32P標記裂解培養細胞實驗
實驗方法原理 實驗材料 待標記的培養細胞試劑、試劑盒 37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡鹽水(TBS) ／磷酸鹽平衡鹽水(PBS)溫和裂解緩沖液／RIPA 裂解緩沖液儀器、耗材 樹脂玻璃擋板(1 in 厚)取液器吸頭樹脂玻璃盒37℃微量離心管一次性吸管 橡皮細胞刮子Sorvall 冷凍離心機(或其他)樹脂玻璃薄板／4℃ 樹脂玻璃管架實驗步驟 實驗試劑儀器的具體要求見「其他」。1. 培養待標記的細胞至適當的生長期。生長旺盛的細胞中磷酸鹽轉運達到最高峰，除非研究靜止期細胞的蛋白質磷酸化，一般待標記的細胞生長密度不要達到匯片，標記前 3～18 h 換新鮮的培養液培養將有利于標記。2. 吸去培養液，用 37℃ 的含血清不加標記物的標記培養液洗盡殘存的含磷酸鹽的培養液，吸盡該培養液。3. 加入預熱的標記培養液，加入量為：（0.5～1 ml）/35 mm 培養皿，（1～2 ml）/50 m......閱讀全文
32－P－標記裂解培養細胞實驗
基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對貼壁細胞） 基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對非貼壁細胞） SDS煮沸法裂解細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
32－P－標記裂解培養細胞實驗
實驗方法原理 實驗材料 待標記的培養細胞試劑、試劑盒 37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡鹽水(TBS) ／磷酸鹽平衡鹽水(PBS)溫和裂解緩沖液／RIPA 裂解緩沖液儀器、耗材 樹脂玻璃擋板(1 in 厚)取液器吸頭樹脂玻璃盒37℃微量離心管一次性
32－P－標記裂解培養細胞實驗——SDS煮沸法裂解細胞
實驗材料待標記的培養細胞固相化金黃色葡萄球菌（可選）試劑、試劑盒37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡鹽水(TBS) ／磷酸鹽平衡鹽水(PBS)SDS裂解緩沖液RIPA 校正液免疫沉淀洗液儀器、耗材橡皮細胞刮子Sorvall 冷凍離心機(或其他)樹脂玻
用[32P]磷酸標記細胞實驗_標記單層培養細胞
實驗材料HeLa 細胞試劑、試劑盒FCS磷酸鹽儀器、耗材無磷酸培養基實驗步驟1. 在含 10% FCS 的培養基中單層培養 HeLa 細胞至鋪滿 50% 左右。2. 倒掉完全培養基，加入新鮮的無磷酸培養基，培養 3~4 小時以耗盡胞內的磷酸儲備。3. 換新鮮的無磷酸培養基，并加?32P 磷酸鹽至 2
32P標記裂解培養細胞—溫和去垢劑裂解法（對貼壁細胞）
本實驗介紹了用?32P 標記和裂解培養細胞，以用于蛋白質免疫沉淀分析。這種方法適用以?32P 標記任何細胞成分，可用于各種貼壁或不貼壁培養的昆蟲、鳥類和哺乳類細胞。實驗材料待標記的培養細胞試劑、試劑盒37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡鹽水(TBS)
32P標記裂解培養細胞—－溫和去垢劑裂解法（對非貼壁）
實驗材料待標記的培養細胞試劑、試劑盒37℃標記培養液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡鹽水(TBS) ／磷酸鹽平衡鹽水(PBS)溫和裂解緩沖液／RIPA 裂解緩沖液儀器、耗材樹脂玻璃擋板(1 in 厚)取液器吸頭樹脂玻璃盒37℃微量離心管一次性吸管橡皮細胞刮子So
用[32P]磷酸標記細胞實驗_標記懸浮培養的HeLa細胞
實驗材料細胞試劑、試劑盒磷酸儀器、耗材無磷酸培養基實驗步驟1. 培養細胞至對數期，600 g 離心 5 分鐘。2. 棄上清，用無磷酸培養基懸浮細胞。3. 培養細胞 3~4 小時以耗盡它們的磷酸儲備。4. 再次離心，棄上清，用無磷酸培養基懸浮，加?32P 磷酸鹽至 20 μCi/ml 培養液，培養 1
標記裂解培養細胞實驗
基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對貼壁細胞）基本方案 ?溫和去垢劑裂解法（對非貼壁細胞）SDS煮沸法裂解細胞實驗方法原理實驗材料待標記的培養細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒37℃標記培養液 ? ? ?
用[32P]磷酸標記細胞實驗
標記單層培養細胞標記懸浮培養的HeLa細胞實驗材料HeLa 細胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒FCS ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
用[32P]磷酸標記細胞實驗
實驗材料 HeLa 細胞試劑、試劑盒 FCS磷酸鹽儀器、耗材 無磷酸培養基實驗步驟 1. 在含 10% FCS 的培養基中單層培養 HeLa 細胞至鋪滿 50% 左右。2. 倒掉完全培養基，加入新鮮的無磷酸培養基，培養 3~4 小時以耗盡胞內的磷酸儲備。3. 換新鮮的無磷酸培養基，并加 32P 磷酸
用[32P]磷酸標記細胞實驗
標記單層培養細胞 標記懸浮培養的HeLa細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 HeLa 細胞
培養細胞標記和裂解物的制備實驗
實驗材料?培養細胞試劑、試劑盒?DMEMHClTBSTris儀器、耗材?微量離心管Plexiglas盒吸頭細胞刮子冷凍離心機實驗步驟 1.? 培養待標記的細胞至適當的生長期。?對于貼壁細胞：?2a.? 吸去培養液，用37℃的含血清不加標記物的標記培養液洗盡殘存的含磷酸鹽培養液，吸盡該培養液。?3a.
培養細胞標記和裂解物的制備實驗
溫和去污裂解法 SDS煮沸法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 培養細胞 試劑、試劑盒
培養細胞標記和裂解物的制備實驗
溫和去污裂解法 SDS煮沸法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 培養細胞 試劑、試劑盒
培養細胞標記和裂解物的制備實驗——溫和去污裂解法
實驗材料培養細胞試劑、試劑盒DMEMHClTBSTris儀器、耗材微量離心管Plexiglas盒吸頭細胞刮子冷凍離心機實驗步驟1. ?培養待標記的細胞至適當的生長期。?對于貼壁細胞：?2a. ?吸去培養液，用37℃的含血清不加標記物的標記培養液洗盡殘存的含磷酸鹽培養液，吸盡該培養液。?3a. ?加入
培養細胞標記和裂解物的制備實驗——SDS煮沸法
實驗材料培養細胞試劑、試劑盒SDS裂解液RIPA校正液免疫沉淀洗液儀器、耗材離心機培養箱玻璃培養管實驗步驟1. ?標記和洗滌細胞（溫和去污裂解法，步驟1~7）。?2a. ?對于貼壁細胞：加入適量SDS裂解液至培養皿中。（35 mm 培養皿加0.1 ml，50 mm 培養皿0.25 ml，100 ml
免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗_單層培養的細胞的裂解
實驗方法原理培養的動物細胞一般使用溫和去垢劑來裂解。如果低濃度的去垢劑就能引起細胞的充分裂解（如1%NP-40或1%TritonX-100)，那么這對目標蛋白的影響可能比勻漿方法更溫和。去垢劑的選擇必須根據免疫沉淀所用的抗體的識別表位的性質來決定。實驗材料單層細胞或懸浮細胞試劑、試劑盒裂解緩沖液PB
氮艙減壓法裂解培養細胞實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 通過來自增壓艙中的氮氣減壓膨脹來破碎細胞是一種快速、有效的細胞和組織的勻漿方法，能釋放完整的細胞器和制備細胞膜。該方法的原理很簡單：細
氮艙減壓法裂解培養細胞實驗
實驗方法原理 通過來自增壓艙中的氮氣減壓膨脹來破碎細胞是一種快速、有效的細胞和組織的勻漿方法，能釋放完整的細胞器和制備細胞膜。該方法的原理很簡單：細胞放在一個壓力艙中，在高壓下（約5500kPa，相當于800psi)氮氣首先被溶解在細胞中，當壓力突然消失時，氮從溶液中迅速氣化，并引起細胞膜的拉伸和擴
氮艙減壓法裂解培養細胞實驗
實驗方法原理通過來自增壓艙中的氮氣減壓膨脹來破碎細胞是一種快速、有效的細胞和組織的勻漿方法，能釋放完整的細胞器和制備細胞膜。該方法的原理很簡單：細胞放在一個壓力艙中，在高壓下（約5500kPa，相當于800psi)氮氣首先被溶解在細胞中，當壓力突然消失時，氮從溶液中迅速氣化，并引起細胞膜的拉伸和擴展
用[α32P]－3脫氧腺苷5三磷酸或[α32P]雙脫氧ATP末端標記...
用[α-32P] 3'脫氧腺苷5'-三磷酸或[α-32P]雙脫氧ATP末端標記雙鏈DNA的3'突出端實驗材料?限制性內切核酸酶小牛胸腺末端轉移酶模板 DNA試劑、試劑盒?乙酸銨乙醇酚氯仿末端轉移酶緩沖液儀器、耗材?Sephadex G-50 離心柱實驗步驟 一、材料1. 緩沖
蛋白質磷酸化的測定實驗
代謝標記 X射線片放射自顯影檢測32P標記的蛋白質 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗_懸浮生長的細胞的裂解
實驗材料細胞實驗步驟①細胞在480g的離心力條件下離心10min，棄去上清。②用冷PBS洗細胞兩次，然后將洗過的細胞置于冰上。③重新懸浮沉淀，使1.0ml裂解液（冷卻到4℃)中含大約1X107?5X107個細胞。④冰上孵育細胞15min，并不時地振動小管。⑤4℃條件下20000g離心裂解液10min
蛋白質磷酸化的測定實驗—代謝標記
實驗材料細胞儀器、耗材培養瓶實驗步驟1. 用 60 mm 或 100 mm 培養瓶，在完全培養基中培養細胞至所希望的密度。2. 用預熱的低磷酸培養基（無放射性磷酸鹽）沖洗兩次，然后加入含 0.5~1 mCi32P/ml 的低磷酸培養基（50~100 μmol/L 無機磷酸）。3. 培養結束后，回收?
用于免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗
實驗方法原理 培養的動物細胞一般使用溫和去垢劑來裂解。如果低濃度的去垢劑就能引起細胞的充分裂解（如1%NP-40或1%TritonX-100)，那么這對目標蛋白的影響可能比勻漿方法更溫和。去垢劑的選擇必須根據免疫沉淀所用的抗體的識別表位的性質來決定。實驗材料 單層細胞或懸浮細胞試劑、試劑盒 裂解緩沖
用于免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗
方法A:單層培養的細胞的裂解 方法B:懸浮生長的細胞的裂解 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 培養的動物細胞一般使用溫和去垢劑來裂解。如果低濃度的去垢劑就能引起細胞的充
噬菌體侵染實驗的詳細過程
(感染階段)噬菌體侵染寄主細胞的第一步是“吸附”,即噬菌體的尾部附著在細菌的細胞壁上,然后進行“侵入。先通過溶菌酶的作用在細菌的細胞壁上打開一個缺口,尾鞘像肌動蛋白和肌球蛋白的作用一樣收縮,露出尾軸,伸入細胞壁內,如同注射器的注射動作,噬菌體只把頭部的DNA注入細菌的細胞內,其蛋白質外殼留在壁外,不
ATPase－Assays－with－32PATP
MaterialsPurified Motor Protein, 20-80 μMNucleotide Mix =50 mM Mg·ATP?gamma-32P-ATP to give 5 000 - 10 000 cpm/nmol?10 mM HEPES, pH 7.2?1 mM EGTA?1 mM
5’末端DNA探針同位素（[γ32P]ATP）激酶標記試劑盒
5’末端DNA探針同位素（[γ32P]ATP）激酶標記試劑盒產品說明書（中文版） 主要用途 5’末端DNA探針同位素（[γ32P]ATP）激酶標記試劑是一種旨在針對目標片段DNA、寡核苷酸引物、銜接體（LINKER）、線性載體等，使用多聚核苷酸激酶的正向反應，進行5’末端同位素標記處
噬菌體侵染細菌的實驗
噬菌體是寄生在細菌細胞中的病毒.一個典型的噬菌體的生活周期,可以分為3個階段感染階段,增殖階段和成熟階段.有關的主要內容在課本上已經介紹過了,這里再稍加詳述如下.感染階段 噬菌體侵染寄主細胞的第一步是"吸附",即噬菌體的尾部附著在細菌的細胞壁上,然后進行"侵入.先通過溶菌酶的作用在細菌的細胞壁上