吉凱基因Dr.L的私家實驗筆記——穩定株
1、什么是瞬時表達和穩定表達？ 課前熱身，了解的同學請直接進入題2 瞬時表達：外源片段不能隨細胞分裂而一同復制，導致表達時間短暫，且表達量隨時間逐漸下降。 穩定表達：是指外源片段整合入細胞基因組中，并能隨細胞分裂穩定傳遞下去，表達量長時間處于穩定水平。 那穩定株，顧名思義當然是屬于穩定表達的體系了。 2、我的實驗是否需要篩選穩定株？ 能夠達到穩定表達的方法不止穩定株一種哦。我們使用慢病毒感染細胞，也一樣可以達到穩定表達的效果。什么原理呢？ *慢病毒是整合型的逆轉錄病毒載體，感染細胞后，攜帶的外源片段會直接整合入細胞的基因組DNA中，并能夠隨細胞分裂穩定傳代。所以對于大多數實驗，包括細胞周期、凋亡、增殖等功能學實驗，甚至裸鼠成瘤等長時間的實驗，只要細胞感染效率較高（70%～80%以上），感染一次慢病毒就可以達到長時間、高效的基因操作的目的，滿足實驗要求，無須篩選穩定細胞株。 3、......閱讀全文
吉凱基因Dr.L的私家實驗筆記——穩定株
1、什么是瞬時表達和穩定表達？ 課前熱身，了解的同學請直接進入題2 瞬時表達：外源片段不能隨細胞分裂而一同復制，導致表達時間短暫，且表達量隨時間逐漸下降。 穩定表達：是指外源片段整合入細胞基因組中，并能隨細胞分裂穩定傳遞下去，表達量長時間處于穩定水平。 那穩定株，顧名思義
實驗是否需要篩選穩定株？
實驗是否需要篩選穩定株？能夠達到穩定表達的方法不止穩定株一種哦。我們使用慢病毒感染細胞，也一樣可以達到穩定表達的效果。什么原理呢？*慢病毒是整合型的逆轉錄病毒載體，感染細胞后，攜帶的外源片段會直接整合入細胞的基因組DNA中，并能夠隨細胞分裂穩定傳代。所以對于大多數實驗，包括細胞周期、凋亡、增殖等功能
吉凱基因—布魯克“4D+”計劃啟動暨合作實驗室揭牌
由蛋白質組學驅動的精準醫學帶來了精確診斷與精準治療統一的第三代醫學革命。離子淌度分離概念的引入，使得蛋白質組學進入4D新時代，定義了蛋白質組學分析新標準。4D-蛋白質組學是新一代蛋白質組學分析技術，由布魯克公司與蛋白質組學領域的領軍人物Matthias Mann，Ruedi Aebersold，
穩定細胞株構建
穩轉細胞系（穩定表達細胞株）指在細胞中持續穩定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩轉細胞株的目的基因質粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長期穩定表達該基因。穩轉細胞株包括多克隆穩轉細胞株和單克隆穩轉細胞株。慢病毒感染目的細胞后，通過抗性基因篩選得到的細胞株是多個細胞克隆的組合。單克隆細胞株是從多克隆細
吉凱基因獲B輪1億融資，弘暉資本等投資
近日，吉凱基因正式宣布完成B輪融資，本輪融資金額為1億元人民幣。投資方包括醫療專業基金弘暉資本、華夏信諾、華興資本旗下基金華晟資本以及上市公司澳洋科技等。 上海吉凱基因化學技術有限公司是國內最大的疾病診療關鍵基因研究服務供應商，建立了國內最大的慢病毒文庫和一系列研究平臺，發現了數百個在特定腫瘤
穩定表達細胞株的建立
1、將轉染后的細胞按照一定的比例接種到6孔板中（一般選用1：10和1：100兩個梯度），分別采用1200mg/ml，1000mg/ml和800mg/ml的G418進行篩選；以轉染攜帶EGFP質粒載體的細胞作為陽性對照，以未轉染質粒載體的細胞作為陰性對照；2、每3～4天換液一次；3、篩選20～30天，
穩定轉染細胞株的構建
1. 2?穩定轉染細胞株的構建原理：穩定轉染，就是轉染的質粒DNA整合到宿主細胞染色體上，使宿主細胞可長期表達目的基因及蛋白。需要在瞬時轉染基礎上對靶細胞進行篩選或者應用高轉染效率的病毒，根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物進行細胞傳代，從而得到可穩定表達目的基因的細胞系。應用：????
長海醫院與吉凱基因合作－利用CART治療白血病獲得突破
日前召開的全國臨床腫瘤學大會上，第二軍醫大學附屬長海醫院血液內科主任楊建民告訴記者一個令人振奮的消息：在長海醫院血液科，CAR-T技術在難治復發急性淋巴細胞白血病的臨床試驗中，已治療的14例患者都得到不同程度的控制，其中12例急性淋巴細胞白血病患者達到完全緩解，2例淋巴瘤患者癥狀穩定，至今無一例
今凱基因藥物實驗室成立并落戶鄭州
4月23日，今凱基因藥物實驗室(南陽)有限公司在鄭州召開新聞發布會，宣告該實驗室正式成立并落戶鄭州市高新技術開發區，成為河南省首個公司制基因抗癌藥物實驗室。 作為河南省首個孵化器式實驗室、首個風險投資直接介入基礎研究的實驗室，今凱基因藥物實驗室(南陽)有限公司，薈萃了一批美國、中國等在基因
醫學資料筆記2－基因的轉移和重組
細菌間基因的轉移與重組是發生遺傳性變異的重要原因之一。DNA可以從一種生物轉移至另一生物，整合至染色體，改變其遺傳信息的組成，這類基因轉移的方式稱之為基因水平轉移。這類遺傳物質的交流可發生在親緣、遠緣，甚至無親緣關系的生物之間。根據DNA片段的來源及交換方式等不同，將基因轉移和重組分為轉化、轉導
穩定株構建不出來怎么辦？
下面兩種情況，常規的穩定株構建式比較困難的，但是辦法總比困難多！1）過表達：看基因功能。如果是抑制腫瘤細胞的增殖或促進腫瘤細胞的凋亡，那么是很難構建穩定株的（目的基因感染細胞后就會凋亡或不長）。2）干擾：建議構建可誘導表達的穩定株。RNA 干擾敲減的是細胞內源在用的基因，敲減后，短時間內會看到抑制效
哺乳動物細胞基因穩定轉染的實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 哺乳動物細胞 試劑、試劑盒
哺乳動物細胞基因穩定轉染的實驗
分析基因的功能常需要形成含有穩定整合了該基因的哺乳動物細胞系。在轉染中大約有1/104細胞將穩定整合外源因而可用一顯性（正向）選擇標記來分離穩定的轉化細胞。用可高效轉染的細胞系來確保轉染成功。另外，應包括合適的對照以確定目的基因無細胞毒性。實驗材料哺乳動物細胞試劑、試劑盒完全培養液儀器、耗材培養箱離
哺乳動物細胞基因穩定轉染的實驗
實驗材料 哺乳動物細胞試劑、試劑盒 完全培養液儀器、耗材 培養箱離心管實驗步驟 1. ?確定所要轉染的細抱系能呈獨立集落生長。對于貼壁細胞，在10 cm 組織培養培養皿中接種約100個細胞，培養10~12天，毎4天換液1次。亞甲藍染色后對成活的細胞集落進行計數。?2. ?確定母代細胞的選擇條件：將一
篩選穩定表達細胞株轉染后多久藥物篩選
穩定細胞株篩選是一個長期的過程，穩定細胞株篩選優化，有許多條件需要摸索，而且是從源頭開始①在構建載體時，目的基因直接整合到細胞染色體組上，最好不要通過先瞬轉在篩選穩定細胞株的這種方法，因為轉染效率沒有保證②高表達載體的構建，哺乳動物表達量一直是它自身的缺點，最好根據高表達載體定向的馴化細胞，提高蛋白
實驗室記筆記的七大法則
實驗室筆記本被誤解為唯一的一種記錄實驗方案和實驗結果的方式。其實，實驗室筆記本的作用是遠不止于此。它是一個組織工具和記憶輔助，因為筆記本對于所有的科學家而言是科研及活動的主要記錄工具。另外，它也可作為想法和其研究成果所有權的法律記錄。在這里，我為計算生物學研究人員如何做實驗室筆記而整理了一些“干
G418篩選慢病毒感染穩定細胞株
用慢病毒篩選穩定細胞株，以G418篩選方法為例，篩選出穩定整合Neomycin抗性基因的細胞系。A、?G418抗生素最優濃度篩選?每種細胞對抗生素的敏感性不同，因此，準備建立穩定細胞系之前，需要確定能夠在10-14天殺死細胞的最佳濃度。方法如下：1、將細胞稀釋到1000個細胞/mL，接種到24孔板，
同樣是穩定株，單克隆和混合克隆如何選擇？
單克隆穩定株：來源于含有穩定整合外源片段的單個細胞的擴增。混合穩定株：由多個單克隆穩定株混合構成的克隆群，不同的單克隆其外源片段的整合位點不一樣。由于不同細胞基因組背景存在差異，且不同整合位點的單克隆細胞株表現出來的細胞表型可能不一致，所以使用混合克隆株更能去除細胞間差異造成的干擾，否則需要對多個單
體內耐藥細胞株的建立實驗
實驗方法原理 細胞與低劑量的藥物長期接觸，引起細胞本身藥物化學過程的改變，細胞膜上出現Pgp糖蛋白，使細胞逐漸對藥物耐受，隨著藥物濃度的遞增，其耐受程度逐漸加強。實驗材料 小鼠瘤株試劑、試劑盒 肝素生理鹽水儀器、耗材 離心機實驗步驟 一、材料準備1. ?動物選擇：根據欲建立的耐藥細胞株，選擇合適的動
抗藥性突變株的分離實驗
實驗方法原理?生物的抗藥性突變是 DNA 分子的某一特定位置的結構改變所致，與藥物的存在無關，某種藥物的存在只是作為分離某種抗藥性菌株的一種手段，而不是作為引發突變的誘導物，因而在含有一定抑制生長藥物濃度的平板上涂布大量的細胞群體，極個別抗性突變的細胞會在平板上長成菌落。將這些菌落挑取純化，進一
體內耐藥細胞株的建立實驗
體內耐藥細胞株的建立實驗是通過細胞與低劑量的藥物長期接觸，引起細胞本身生物化學過程的改變，細胞膜上出現Pgp（或P-170）糖蛋白，使細胞逐漸對藥物耐受。實驗方法原理細胞與低劑量的藥物長期接觸，引起細胞本身藥物化學過程的改變，細胞膜上出現Pgp糖蛋白，使細胞逐漸對藥物耐受，隨著藥物濃度的遞增，其耐受
3000株水稻基因序列公開發表
近日，3000株水稻基因組測序文章在GigaScience正式發表，且整套水稻基因序列以可引用形式在該雜志的附屬開放獲取數據庫GigaDB中公開。 該項目產生的數據是目前已公開水稻序列數據量的四倍。該成果標志著3000株水稻基因組項目第一階段的完成，主要由中國農業科學院、國際水稻研究
EBV所轉錄的miRNA－BART1－抑癌基因PTEN而促進鼻咽癌細胞轉移
Nature子刊揭示鼻咽癌轉移新機制 鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma, NPC）是我國華南地區常見的惡性腫瘤之一，主要發生于鼻咽腔頂部和側壁，長期以來發病率一直為耳鼻咽喉惡性腫瘤之首。我國每年鼻咽癌的新發病例達2.8萬例，其中廣東地區鼻咽癌發病率占全國60%，死亡
在穩定株篩選過程中，如何提高單克隆細胞的活性？
最近，單抗市場又迎來了一個關注的熱潮。實驗室的技術人員以及各大設備廠家，也都逐漸把目光和精力都投向了如何提高單抗藥物研發和生產的效率問題上了。在這一層面，各大單抗研發生產企業似乎都在進行賽跑。誰在整個流程中領先一小步，那么極有可能在整個單抗藥物市場中贏得先機。在這里，今天我們要討論的是關于在穩定株篩
玉米株高連續降低的基因被發現
中國農業科學院生物技術研究所玉米耐密高產功能基因組創新團隊聯合安徽農業大學、華南農業大學，發現了一種通過針對性基因編輯Br2基因實現玉米株高連續降低的方法，為玉米耐密、抗倒改良提供了重要的技術支撐。相關成果日前發表在國際期刊《植物生物技術雜志》上。玉米目前在全球谷物生產中排名第一，對保障全球糧食和飼
肺癌研究中慢病毒工具在體內外模型中的應用
引言：上海吉凱基因化學技術有限公司成立于2002年，擁有國內最大的慢病毒文庫，同時也是國內最大的疾病關鍵基因科研服務供應商，在疾病研究領域的實驗積累已逾14年！在這里，我們為大家特別整理了10多個研究領域的經驗所得，將最實用的精華分享給大家！肺癌作為世界范圍內第一大常見腫瘤，這次就當仁不讓先來分享，
肺癌研究中慢病毒工具在體內外模型中的應用
引言：上海吉凱基因化學技術有限公司成立于2002年，擁有國內最大的慢病毒文庫，同時也是國內最大的疾病關鍵基因科研服務供應商，在疾病研究領域的實驗積累已逾14年！在這里，我們為大家特別整理了10多個研究領域的經驗所得，將最實用的精華分享給大家！肺癌作為世界范圍內第一大常見腫瘤，這次就當仁不讓先來分
轉染細胞的穩定篩選實驗
本實驗主要用于獲得含目的外源基因的真核細胞。實驗方法原理外源基因轉染真核細胞后整合入基因組DNA，能夠長期存在于細胞中，隨染色體復制而傳給子代。外源基因進入培養細胞一般要經過幾天才能夠整合入基因組DNA。實驗材料轉染細胞試劑、試劑盒抗生素培養基胰酶儀器、耗材6孔板24孔板96孔板CO2培養箱濾紙片培
轉染細胞的穩定篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 外源基因轉染真核細胞后整合入基因組DNA，能夠長期存在于細胞中，隨染色體復制而傳給子代。外源基因進入培養細胞一般要經過幾天才能夠整合入基因組DNA。 實驗材料
轉染細胞的穩定篩選實驗
實驗材料?轉染細胞試劑、試劑盒?抗生素培養基胰酶儀器、耗材?6孔板24孔板96孔板CO2培養箱濾紙片培養瓶實驗步驟?1．確定抗生素作用的最佳濃度：不同的細胞株對各種抗生素有不同的敏感性，因此在篩選前要做預試驗，確定抗生素對所選擇細胞的最低作用濃度。1) 提前24 小時在96 孔板或24 孔板中接種細