DNA裂解分析實驗
瓊脂糖凝膠電泳 個體核的PI熒光 乙醇固定后PI染色 JAM分析 實驗材料 細胞 試劑、試劑盒 溶解緩沖液 RNA 酶A T1 混合液 蛋白酶 K DNA 加樣緩沖液 儀器、耗材 Eppendorf 管 移液管 瓊脂糖凝膠 實驗步驟 ......閱讀全文
DNA裂解分析實驗
實驗材料?細胞試劑、試劑盒?溶解緩沖液RNA 酶A T1 混合液蛋白酶 KDNA 加樣緩沖液儀器、耗材?Eppendorf 管移液管瓊脂糖凝膠實驗步驟 1. 將 5X105 細胞移入無菌的 1.5 ml Eppendorf 管中，4℃ 2000 r/min 離心 5 分鐘，棄上清。2. 加入 20
DNA裂解分析實驗
瓊脂糖凝膠電泳 個體核的PI熒光 乙醇固定后PI染色 JAM分析 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
DNA裂解分析實驗
瓊脂糖凝膠電泳 個體核的PI熒光 乙醇固定后PI染色 JAM分析 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
DNA裂解分析實驗_JAM分析
實驗材料細胞試劑、試劑盒胸腺嘧啶脫氧核苷HBSSPBSEDTA儀器、耗材新鮮培養基組織培養板實驗步驟1. 實驗前一天，將細胞接種于新鮮培養基。對數生長期細胞可更好地滲入 [3H]-胸腺嘧啶脫氧核苷。2. 收獲細胞，在新鮮培養基中以 1X106?細胞/ml 重懸，用 5 μCi/ml [3H]-胸腺嘧
堿裂解法提取質粒DNA
實驗目的1、掌握最常用的提取質粒DNA的方法和檢測方法；2、了解制備原理及各種試劑的作用。實驗原理堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物質，通過離心除去。細菌質粒是一類雙鏈、閉環
堿裂解法提取質粒DNA
實驗概要本實驗介紹了堿裂解法提取質粒DNA的實驗原理和操作步驟。實驗原理堿裂解法是一種應用最為廣泛的制備質粒DNA的方法，堿變性抽提質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH值高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大
堿裂解法提取質粒DNA
實驗目的 ? ? ?1、掌握最常用的提取質粒DNA的方法和檢測方法； ? ? ? 2、了解制備原理及各種試劑的作用。 ? ? ?實驗原理 堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物
煮沸裂解法制備質粒DNA實驗——煮沸裂解法大量制備質粒DNA
實驗方法原理經 Triton X-100、溶菌酶和加熱處理可從大量（500 ml ) 細菌培養物中分離質粒 DNA，所獲得的質粒通過柱層析或 CsCl-溴化乙錠梯度離心可進一步純化。試劑、試劑盒抗生素乙醇異丙醇乙酸鈉STETTE溶菌酶儀器、耗材LB、YT 或 Terrific 培養液沸水浴實驗步驟一
煮沸裂解法制備質粒DNA實驗——煮沸裂解法小量制備質粒DNA
這個方法 [ 根據 Holmes 和 Quigley 的方法（1981) 修訂而成 ] 是將細菌懸浮于含有 Triton X-100 和能消化細胞壁的溶菌酶的緩沖液中，然后加熱到 100℃ 使其裂解。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等實驗方法原理經 Triton X-100、溶菌酶和加熱處
SDS裂解法提取質粒DNA實驗
這種溫和的方法（改進自 Godson and Vapnek 1973 ) 在處理大質粒（>15 kb ) 時較堿裂解法和煮沸法好。但溫和的代價是產量低：有相當數量的質粒 DNA 混于細胞渣滓中，在操作的早期步驟中丟失。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理這種溫和的方法（改進自
SDS裂解法提取質粒DNA實驗
實驗方法原理 這種溫和的方法（改進自 Godson and Vapnek 1973 ) 在處理大質粒（>15 kb ) 時較堿裂解法和煮沸法好。但溫和的代價是產量低：有相當數量的質粒 DNA 混于細胞渣滓中，在操作的早期步驟中丟失。試劑、試劑盒 抗生素氯霉素氯仿EDTA乙醇NaClSDSSTETri
煮沸裂解法提取質粒DNA
質粒是存在于細菌染色體外的一個或多個能獨立復制并穩定遺傳的小型環狀雙鏈DNA分子，其分子量一般在0.2-10KD范圍內。由于質粒分子小，便于分離和提取，可以攜帶目的基因進入細菌、動物細胞或植物體內進行擴增與表達。 質粒提取方法即去除 RNA，將質粒與細菌基因組 DNA分開，去除蛋白質及其它雜質
SDS裂解法提取質粒DNA實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這種溫和的方法（改進自 Godson and Vapnek 1973 ) 在處理大質粒（>15 kb ) 時較堿裂解法和煮沸法好。但溫和的代價是產量低：有相當數量的質粒 DNA 混于細胞渣滓中，在操作的早期步驟中丟失。
SDS堿裂解法制備質粒DNA
實驗方法原理 用堿和 SDS 處理可以從小量 ( 1~2 ml）細菌培養物中分離質粒 DNA，所獲得的質粒則可以用電泳或限制性核酸內切酶消化的方法鑒定；經聚乙二醇處理進一步純化后，其可以用做 DNA 測序反應的模板。試劑、試劑盒 堿裂解液抗生素乙酵酚氯仿STETE儀器、耗材 LB、YT 或 Terr
堿裂解法提取質粒dna的原理
堿裂解或堿提取是分子生物學中用于從細菌中分離質粒DNA的方法。方法首先，含有感興趣質粒的細菌被培養，隨后通過離心濃縮細胞物質（包括DNA）至容器底部形成一個沉淀物。上清液被棄去，然后將沉淀物重新懸浮在含有EDTA的生理緩沖液中。EDTA的作用是與二價金屬陽離子如鎂離子和鈣離子結合，這些離子對于DNA
純化DNA實驗_純化質粒（堿裂解法）
實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LB葡萄糖緩沖液乙酸鉀儀器、耗材離心管實驗步驟1. 單個大腸桿菌克隆接種到 2 ml 含適當抗生素的 LB 中。37℃ 劇烈振蕩孵育 5~8 小時。或者可以培養過夜使飽和。2. 倒 1.5 ml 培養液到已作標記的微量離心管中。把剩下的培養液存放在 4℃。3. 在微量離心
質粒DNA大量制備實驗——堿裂解法
用堿和SDS處理可以大規模的細菌培養物中分離質粒DNA，所獲得的質粒則可通過柱層析或CsCl- 溴化乙錠梯度離心進一步純化。了解質粒的特性及其在分子生物學研究中的作用；掌握質粒DNA分離和純化的原理；學習堿裂解法和煮沸法分離質粒DNA的方法。實驗方法原理這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相
堿裂解法提取質粒dna的原理
堿裂解或堿提取是分子生物學中用于從細菌中分離質粒DNA的方法。方法首先，含有感興趣質粒的細菌被培養，隨后通過離心濃縮細胞物質（包括DNA）至容器底部形成一個沉淀物。上清液被棄去，然后將沉淀物重新懸浮在含有EDTA的生理緩沖液中。EDTA的作用是與二價金屬陽離子如鎂離子和鈣離子結合，這些離子對于DNA
堿裂解法提取質粒dna的原理
堿裂解或堿提取是分子生物學中用于從細菌中分離質粒DNA的方法。方法首先，含有感興趣質粒的細菌被培養，隨后通過離心濃縮細胞物質（包括DNA）至容器底部形成一個沉淀物。上清液被棄去，然后將沉淀物重新懸浮在含有EDTA的生理緩沖液中。EDTA的作用是與二價金屬陽離子如鎂離子和鈣離子結合，這些離子對于DNA
堿裂解法提取質粒dna的原理
堿裂解或堿提取是分子生物學中用于從細菌中分離質粒DNA的方法。方法首先，含有感興趣質粒的細菌被培養，隨后通過離心濃縮細胞物質（包括DNA）至容器底部形成一個沉淀物。上清液被棄去，然后將沉淀物重新懸浮在含有EDTA的生理緩沖液中。EDTA的作用是與二價金屬陽離子如鎂離子和鈣離子結合，這些離子對于DNA
SDS堿裂解法制備質粒DNA
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 用堿和 SDS 處理可以從小量 ( 1~2 ml）細菌培養物中分離質粒 DNA，所獲得的質粒則可以用電泳或限制性核酸內切酶消化的方法鑒定；經聚乙二醇處理進一步純化后，其可以用做 DNA 測序反應的模板。
堿裂解法提取質粒dna的原理
堿裂解或堿提取是分子生物學中用于從細菌中分離質粒DNA的方法。方法首先，含有感興趣質粒的細菌被培養，隨后通過離心濃縮細胞物質（包括DNA）至容器底部形成一個沉淀物。上清液被棄去，然后將沉淀物重新懸浮在含有EDTA的生理緩沖液中。EDTA的作用是與二價金屬陽離子如鎂離子和鈣離子結合，這些離子對于DNA
堿裂解法提取質粒dna的原理
堿裂解或堿提取是分子生物學中用于從細菌中分離質粒DNA的方法。方法首先，含有感興趣質粒的細菌被培養，隨后通過離心濃縮細胞物質（包括DNA）至容器底部形成一個沉淀物。上清液被棄去，然后將沉淀物重新懸浮在含有EDTA的生理緩沖液中。EDTA的作用是與二價金屬陽離子如鎂離子和鈣離子結合，這些離子對于DNA
堿裂解法提取質粒dna的原理
堿裂解或堿提取是分子生物學中用于從細菌中分離質粒DNA的方法。方法首先，含有感興趣質粒的細菌被培養，隨后通過離心濃縮細胞物質（包括DNA）至容器底部形成一個沉淀物。上清液被棄去，然后將沉淀物重新懸浮在含有EDTA的生理緩沖液中。EDTA的作用是與二價金屬陽離子如鎂離子和鈣離子結合，這些離子對于DNA
DNA裂解分析實驗_個體核的PI熒光
實驗材料懸浮細胞試劑、試劑盒低滲熒光染料溶液儀器、耗材組織培養板實驗步驟1. 在 96 孔圓底組織培養板中加入 100 μl 懸浮細胞，200 g 離心 5 分鐘。2. 吸出上清，用 250 μl 低滲熒光染料溶液溶解沉淀細胞，用移液管輔助混勻細胞。3. 樣品移至 FACS 微管，旋轉攪拌，冰上避光
DNA裂解分析實驗_個體核的PI熒光
實驗材料懸浮細胞試劑、試劑盒低滲熒光染料溶液儀器、耗材組織培養板實驗步驟1. 在 96 孔圓底組織培養板中加入 100 μl 懸浮細胞，200 g 離心 5 分鐘。2. 吸出上清，用 250 μl 低滲熒光染料溶液溶解沉淀細胞，用移液管輔助混勻細胞。3. 樣品移至 FACS 微管，旋轉攪拌，冰上避光
DNA裂解分析實驗_乙醇固定后PI染色
實驗材料細胞試劑、試劑盒EDTA-PBS洗滌緩沖液乙醇RNA 酶PI 溶液儀器、耗材流式細胞計量術實驗步驟1. 在 5 mmol/L EDTA-PBS 中洗 1X106?細胞，重懸于 300 μl 洗滌緩沖液中。加 700 μl 100% 的冰冷乙醇，滴加，并輕微攪拌。旋轉攪拌混勻。2. 14000
煮沸裂解法制備質粒DNA實驗
煮沸裂解法小量制備質粒DNA 煮沸裂解法大量制備質粒DNA ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 經 Triton X-100、溶菌酶和加熱處理可從小量（1~2 ml )
煮沸裂解法制備質粒DNA實驗
實驗方法原理?經 Triton X-100、溶菌酶和加熱處理可從小量（1~2 ml ) 細菌培養物中分離質粒 DNA 所獲得的質粒則可以用電泳或限制性內切核酸酶消化的方法鑒定；經 PEG 處理進一步純化后，其可以用做 DNA 測序反應的模板。試劑、試劑盒?抗生素乙醇異丙醇乙酸鈉STETTE溶菌酶儀器
質粒DNA的堿裂解法提取與純化
??細菌質粒是一類雙鏈、閉環的DNA，大小范圍從1kb至200kb以上不等。各種質粒都是存在于細胞質中、獨立于細胞染色體之外的自主復制的遺傳成份，通常情況下可持續穩定地處于染色體外的游離狀態，但在一定條件下也會可逆地整合到寄主染色體上，隨著染色體的復制而復制，并通過細胞分裂傳遞到后代。????質粒已