單層生長細胞的免疫熒光標記實驗
實驗材料 單層細胞試劑、試劑盒 PBS多聚甲醛甲醇抗體儀器、耗材 離心機水浴鍋培養箱實驗步驟 1. 置生長成片的單層細胞于冰上冷卻，吸去培養液并以4℃PBS洗滌。吸去PBS。2. 如欲研究細胞表面抗原，則以2%PFA于冰上面定30 min。如為細胞質抗原，則可用含0.1% Triton X-100的2%PFA于冰上固定30 min，或以100%甲醇在普通冰箱的結凍室（-10~-20℃）固定15 min。 3. 吸去固定液，用4℃PBS洗2次（毎次5 min）。稀釋的笫一抗體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min。 4. 加第一抗體于培養皿中，使其恰好覆蓋細胞，4℃溫育1 h，然后用4℃PBS洗4次（每次5 min）。 5. 稀釋的笫二抗體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min。 6. 加第二......閱讀全文
單層培養細胞更換培養液實驗
實驗方法原理以肉眼和倒置顯微鏡觀察培養物，若有指征，如PH降低，則去除舊培養基加如新鮮培養基，再重新放入溫箱培養。實驗步驟材料無菌培養的細胞：A549細胞，以2×10^4ml接種到25cm2培養瓶后4天……4瓶生長培養液……………………………………………………100ml例如：Eagle1×MEM含H
標記裂解培養細胞實驗
基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對貼壁細胞）基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對非貼壁細胞）SDS煮沸法裂解細胞實驗方法原理實驗材料待標記的培養細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒37℃標記培養液 ? ? ?
光鏡下雙/多重免疫標記實驗——免疫熒光雙重標記TRITCFITC
雙重或多重標記是利用免疫學和細胞化學原理，在同一張切片上同時采用或先后采用不同顏色的熒光色素或酶促產物，或采用不同直徑大小顆粒膠體金來原位標記兩種或兩種以上抗原-抗體復合物，達到在同一細胞或亞細胞水平顯示不同抗原成分（定性、定位、定撤），分析不同抗原成分相互間功能的增消關系，操作遵循的原則與要求同單
免疫熒光標記技術
．原理免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。直接法：將標記
細胞生長曲線實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數的常用方法，是判定細胞活力的重要指標。一般細胞傳代之后，經過短暫的懸浮然后貼壁，隨后度過長短不同的潛伏期，即進入大量分裂的指數生長期。為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化，典型的生長曲線可分為
細胞生長曲線實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數的常用方法，是判定細胞活力的重要指標。一般細胞傳代之后，經過短暫的懸浮然后貼壁，隨后度過長短不同的潛伏期，即進入大量分裂的指數生長期。為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化，典型的生長曲線可分為
細胞生長曲線實驗
細胞生長曲線可應用于：（1）測定細胞絕對生長數；（2）判定細胞活力。實驗方法原理細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數的常用方法，是判定細胞活力的重要指標。一般細胞傳代之后，經過短暫的懸浮然后貼壁，隨后度過長短不同的潛伏期，即進入大量分裂的指數生長期。為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化，典型的生長曲
細胞生長曲線實驗
實驗方法原理 細胞生長曲線是觀察細胞生長基本規律的重要方法。只有具備自身穩定生長特性的細胞才適合在觀察細胞生長變化的實驗中應用。因而在細胞系細胞和非建系細胞生長特性觀察中，生長曲線的測定是最為基本的指標。細胞生長曲線的測定一般可利用細胞計數法進行。實驗材料 細胞試劑、試劑盒 D-Hanks液牛血清R
單層細胞的傳代
實驗方法原理去除培養基，加人胰蛋白酶短暫作用，孵育，以培養基分散細胞，計數，稀釋并再接種。實驗材料A549細胞WI-38MRC-5胰蛋白酶D-PBS試劑、試劑盒70%乙醇噴壺儀器、耗材生長培養基吸管離心管培養瓶移液器吸耳球吸水紙巾吸管桶抗乙醇記號筆血細胞計數板實驗步驟1. 準備超凈工作臺，將試劑及材
單層細胞的傳代
實驗方法原理去除培養基，加人胰蛋白酶短暫作用，孵育，以培養基分散細胞，計數，稀釋并再接種。實驗材料A549細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?WI-38 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
單層細胞的傳代
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 去除培養基，加人胰蛋白酶短暫作用，孵育，以培養基分散細胞，計數，稀釋并再接種。 實驗材料 A549細胞 WI-38
單層細胞的傳代
實驗方法原理 去除培養基，加人胰蛋白酶短暫作用，孵育，以培養基分散細胞，計數，稀釋并再接種。實驗材料 A549細胞WI-38MRC-5胰蛋白酶D-PBS試劑、試劑盒 70%乙醇噴壺儀器、耗材 生長培養基吸管離心管培養瓶移液器吸耳球吸水紙巾吸管桶抗乙醇記號筆血細胞計數板實驗步驟 1. 準備超凈工作臺，
免疫熒光實驗方法1
免疫熒光技術是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。它是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質和定位，以及利用定量技術
免疫熒光組織（細胞）化學技術——熒光素及其標記抗...2
免疫熒光組織（細胞）化學技術——熒光素及其標記抗體的方法 2P3（2）Chadwick氏法?試劑和材料：抗體球蛋白溶液、異硫氰酸熒光素、3%重碳酸鈉水溶液、0.01 mol/L pH8.0磷酸鹽緩沖鹽水、1%硫柳汞、離心機及離心管、三角燒瓶(25 ml)、冰槽、無菌吸管及毛細滴管、燒杯(500 ml
免疫熒光組織（細胞）化學技術——熒光素及其標記抗...1
制備熒光抗體是免疫熒光組織化學的重要技術之一，制備特異性強和高效價的熒光抗體必須選用高質量的熒光素和高效價的抗體。?一、熒光素?熒光是指一個分子或原子吸收了給予的能量后即刻引起發光，停止能量供給，發光也瞬時停止。可以產生明亮熒光的染料物質，稱熒光素。目前主要常用于標記抗體的熒光素如下：?1、異硫氰酸
免疫熒光標記技術的原理
免疫熒光標記技術（immunofluorescence technique）是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素，當與其相對應的抗原或抗體起反應時，在形成的復合物上就帶有一定量的熒光素，在熒光顯微鏡下就可以看見發出熒光的抗原抗體結合部位，檢測出抗原或抗體。
用[32P]磷酸標記細胞實驗_標記懸浮培養的HeLa細胞
實驗材料細胞試劑、試劑盒磷酸儀器、耗材無磷酸培養基實驗步驟1. 培養細胞至對數期，600 g 離心 5 分鐘。2. 棄上清，用無磷酸培養基懸浮細胞。3. 培養細胞 3~4 小時以耗盡它們的磷酸儲備。4. 再次離心，棄上清，用無磷酸培養基懸浮，加?32P 磷酸鹽至 20 μCi/ml 培養液，培養 1
細胞爬片免疫熒光實驗步驟
第一天：1. 在培養板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；2.?用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室溫通透20min（細胞膜上表達的抗原省略此步驟）；4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min
方案－13.1－單層培養細胞更換培養液實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 以肉眼和倒置顯微鏡觀察培養物，若有指征，如PH降低，則去除舊培養基加如新鮮培養基，再重新放入溫箱培養。 實驗步驟 材料無菌培養的細胞：A549
光鏡下雙/多重免疫標記實驗——雙重免疫熒光染色
實驗步驟1. 古茲菲德-雅各氏病（CJD）病人的尸解腦組織，4％ 中性甲醛固定，石蠟包埋，連續切片，厚 5 μm（貼片前的載玻片應預涂不含有熒光色素的黏合劑）。2. 常規脫蠟，水化。3. 抗原修復（檸槺酸鹽緩沖液 pH 6.0 中，高壓滅菌器加熱 100℃，20 min）及 96％ 甲酸孵育 2 m
免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗_單層培養的細胞的裂解
實驗方法原理培養的動物細胞一般使用溫和去垢劑來裂解。如果低濃度的去垢劑就能引起細胞的充分裂解（如1%NP-40或1%TritonX-100)，那么這對目標蛋白的影響可能比勻漿方法更溫和。去垢劑的選擇必須根據免疫沉淀所用的抗體的識別表位的性質來決定。實驗材料單層細胞或懸浮細胞試劑、試劑盒裂解緩沖液PB
LSCM冷凍組織切片的免疫熒光標記
冷凍組織切片的免疫熒光標記?將冷凍組織切片從?-80℃?冰箱中取出，室溫放置?10 min，待切片回溫并干燥，浸于?PBS?中?10 min洗去OCT，可以無需?Triton?處理，即可進行免疫熒光抗體標記，操作步驟與培養細胞反應方法相同。反應在避光濕盒中進行，反應結束時用無熒光封固劑封片，4℃保存
免疫熒光標記為什么不直接標記一抗而標記二抗
因為一種一抗只識別一種底物，如果每種一抗都需要熒光標記，那這樣成本很高。而二抗既可以和一抗結合，又帶有可以被檢測出的標記（如帶熒光、放射性、化學發光或顯色基團），作用是檢測一抗，提高了通用性。一抗是針對抗原的抗體，二抗是針對一抗的抗體，即抗體也可以充當抗原刺激機體產生抗體。一抗二抗都是一種可以特異結
細胞技術專題：細胞生長曲線實驗
細胞生長曲線是測定細胞絕對生長數的常用方法，是判定細胞活力的重要指標。一般細胞傳代之后，經過短暫的懸浮然后貼壁，隨后度過長短不同的潛伏期，即進入大量分裂的指數生長期。為了準確描述整個過程中細胞數目的動態變化，典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期，斜率較大的指數生長期，呈平臺狀的平頂期及退化衰亡4個部
32－P－標記裂解培養細胞實驗
基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對貼壁細胞） 基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對非貼壁細胞） SDS煮沸法裂解細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
靶細胞殺傷實驗：AnnexiV標記法
正常細胞的磷酯酰絲氨（phosphatidylserine，PS）位于細胞膜內表面，細胞凋亡時翻轉露于膜外側，可與annexinV高親合力結合。研究發現PS外翻為細胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的釋放。將效應細胞與靶細胞充分共育后，用PE結合的效應細胞特異性單克隆抗體（如CD
單個神經細胞標記實驗
實驗方法原理本例所用技術和結果引自Bishop和King(1982)，在該文獻中也可找到更詳細的技術指導（也可參考Kitai and Bishop 1981)。實驗材料貓的小腦 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑
單個神經細胞標記實驗
用辣根過氧化物酶對單個Purkmje細胞進行細胞內標記實驗實驗方法原理本例所用技術和結果引自Bishop和King(1982)，在該文獻中也可找到更詳細的技術指導（也可參考Kitai and Bishop 1981)。實驗材料貓的小腦試劑、試劑盒利多卡因Karnovsky 型固定液甲酚紫儀器、耗材微
單個神經細胞標記實驗
用辣根過氧化物酶對單個Purkmje細胞進行細胞內標記實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本例所用技術和結果引自Bishop和King(1982)，在該文獻中也可找到更詳細的
32－P－標記裂解培養細胞實驗
實驗方法原理 實驗材料 待標記的培養細胞試劑、試劑盒 37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡鹽水(TBS) ／磷酸鹽平衡鹽水(PBS)溫和裂解緩沖液／RIPA 裂解緩沖液儀器、耗材 樹脂玻璃擋板(1 in 厚)取液器吸頭樹脂玻璃盒37℃微量離心管一次性