高壓液相色譜常見問題
（一）渦流擴散（Eddy diffusion）流動相碰到較大的固體顆粒，就像流水碰到石頭一樣產生渦流。如果柱裝填得不均勻，有的部分松散或有細溝，則流動相的速度就快；有的部位結塊或裝直緊密則流就慢，多條流路有快有慢，就使區帶變寬。因此，固相載體的顆粒要小而均勻，裝柱要松緊均一，這樣渦流擴散小，柱效率高。（二）分子擴散（Molecular diffusion）分子擴散就是物質分子由濃度高的區域向濃度低的區域運動，也稱縱向分子擴散。要減少分子擴散就要采用小而均勻的固相顆粒裝柱。同時在操作時，如果流速太慢，被分離物質停留時間長，則擴散嚴重。（三）質量轉移（Mass transfer）被分離物質要在流動相與固定相中平衡，這樣才能形成較窄的區帶。在液相色譜中，溶質分子要在兩個液相之間進行分配，或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的時間。當流速快時，轉移速度慢，來不及達到平衡動相就向前移，這各物質的非平衡移動，使區帶變寬。（四）動相流速......閱讀全文
高壓液相色譜系統的技術指標
高壓液相色譜系統是一種用于環境科學技術及資源科學技術領域的分析儀器，于2015年12月02日啟用。 技術指標 流速范圍 0.01~100ml/min 流速精度 ±0.5% 壓力范圍 0~300bar 最小梯度調節 0.10% 多波長在線掃描 200~800nm全程掃描，CCD陣列檢測器 電導
高壓液相色譜四元低壓梯度泵系統
高壓液相色譜-四元低壓梯度泵系統是一種用于基礎醫學、臨床醫學、藥學、中醫學與中藥學領域的分析儀器，于2008年12月1日啟用。 技術指標 術參數 流速 0.001-20.000ml/min 壓力 Stainless Steel：0-6,000psi 脈動 ≤0.8%@1ml/min and
高壓液相色譜HPLC發展概況、特點及分類
一、液相色譜理論發展簡況色譜法的分離原理是：溶于流動相(mobilephase)中的各組分經過固定相時，由于與固定相(stationaryphase)發生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。色譜法最早是由俄國
變性－高壓液相色譜分析的介紹
變性 -高壓液相色譜(denaturing high -performance liquid chromatography,DHPLC) 是利用DNA構型改變檢測基因突變和遺傳多態性的方法之一，其可以檢測單核苷酸多態和可遺傳的突變。實驗主要過程包括PCR 擴增待測和正常DNA樣品，將擴增產物變性
液相色譜柱使用中常見問題解析
1、對于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時候應該怎樣進行活化及維護？為什么要這樣做？ 答：新柱活化，實際上是一個平衡的過程，除了用流動相平衡外，有時候還必須用所測樣品對新柱進行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽，尤其重要。因為分子量高的物質分子，擴散速度慢，平衡所需時間也相應較長。具體平衡方
液相色譜柱使用中常見問題解析
1、對于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時候應該怎樣進行活化及維護？為什么要這樣做？ 答：新柱活化，實際上是一個平衡的過程，除了用流動相平衡外，有時候還必須用所測樣品對新柱進行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽，尤其重要。因為分子量高的物質分子，擴散速度慢，平衡所需時間也相應較長。具體平衡方式也
液相色譜柱使用中常見問題解析
1、對于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時候應該怎樣進行活化及維護？為什么要這樣做？ 答：新柱活化，實際上是一個平衡的過程，除了用流動相平衡外，有時候還必須用所測樣品對新柱進行平衡，特別是測定分子量比較高的多肽，尤其重要。因為分子量高的物質分子，擴散速度慢，平衡所需時間也相應較長。具體平衡方式
液相色譜前沿峰和拖尾峰常見問題分析
? ? ? 前沿峰 1.柱溫低--－不明白 2.樣品溶劑使用不當----－當樣品溶劑的洗脫能力大大強于流動相時會出現前沿峰。例如，在反相色譜中用已腈做樣品溶劑，而流動相的洗脫力較弱時會出現前沿峰。 3.柱過載--------超載，未被保留的樣品在正常出峰時間前陸續出來，形成前沿峰 4.在大
液相色譜柱常見問題及解決方案
1.液相色譜柱柱壓高 ????壓力單位換算：1bar＝0.987大氣壓＝14.503psi＝0.1MPa＝1.0197kg/cm2?（1）新柱（未進過樣品或只進過柱效測試標樣）壓力高：?以原廠報告上完全一樣的條件下測試比較，若壓力在報告壓力值上下浮動200-300psi以內，可視為正常范圍；若高于出
液相色譜柱常見問題及解決方案
1.液相色譜柱柱壓高 ????壓力單位換算：1bar＝0.987大氣壓＝14.503psi＝0.1MPa＝1.0197kg/cm2?（1）新柱（未進過樣品或只進過柱效測試標樣）壓力高：?以原廠報告上完全一樣的條件下測試比較，若壓力在報告壓力值上下浮動200-300psi以內，可視為正常范圍；若高于出
液相色譜譜圖常見問題解析匯總
你在液相色譜使用過程中是不是會遇到各種各樣的問題，別擔心，本文針對色譜圖的異常問題進行了整理，并給出解決方法，供大家參考。一個峰或幾個峰是負峰解決方法：流動相吸收本底高；進樣過程中進入空氣；樣品組分的吸收低于流動相。?所有峰均為負峰解決方法：信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒；光學裝置尚未達到平衡
蛋白分離色譜與高壓制備液相色譜的異同討論
快速蛋白液相色譜(FPLC)、中壓液相色譜(MPLC)、低壓液相色譜(LPLC)是近年來從HPLC基礎上發展的新型色譜技術，其中FPLC能以極快的速度把復雜混合物分離，可在短時間內大量純化樣品，具有柱容量大、回收效率高及生物大分子不易失活等特性，在生命科學研究及藥物生產上使用越來越廣泛。(1)FP
蛋白分離色譜與高壓制備液相色譜的異同討論
快速蛋白制備液相色譜(FPLC)、中壓制備液相色譜(MPLC)、低壓制備液相色譜(LPLC)是近年來從HPLC基礎上發展的新型色譜技術，其中FPLC能以極快的速度把復雜混合物分離，可在短時間內大量純化樣品，具有柱容量大、回收效率高及生物大分子不易失活等特性，在生命科學研究及藥物生產上使用越來越廣泛。
高壓液相色譜HPLC常見故障及排除方法
癥狀 (一)保留時間變化 可能的原因:解決方法 1.柱溫變化:柱恒溫 2.等度與梯度間未能充分平衡:至少用10倍柱體積的流動相平衡柱 3.緩沖液容量不夠:用>25mmol/L的緩沖液 4.柱污染:每天沖洗柱 5.柱內條件變化:穩定進樣條件,調節流動相
簡述高壓或中壓制備型液相色譜流速
方法的檢出限和定量限是有區別的 3倍信噪比是檢出限 10倍信噪比是定量限 可以簡單的這樣來理解，檢出限是方法能測出該物質時的最低濃度。定量限是方法能準確定量出該物質時最低的濃度。
高壓液相色譜系統的主要功能
主要功能 適用于實驗級的純化系統， 可廣泛適用于重組蛋白、胰島素、抗體、疫苗等生物大分子的分離純化制備。快速分離肽、核酸、蛋白和天然產物的全新純化系統，其配套的色譜柱，填料和方法模板可以進行凝膠過濾、離子交換、疏水層析、反向層析和親和層析，適合從一般科研檢驗到藥物制備或臨床分析應用。 搭配的控
液相色譜柱常見問題解決方案
?1.?????柱壓高?壓力單位換算：1bar＝0.987大氣壓＝14.503psi＝0.1MPa＝1.0197kg/cm2（1）新柱（未進過樣品或只進過柱效測試標樣）壓力高：以原廠報告上完全一樣的條件下測試比較，若壓力在報告壓力值上下浮動200-300psi以內，可視為正常范圍；若高于出廠報告壓力
液相色譜柱常見問題解決方案
1. 柱壓高 壓力單位換算：1bar＝0.987大氣壓＝14.503psi＝0.1MPa＝1.0197kg/cm2 （1）新柱（未進過樣品或只進過柱效測試標樣）壓力高： 以原廠報告上完全一樣的條件下測試比較，若壓力在報告壓力值上下浮動200-300psi以內，可視為正常范圍；若高于出廠報告
液相色譜柱常見問題分析與解決方案
1.使用一段時間后柱壓過高： 解決方案：首先查看是否HPLC系統原因，排除系統原因后，原因基本是由于實驗過程中雜質在柱中的累積。盡量完善操作條件，做完樣品后要及時沖洗干凈，如緩沖鹽的流動相一定要用高比例的水溶液(如，90％)沖洗完全后再用有機相保存。 2.篩板堵塞與柱頭塌陷： 解決方法：如
液相色譜柱常見問題分析與解決方案
1.使用一段時間后柱壓過高： 解決方案：首先查看是否HPLC系統原因，排除系統原因后，原因基本是由于實驗過程中雜質在柱中的累積。盡量完善操作條件，做完樣品后要及時沖洗干凈，如緩沖鹽的流動相一定要用高比例的水溶液(如，90％)沖洗完全后再用有機相保存。 2.篩板堵塞與柱頭塌陷： 解決方法：如
色譜柱的維護與保養在高壓液相色譜中的應用
色譜作為一種分離技術與方法，自本世紀初起已經有100多年的歷史了，現在已經成為分析化學學科中的一個重要的分支。在人類進入新時代之際，人們面臨著在信息科學、生命科學、材料科學、環境科學等領域的快速發展的挑戰，在這些領域人才的需求成為國家高度發展的至關重要的因素。而色譜技術是生命科學、材料科學、環
色譜柱的維護與保養在高壓液相色譜中的應用
色譜作為一種分離技術與方法，自本世紀初起已經有100多年的歷史了，現在已經成為分析化學學科中的一個重要的分支。在人類進入新時代之際，人們面臨著在信息科學、生命科學、材料科學、環境科學等領域的快速發展的挑戰，在這些領域人才的需求成為國家高度發展的至關重要的因素。而色譜技術是生命科學、材料科學、環境科學
色譜分析技術（高壓液相色譜、親和色譜法和吸...（二）
二、易出現的問題（一）渦流擴散（Eddy diffusion）流動相碰到較大的固體顆粒，就像流水碰到石頭一樣產生渦流。如果柱裝填得不均勻，有的部分松散或有細溝，則流動相的速度就快；有的部位結塊或裝直緊密則流就慢，多條流路有快有慢，就使區帶變寬。因此，固相載體的顆粒要小而均勻，裝柱要松緊均一，這樣渦流
色譜分析技術（高壓液相色譜、親和色譜法和吸...（一）
色譜分析技術（高壓液相色譜、親和色譜法和吸附色譜法）高壓液相色譜Martin 和 Synge在1941年就提出高效相色譜的設想，然而直到六十年代后期，由于各種技術的發展，高效液相色譜才付諸實現。這種色譜技術曾被稱為高速液相色譜（HighSpeed Liquid Chromatography）
關于高效液相色譜的設備高壓泵的介紹
HPLC使用的色譜柱是很細的(1~6 mm)，所用固定相的粒度也非常小（幾μm到幾十μm)，所以流動相在柱中流動受到的阻力很大，在常壓下，流動相流速十分緩慢，柱效低且費時。為了達到快速、高效分離，必須給流動相施加很大的壓力，以加快其在柱中的流動速度。為此，須用高壓泵進行高壓輸液。高壓、高速是高效
氣相色譜PK液相色譜
氣相和液相是有機檢測的兩大基本儀器，占據著有機實驗室的統治地位，雖然同做有機檢測，但就兩個儀器本身也有著較大區別，小析姐從以下5個方面進行了比較。氣相色譜是二十世紀五十年代出現的一項重大科學技術成就。這是一種新的分離、分析技術，它在工業、農業、國防、建設、科學研究中都得到了廣泛應用。同為色譜技術之一
氣相色譜PK液相色譜
氣相和液相是有機檢測的兩大基本儀器，占據著有機實驗室的統治地位，雖然同做有機檢測，但就兩個儀器本身也有著較大區別，小析姐從以下5個方面進行了比較。 氣相色譜是二十世紀五十年代出現的一項重大科學技術成就。這是一種新的分離、分析技術，它在工業、農業、國防、建設、科學研究中都得到了廣泛應用。同為色譜技
高效液相色譜的常見問題比如說基線不穩
1、柱溫波動。（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。） 1、控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器圖2、流動相不均勻。（流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。） 2、使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和
高效液相色譜的常見問題比如說基線不穩
1、柱溫波動。（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。） 1、控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器圖2、流動相不均勻。（流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。） 2、使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和
高效液相色譜系統中高壓恒流泵的保養
1.高壓恒流泵為整個色譜系統提供了穩定、平衡的流動相流量保證了系統的穩定運行和重現性高壓輸液泵由步進電機和柱塞組成，經過長時間的高壓運行，泵的內部結構逐漸磨損。當流速增大時，梯度應增大，好一次增加0.2mL/min，當壓力穩定時再增大，直至達到所需速度為止。2.在特殊情況下，可以去除過濾頭以確定其是