細胞培養常見問題與解答4
22.在High Five無血清培養基中去污劑的濃度是多少？ High Five無血清培養基中去污劑的濃度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。 23.High Five細胞用多大的密度凍存？ 3.0x10E6 cells/ml 24.在我的果蠅培養基中發現形成白色沉淀，加熱后溶解。它是什么？對我的細胞有害嗎？ 可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培養基中谷氨酰胺的濃度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的濃度比在RPMI 1640中高25倍，而且比谷氨酰胺更加難以溶解。沉淀也可能是不止一種成分的復合物。它可能是由于貯存在局部溫度較低的地方引起。只要沉淀在培養條件下可以溶解，對實驗不會有不利的影響。 25.如何從T25瓶中轉移sf9細胞？能用胰蛋白酶消化嗎？ 我們強力推薦使用脫落細胞的方法，因為這項......閱讀全文
細胞培養常見問題與解答4
22.在High Five無血清培養基中去污劑的濃度是多少？ High Five無血清培養基中去污劑的濃度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。 23.High Five細胞用多大的密度凍存？ 3.0x10E6 ce
細胞培養常見問題與解答2
8.培養基中丙酮酸鈉的作用是什么？丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源。盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。9.為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀？GIBICO的胎牛血清 沒有預老化，儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白
細胞培養常見問題與解答3
15.如何檢測內毒素(熱源)水平？ LAL（Limulus Amebocyte Lysate）試驗是可用的最敏感和特異的檢測細菌內毒素的方法。Levin和Bang 發現細菌可引起鱟（Limulus polyphemus）血管內的凝集作用。內毒素啟動一個細胞內酶原系統（絲氨酸蛋白酶級
細胞培養常見問題與解答1
1.為什么要熱滅活血清？加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。2.如何用臺盼蘭計數活細胞？用無血清培養基把細胞懸液稀釋到200－2000個/毫升，在0
細胞培養的八個常見問題與解答(FAQ)
1 冷凍管應如何解凍？ 取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。 2 細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DM
細胞培養常見問題解答
1.如何選用特殊細胞系培養基？?培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養是一個好的開始。??2.何時須更換培養基？?視細胞生長密度而定， 或遵照細胞株基本數據上之更換時間，按時更
細胞培養板的選擇與常見問題解答（二）
(4)細胞分布不均及解決辦法問：我的細胞接種培養板，細胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊？我看園子里有的戰友的細胞卻是聚集在中間，是不是板子的質量問題啊？答：請問你的細胞是如何混勻的？是滴管吹打還是振蕩培養板？如果是后者，而且是轉圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細胞甩到周邊部分，導致細胞中間少
細胞培養板的選擇與常見問題解答（一）
細胞培養板依底部形狀的不同可分為平底和圓底（U型和V型）；培養孔的孔數有6、12、24、48、96、384、1536 孔等；根據材質的不同有Terasaki板和普通細胞培養板。具體選擇時根據培養細胞的類型、所需培養體積及不同的實驗目的而定。（1）平底和圓底（U型和V型）培養板的區別和選擇：貼壁細胞一
細胞培養常見問題解答（三）
21 偵測出細胞株有支原體污染時， 該如何處理?直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細胞株。22 CO2 培養箱之水盤如何保持清潔?定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。23 為何培養基保存于4 °C 冰箱中，顏色會偏暗紅色， 且pH值會越來越偏堿性?培養基保存于4 °C 冰箱中，
細胞培養常見問題解答（二）
16 細胞欲冷凍保存時， 細胞冷凍管內應有多少細胞濃度?冷凍管內細胞數目一般為1x106 cells/ml vial， 融合瘤細胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。17 應如何避免細胞污染?細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉漿菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室
細胞培養常見問題解答（一）
1 冷凍管應如何解凍?取出冷凍管后， 須立即放入37 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全， 預防冷凍管之爆裂。2 細胞冷凍管解凍培養時， 是否應馬上去除DMSO?除少數特別注明對D
細胞培養常見問題解答（一）
1 冷凍管應如何解凍?取出冷凍管后， 須立即放入37 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全， 預防冷凍管之爆裂。2 細胞冷凍管解凍培養時， 是否應馬上去除DMSO?除少數特別注明對D
細胞培養常見問題解答（四）
另：這里補充一下培養用品的消毒，供參考：細胞培養的最大危險是發生培養物的細菌，真菌和病毒等微生物的污染，污染主要是由于操作者的疏忽而引起，常見的原因有操作間或周圍空間的不潔，培養器皿和培養液消毒不合格或不徹底，由于有關培養的每個環節的失誤均能導致培養失敗，故細胞培養的每個環節都應嚴格遵守操作常規，防
細胞培養常見問題解答（二）
11 欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速?欲回收動物細胞， 其離心速率一般為300xg (約1,000rpm)，5 - 10 分鐘， 過高之轉速， 將造成細胞死亡。12 細胞之接種密度為何?依照細胞株基本數據上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生
細胞培養（cell－culture）的一些常見問題與解答1
1、細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎？不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++， Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0， 溫度37 ℃其作用能力最強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前，一
細胞培養（cell－culture）的一些常見問題與解答2
6、血清的有關問題：新生牛血清：新出生牛5天內取血制成小牛血清：小牛出生16周以內采血制成。胎牛血清：（進口血清）要求剖腹取胎制成。國內廠家往往不能做到，經常把出生2天以內采血稱為胎牛血清。根據血清的生產工藝及血紅蛋白、內毒素含量又分為：（1）特級胎牛血清：40納米過濾，內毒素含量≤10EU，血紅蛋
細胞培養（cell－culture）的一些常見問題與解答2
6、血清的有關問題：新生牛血清：新出生牛5天內取血制成小牛血清：小牛出生16周以內采血制成。胎牛血清：（進口血清）要求剖腹取胎制成。國內廠家往往不能做到，經常把出生2天以內采血稱為胎牛血清。根據血清的生產工藝及血紅蛋白、內毒素含量又分為：（1）特級胎牛血清：40納米過濾，內毒素含量≤10EU，血紅蛋
細胞培養（cell－culture）的一些常見問題與解答1
1、細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎？不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++， Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0， 溫度37 ℃其作用能力最強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前，一
移液器常見問題與解答大全
移液器是實驗室里面最長使用的實驗儀器之一，基本上每一個實驗室人員都曾經或現在使用過移液器，因而也會遇到移液器使用時的一些問題。筆者總結歸納了移液器使用時常見的問題與解答大全，希望對于大家有所幫助：移液器使用時常見的問題與解答大全：問題可能原因提議移液器滲漏多道移液器吸嘴里不均衡的液體水平·吸嘴與移液
濃縮儀常見問題與解答
1、樣品濃縮儀與氮吹儀的區別？答：樣品濃縮和氮吹儀都是用氮氣來進行吹掃，只是各廠家的命名不一樣。2、如何能讓實驗速度更快、效率更高？答：樣品濃縮儀的原理是通過提高樣品的溫度，使樣品的溶劑在無氧狀態下進行揮發，從而快捷高效的達到濃縮的目的。影響實驗速度的原因有兩個：1）加熱的溫度。2）氣體的流量及氣體
SWATH技術常見問題與解答
SWATH（Sequential Window Acquisition of all THeoretical Mass Spectra）采集模式是蘇黎世聯邦理工學院及AB SCIEX（全球領先的生命科學分析技術公司）的科學家聯合推出的一項基于質譜應用的新技術。利用此項技術，科學家有史以來首次可
SWATH技術常見問題與解答
SWATH（Sequential Window Acquisition of all THeoretical Mass Spectra）采集模式是蘇黎世聯邦理工學院及AB SCIEX（全球領先的生命科學分析技術公司）的科學家聯合推出的一項基于質譜應用的新技術。利用此項技術，科學家有史以來首次
測序過程常見問題分析與解答
DNA測序樣品用什么溶液溶解比較好?? ? 答：溶解DNA測序樣品時,用滅菌蒸餾水溶解最好。DNA的測序反應也是Taq酶的聚合反應,需要一個最佳的 酶反應條件.如果DNA用緩沖液溶解后,在進行了測序反應時,DNA溶液中的緩沖液組份會影響測序反應的體 系條件,造成Taq酶的聚合性能下降。 有很多客戶在
eBioscience流式抗體常見問題與解答
1、eBioscience公司提供了哪些抗體？ ?A：物種——人、小鼠、大鼠、非人靈長類、犬類等。檢測指標——包括細胞表面標記（CD分子，膜骨架，趨化因子受體）和胞內指標（細胞因子，核內轉錄因子）。抗體標記——生物素標記抗體，親和純化抗體以及直標熒光素抗體。eB抗體的直標熒光素有（括號內是發射光波長
免疫熒光技術常見問題與解答
1、問：近期要做免疫熒光雙標，不知哪位有免疫熒光雙標技術的詳細步驟及其注意事項？?參考見解：我正在做冰凍組織切片的免疫熒光雙染。我的經驗是：?（1）選取一抗時要來源于兩種不同的動物，我用的是來源于rabbit和rat的抗體，二抗則是不同熒光信號標記的，我用的是donkey anti-rabbit-F
CST抗體－Western－Blot常見問題與解答
1.Problem：高背景（曝光1-30秒后，背景高或無特異性蛋白帶） 2.Problem：信號弱（1-30秒的曝光后檢測不到信號） 3.Problem：無著色 4.Problem：著色太淺 5.Problem：著色太深 6.
噬菌體展示技術常見問題與解答
1、在噬菌體展示技術的應用中，M13噬菌體與其他噬菌體比有什么優點？ M13噬菌體和與其密切相關的絲狀噬菌體fd和f1均為非裂解性噬菌體，它們在增殖期間均不裂解宿主菌。這就極大地簡化了每輪淘選過程之間的中間噬菌體純化步驟，只用簡單的PEG沉淀方法就足以將噬菌體與其他所有污染的細胞蛋白分開
伺服電機與步進電機常見問題解答
?電子式試驗機與微機控制電子式試驗機、電子式拉力試驗機上都需要用到電機，一般低端的選用步進電機，的選用伺服電機。下面就伺服電機和步進電機常見幾個問題做下解釋。1、如何正確選擇伺服電機和步進電機？ 主要視具體應用情況而定，簡單地說要確定：負載的性質（如水平還是垂直負載等），轉矩、慣量、轉速、精度、加
細胞凍存常見問題與解答FAQ1
細胞冷凍管解凍培養時， 是否應馬上去除DMSO？除少數特別注明對DMSO 敏感之細胞外， 絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞）， 在解凍之后， 應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。2、可否使用
細胞凍存常見問題與解答FAQ2
14、DMSO之等級和無菌過濾之方式為何？冷凍保存使用之DMSO 等級， 必須為Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)， 其本身即為無菌狀況， 第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中， 保存于4°C， 避免反復冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質，