DNA裂解分析實驗_JAM分析
實驗材料細胞試劑、試劑盒胸腺嘧啶脫氧核苷HBSSPBSEDTA儀器、耗材新鮮培養基組織培養板實驗步驟1. 實驗前一天，將細胞接種于新鮮培養基。對數生長期細胞可更好地滲入 [3H]-胸腺嘧啶脫氧核苷。2. 收獲細胞，在新鮮培養基中以 1X106 細胞/ml 重懸，用 5 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脫氧核苷標記 2~4 小時。或者，用 1 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脫氧核苷過夜標記較低密度的細胞。3. 用 HBSS，PBS 或培養基將細胞洗 2 次，在培養基中重懸 0.2X106~1X106 細胞/ml 在開始前確定細胞已被標記。4. 接種細胞于 96 孔平底組織培養板，用推定的凋亡誘導物孵育 5~18 小時。5. 加 EDTA 至終濃度為 5 mmol/L，用合適的 96 孔板細胞收獲儀將細胞收獲至玻璃纖維濾器。6. 在 80℃ 烘箱中 10 分鐘或微波 4 分鐘干燥濾器。7. 在塑料袋中密封濾器，......閱讀全文
DNA裂解分析實驗_JAM分析
實驗材料細胞試劑、試劑盒胸腺嘧啶脫氧核苷HBSSPBSEDTA儀器、耗材新鮮培養基組織培養板實驗步驟1. 實驗前一天，將細胞接種于新鮮培養基。對數生長期細胞可更好地滲入 [3H]-胸腺嘧啶脫氧核苷。2. 收獲細胞，在新鮮培養基中以 1X106?細胞/ml 重懸，用 5 μCi/ml [3H]-胸腺嘧
DNA裂解分析實驗
實驗材料?細胞試劑、試劑盒?溶解緩沖液RNA 酶A T1 混合液蛋白酶 KDNA 加樣緩沖液儀器、耗材?Eppendorf 管移液管瓊脂糖凝膠實驗步驟 1. 將 5X105 細胞移入無菌的 1.5 ml Eppendorf 管中，4℃ 2000 r/min 離心 5 分鐘，棄上清。2. 加入 20
DNA裂解分析實驗
瓊脂糖凝膠電泳 個體核的PI熒光 乙醇固定后PI染色 JAM分析 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
DNA裂解分析實驗
瓊脂糖凝膠電泳 個體核的PI熒光 乙醇固定后PI染色 JAM分析 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
DNA裂解分析實驗_個體核的PI熒光
實驗材料懸浮細胞試劑、試劑盒低滲熒光染料溶液儀器、耗材組織培養板實驗步驟1. 在 96 孔圓底組織培養板中加入 100 μl 懸浮細胞，200 g 離心 5 分鐘。2. 吸出上清，用 250 μl 低滲熒光染料溶液溶解沉淀細胞，用移液管輔助混勻細胞。3. 樣品移至 FACS 微管，旋轉攪拌，冰上避光
DNA裂解分析實驗_個體核的PI熒光
實驗材料懸浮細胞試劑、試劑盒低滲熒光染料溶液儀器、耗材組織培養板實驗步驟1. 在 96 孔圓底組織培養板中加入 100 μl 懸浮細胞，200 g 離心 5 分鐘。2. 吸出上清，用 250 μl 低滲熒光染料溶液溶解沉淀細胞，用移液管輔助混勻細胞。3. 樣品移至 FACS 微管，旋轉攪拌，冰上避光
DNA裂解分析實驗_乙醇固定后PI染色
實驗材料細胞試劑、試劑盒EDTA-PBS洗滌緩沖液乙醇RNA 酶PI 溶液儀器、耗材流式細胞計量術實驗步驟1. 在 5 mmol/L EDTA-PBS 中洗 1X106?細胞，重懸于 300 μl 洗滌緩沖液中。加 700 μl 100% 的冰冷乙醇，滴加，并輕微攪拌。旋轉攪拌混勻。2. 14000
DNA裂解分析實驗_瓊脂糖凝膠電泳
實驗材料細胞試劑、試劑盒溶解緩沖液RNA 酶A T1 混合液蛋白酶 KDNA 加樣緩沖液儀器、耗材Eppendorf 管移液管瓊脂糖凝膠實驗步驟1. 將 5X105?細胞移入無菌的 1.5 ml Eppendorf 管中，4℃ 2000 r/min 離心 5 分鐘，棄上清。2. 加入 20 μl 溶
用于激酶分析的細胞裂解實驗
實驗材料培養細胞（貼壁貼壁細胞在100 mm 組織培養板中約 70% 生長成片／懸浮細胞濃度 為 10^6 細胞／ml）試劑、試劑盒PBS裂解緩沖液蛋白酶抑制劑儲存液儀器、耗材微量離心機實驗步驟1. 用預冷的 PBS 洗細胞 2 次，將最后的洗液盡可能吸盡。2. 加入 0.75 ml 裂解緩沖液重懸
用于激酶分析的細胞裂解實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 培養細胞（貼壁貼壁細胞在100 mm 組織培養板中約 7
用于激酶分析的細胞裂解實驗
實驗方法原理 實驗材料 培養細胞（貼壁貼壁細胞在100 mm 組織培養板中約 70% 生長成片／懸浮細胞濃度 為 10^6 細胞／ml）試劑、試劑盒 PBS裂解緩沖液蛋白酶抑制劑儲存液儀器、耗材 微量離心機實驗步驟 1. 用預冷的 PBS 洗細胞 2 次，將最后的洗液盡可能吸盡。2. 加入 0.
堿裂解法提取質粒實驗技術分析
堿裂解法提取質粒實驗技術分析[實驗原理]羊源性成分核酸檢測PCR-熒光探針試劑盒堿裂解法提取質粒是根據共價閉合環狀質粒DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們。在pH值介于12.0~12.5這個狹窄的范圍內,線性的DNA雙螺旋結構解開而被變性,盡管在這樣的條件下,共價閉環質粒DNA的氫鍵會
SDS裂解法提取質粒DNA實驗
實驗方法原理 這種溫和的方法（改進自 Godson and Vapnek 1973 ) 在處理大質粒（>15 kb ) 時較堿裂解法和煮沸法好。但溫和的代價是產量低：有相當數量的質粒 DNA 混于細胞渣滓中，在操作的早期步驟中丟失。試劑、試劑盒 抗生素氯霉素氯仿EDTA乙醇NaClSDSSTETri
SDS裂解法提取質粒DNA實驗
這種溫和的方法（改進自 Godson and Vapnek 1973 ) 在處理大質粒（>15 kb ) 時較堿裂解法和煮沸法好。但溫和的代價是產量低：有相當數量的質粒 DNA 混于細胞渣滓中，在操作的早期步驟中丟失。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理這種溫和的方法（改進自
SDS裂解法提取質粒DNA實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 這種溫和的方法（改進自 Godson and Vapnek 1973 ) 在處理大質粒（>15 kb ) 時較堿裂解法和煮沸法好。但溫和的代價是產量低：有相當數量的質粒 DNA 混于細胞渣滓中，在操作的早期步驟中丟失。
λ噬菌體分離物的快速分析(從平板裂解物中純化λDNA)實驗
對有希望的基因組或 cDNA 克隆的分析，通常開始于用限制酶消化 λ 噬菌體 DNA 的小量制備物，并對消化產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析。所獲得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成（由噬菌體 SP6、T3 和 T7 編碼的依賴于 DNA 的 RNA 聚合酶來完成）的模板以及 PCR 的模板。本
λ噬菌體分離物的快速分析(從平板裂解物中純化λDNA)實驗
實驗方法原理 對有希望的基因組或 cDNA 克隆的分析，通常開始于用限制酶消化 λ 噬菌體 DNA 的小量制備物，并對消化產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析。所獲得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成（由噬菌體 SP6、T3 和 T7 編碼的依賴于 DNA 的 RNA 聚合酶來完成）的模板以
λ噬菌體分離物的快速分析(從平板裂解物中純化λDNA)實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 對有希望的基因組或 cDNA 克隆的分析，通常開始于用限制酶消化 λ 噬菌體 DNA 的小量制備物，并對消化產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析。所獲得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成（由噬菌體 SP6、T3 和 T7
純化DNA實驗_純化質粒（堿裂解法）
實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LB葡萄糖緩沖液乙酸鉀儀器、耗材離心管實驗步驟1. 單個大腸桿菌克隆接種到 2 ml 含適當抗生素的 LB 中。37℃ 劇烈振蕩孵育 5~8 小時。或者可以培養過夜使飽和。2. 倒 1.5 ml 培養液到已作標記的微量離心管中。把剩下的培養液存放在 4℃。3. 在微量離心
質粒DNA大量制備實驗——堿裂解法
用堿和SDS處理可以大規模的細菌培養物中分離質粒DNA，所獲得的質粒則可通過柱層析或CsCl- 溴化乙錠梯度離心進一步純化。了解質粒的特性及其在分子生物學研究中的作用；掌握質粒DNA分離和純化的原理；學習堿裂解法和煮沸法分離質粒DNA的方法。實驗方法原理這一方案科能是最常用的質粒制備方法，該法不僅相
煮沸裂解法制備質粒DNA實驗——煮沸裂解法大量制備質粒DNA
實驗方法原理經 Triton X-100、溶菌酶和加熱處理可從大量（500 ml ) 細菌培養物中分離質粒 DNA，所獲得的質粒通過柱層析或 CsCl-溴化乙錠梯度離心可進一步純化。試劑、試劑盒抗生素乙醇異丙醇乙酸鈉STETTE溶菌酶儀器、耗材LB、YT 或 Terrific 培養液沸水浴實驗步驟一
煮沸裂解法制備質粒DNA實驗——煮沸裂解法小量制備質粒DNA
這個方法 [ 根據 Holmes 和 Quigley 的方法（1981) 修訂而成 ] 是將細菌懸浮于含有 Triton X-100 和能消化細胞壁的溶菌酶的緩沖液中，然后加熱到 100℃ 使其裂解。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等實驗方法原理經 Triton X-100、溶菌酶和加熱處
DNA印跡雜交分析實驗
實驗方法原理?本方案適合于用100~1 000 bp 長的放射性標記的DNA探針對Southern轉印、斑點及狹線印跡進行雜交分析。實驗材料?DNA試劑、試劑盒?SDSSSC儀器、耗材?水浴鍋培養箱實驗步驟 ? 用6×SSC潤濕帶有固定了的DNA的膜。2.? 將膜的DNA面朝上置于雜交管中，ATP溶
DNA－酶－I－足跡分析實驗
DNA 酶 I 足跡分析實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 32P-標記 DNA 酶 I 足跡探針 酚 氯仿
DNA－酶－I－足跡分析實驗
試劑、試劑盒 32P-標記 DNA 酶 I 足跡探針酚 氯仿乙醇聚乙烯醇競爭 DNA 緩沖液 Z'(或緩沖液 Ze）DNA 酶 IMgCl2(10 mmol L) CaCl2(5 mmol L)DNA 酶 I 終止液蛋白酶 K甲酰胺加樣緩沖液實驗步驟 材料32P-標記 DNA 酶 I 足跡探
DNA印跡雜交分析實驗
放射標記法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案適合于用100~1 000 bp 長的放射性標記的DNA探針對Southern轉印、斑點及狹線印跡進行雜交分析。 ?
DNA－酶－I－足跡分析實驗
試劑、試劑盒32P-標記 DNA 酶 I 足跡探針酚 氯仿乙醇聚乙烯醇競爭 DNA 緩沖液Z'(或緩沖液 Ze）DNA 酶 IMgCl2(10 mmol L) CaCl2(5 mmol L)DNA 酶 I 終止液蛋白酶 K甲酰胺加樣緩沖液實驗步驟材料32P-標記 DNA 酶 I 足跡探針酚/
煮沸裂解法制備質粒DNA實驗
煮沸裂解法小量制備質粒DNA 煮沸裂解法大量制備質粒DNA ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 經 Triton X-100、溶菌酶和加熱處理可從小量（1~2 ml )
煮沸裂解法制備質粒DNA實驗
實驗方法原理?經 Triton X-100、溶菌酶和加熱處理可從小量（1~2 ml ) 細菌培養物中分離質粒 DNA 所獲得的質粒則可以用電泳或限制性內切核酸酶消化的方法鑒定；經 PEG 處理進一步純化后，其可以用做 DNA 測序反應的模板。試劑、試劑盒?抗生素乙醇異丙醇乙酸鈉STETTE溶菌酶儀器
JAM檢測技術檢測原理和實驗方法
JAM檢測技術是用于測定細胞死亡或凋亡的方法，如51Cr稀放法事基于細胞死亡往往伴隨有細胞膜破裂及細胞質的釋放，用51Cr或125I標記相關的靶細胞，與效應細胞共培養一定時間后，測定一定體積的培養上清中的放射性計數，以反映細胞損傷情況。而人們發現，細胞死亡的早期反應，細胞內DNA被酶裂解成180kb