的宿主菌混合于培養試管中（表一），于37 ℃溫育20 min。?表一、噬菌體文庫鋪平板組分最佳配制方法?3. ?按每個
平板的制備和儲存方法
傾注融化的培養基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少為3?mm（直徑90?mm的平皿，通常要加入18?mL～20?mL瓊脂培養基）。將平皿蓋好皿蓋后放到水平平面使瓊脂冷卻凝固。如果平板需儲存，或者培養時間超過48?h或培養溫度高于40?℃，則需要傾注更多的培養基。凝固后的培養基應立即使用或存放于
CDNA文庫篩選
CDNA文庫篩選（一）λgt11 cDNA文庫鋪平板宿主細菌制備1．用一個E.coli宿主菌株單菌落分別接種2×5ml LB培養基（Y1088用于噬菌斑雜交，Y1090用于免疫篩選），于37℃振蕩培養過夜。2．將過夜培養物以3000×g離心5min。3．分別用2ml?λ-dil（10 mmol/L
λ噬菌體分離物的快速分析(從平板裂解物中純化λDNA)實驗
實驗方法原理 對有希望的基因組或 cDNA 克隆的分析，通常開始于用限制酶消化 λ 噬菌體 DNA 的小量制備物，并對消化產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析。所獲得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成（由噬菌體 SP6、T3 和 T7 編碼的依賴于 DNA 的 RNA 聚合酶來完成）的模板以
λ噬菌體分離物的快速分析(從平板裂解物中純化λDNA)實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 對有希望的基因組或 cDNA 克隆的分析，通常開始于用限制酶消化 λ 噬菌體 DNA 的小量制備物，并對消化產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析。所獲得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成（由噬菌體 SP6、T3 和 T7
λ噬菌體分離物的快速分析(從平板裂解物中純化λDNA)實驗
對有希望的基因組或 cDNA 克隆的分析，通常開始于用限制酶消化 λ 噬菌體 DNA 的小量制備物，并對消化產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析。所獲得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成（由噬菌體 SP6、T3 和 T7 編碼的依賴于 DNA 的 RNA 聚合酶來完成）的模板以及 PCR 的模板。本