低背景的蛋白質銀染(silverstaining)方法
我們做蛋白質電泳的人都知道，銀染色很靈敏，有很強的說服力，但通常膠背景較深，不易掃描。在這里介紹一下低背景的蛋白質銀染方法。Step Reagent Time/minFix 50%EtOH, 12%HAC, 0.1%HCHO, 38%H2O 60Rinse 50% EtOH 5 min, 3 timesSensitive 0.02% Na2S2O3 1 minRinse Double distilled H2O 1 min, 3 timesSilver 0.5% AgNO3, 0.075% HCHO(現用現加) 20 minWash* Double distilled H2O 1 min, 2 timesDevelop 6% Na2CO3, 0.0004% Na2S2O3, 0.05% HCHO 4-15 minStop 50% EtOH, 12% HAC*說明，此步中洗滌過程要控制好，時間太長，可能顯色時間太長甚至染不出色；反......閱讀全文
低背景的蛋白質銀染(silver－staining)方法
我們做蛋白質電泳的人都知道，銀染色很靈敏，有很強的說服力，但通常膠背景較深，不易掃描。在這里介紹一下低背景的蛋白質銀染方法。Step Reagent Time/minFix 50%EtOH, 12%HAC, 0.1%HCHO, 38%H2O 60Rinse 50% EtOH 5 min, 3 tim
銀染(silver－staining)操作規程
實驗原理：在堿性條件下，用甲醛將蛋白帶上的硝酸銀（銀離子）還原成金屬銀，以使銀顆粒沉積在蛋白帶上。染色的程度與蛋白中的一些特殊的基團有關，不含或者很少含半胱氨酸殘基的蛋白質有時候呈負染。銀染的詳細機制還不是非常清楚。 試劑：乙醇、冰醋酸、乙酸鈉、硫代硫酸鈉、硝酸銀、碳酸鈉、甘氨酸或EDTA.Na
低背景的蛋白質銀染方法
我們做蛋白質電泳的人都知道，銀染色很靈敏，有很強的說服力，但通常膠背景較深，不易掃描。在這里介紹一下低背景的蛋白質銀染方法。Step Reagent Time/minFix 50%EtOH, 12%HAC, 0.1%HCHO, 38%H2O 60Rinse 50% EtOH 5 min, 3 tim
Silver－Staining－Protocol
1x 40min - overnight?????50% MeOH, 12% Acetic Acid1x 30min??????????????????????????????????50% MeOH, 12% Acetic Acid, 0.05% 37% Formaldehyde3x 20min?
SSR－GEL－and－Silver－Staining－Protocol
I.?EQUIPMENT:DNA sequencing unit (35 x 45 cm) & 2000V power supplyClampsLg. plastic trays (4), about 43 x 50 x 8 cm, and one lidTwo rocking platformsH
PVDF膜上蛋白的可逆染色
PVDF膜上蛋白的可逆染色???Western雜交時，為確認蛋白是否轉至PVDF膜上，可用下列方法對膜上蛋白進行可逆性染色。1.??????氨基黑染色染液：0.5% Amido Black (w/v), 25% isopropanol (v/v) and 10% acetic acid.染色：將PV
SSR銀染方法
SSR銀染方法(輕輕震蕩)1、固定10%乙醇+0.5%冰乙酸 6min×2次2、染色0.2% AgNO3 12min3、漂洗（1）蒸餾水 1-2min（2）0.002% Na2S2O3 1-2min（3）顯色1.5%NaOH + 0.4%甲醛（4）保存0.75%Na2CO3
核酸的銀染方法
核酸硝酸銀染色：參考《鋅對缺血再灌注大鼠肝臟金屬硫蛋白一1基因表達的影響》營養學報2000年第22卷第4期294-297取PCR產物進行聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳，所得凝膠進行硝酸銀染色．程序如下：(1)于10%乙醇+0.5% 冰醋酸溶液中固定6 min；(2)于10%乙醇+0.5% 冰醋酸溶液
蛋白質染色實驗——銀染法
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒脫色液戊二醛硝酸銀洗印顯影液儀器、耗材培養箱搖床實驗步驟1. ?將聚丙烯酰胺凝膠放在塑料容器并以5倍體積的固定液覆蓋，在旋轉搖床中緩慢搖動30 min 以上。?2. ?傾去固定液，加5倍凝膠體積的脫色液，緩慢搖動60 min 以上。?3. ?傾去脫色液，加5倍凝膠體積的10
銀染
1．將固定液中的凝膠搖動過夜或至少1小時。2．將保溫液中的凝膠輕微振蕩2小時。3．去離子水清洗凝膠3次，每次20分鐘。4．將硝酸銀溶液中凝膠輕微振蕩30分鐘。5．用去離子水快速洗膠30秒。6．將定影液中凝膠搖動5～30分鐘，時間由所加的蛋白質量決定。7．如果已經達到所需的顏色深度，將凝膠放到定影液中
蛋白質染色實驗——快速銀染法
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒甲醛固定液硫代硫酸鈉干膠液甲醇儀器、耗材搖床透析膜實驗步驟1. 將凝膠置于塑料容器中，加入50 ml 甲醛固定液，在旋轉搖床中緩慢搖動10 min。?2. ?傾去固定液，用水冼兩次，每次5 min，緩慢搖動。?3. ?傾去水，凝膠浸泡在0.2 g/l 硫代硫酸鈉溶液中1 m
銀染的功能與方法特點
銀染是一種檢測聚丙烯酰胺凝膠中蛋白質的方法，其原理是銀離子在堿性 pH 環境下被還原成金屬銀，沉淀在蛋白質的表面上顯色。銀染的方法種類很多，有文獻報道的就有 100 多種。但是其準確的染色機制還不是特別地清楚。由于銀染的靈敏度很高，可染出膠上低于 1ng 的蛋白質點，故廣泛地用在 2D 凝膠分析上，
銀染實驗
試劑、試劑盒甲醇（50% 和5%v v)二硫蘇糖醇AgNO3檸檬酸（固態)顯影液實驗步驟試劑甲醇（50% 和5%v/v)10umol/L二硫蘇糖醇（DTT)AgNO3(0.1%w/v)檸檬酸（固態)顯影液操作程序此操作程序是根據Merril(1987)的方法修改而成。室溫下，凝膠在旋轉平臺上緩慢搖動
銀染實驗
試劑、試劑盒 甲醇（50% 和5%v v)二硫蘇糖醇 AgNO3檸檬酸（固態)顯影液實驗步驟 試劑甲醇（50% 和5%v/v)10umol/L二硫蘇糖醇（DTT)AgNO3(0.1%w/v)檸檬酸（固態)顯影液操作程序此操作程序是根據Merril(1987)的方法修改而成。室溫下，凝膠在旋轉平臺上緩
銀染實驗
銀染實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 甲醇（50% 和5%v v) 二硫蘇糖醇 AgNO3
銀染的應用
主要是用于垂直凝膠電泳中低豐度蛋白的檢測，如內源性GST-Pulldown、Co-IP等實驗中相互作用蛋白的研究 。
PCRSSCP、－RTPCRSSCP－區別
僅僅是擴增的方法不同而已,一個是普通的PCR,一個是RTPCR.如果需要鑒定染色體的DNA序列有無差別或基因突變,可以用PCR-SSCP,我曾做過這方面的實驗,檢測病人有無基因的點突變,同時擴增病人和正常人的基因片段,然后做sscp,只要有一個核苷酸的區別,變性SDS-PAGE后,條帶就會有很大的區
PCRSSCP、－RTPCRSSCP－區別
僅僅是擴增的方法不同而已,一個是普通的PCR,一個是RTPCR.如果需要鑒定染色體的DNA序列有無差別或基因突變,可以用PCR-SSCP,我曾做過這方面的實驗,檢測病人有無基因的點突變,同時擴增病人和正常人的基因片段,然后做sscp,只要有一個核苷酸的區別,變性SDS-PAGE后,條帶就會有很大的區
蛋白質染色實驗——非氨鹽銀染法
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒DTT硝酸銀碳酸鹽顯影液檸檬酸儀器、耗材搖床實驗步驟1. ?將凝膠置于玻璃或聚乙烯容器中，加入100 ml 固定液，在旋轉搖床中緩慢搖動30 min。?2. ?傾去固定液，將凝膠浸沒在脫色液中，緩慢搖動30 min。?3. ?傾去脫色液，加50 ml 10%戊二醛，在通風櫥
兩大蛋白質染色主流方法大比較
常用的蛋白質染色試劑分為已考馬斯亮藍為代表的有機試劑染色、銀染、熒光染色及同位素顯色。其中考馬斯亮藍染色法的應用較為廣泛，現將其與其他的蛋白質染色方法(主要是銀染法)作一比較，幫助大家更好地去選擇合適的蛋白質染色方法。蛋白質的染色常用的有4類：有機試劑染色、銀染、熒光染色及同位素顯色。其中有機試劑染
銀染實驗用水指南
SDS聚丙烯酰胺凝膠染色是蛋白質研究的一個基礎方法。染色方法有很多，實際應用中，考馬斯亮藍染色（考染）和銀染是運用的最多的方法。考馬斯亮藍G250在游離狀態下呈紅色，它與蛋白質結合后變為藍色，結合物在595 nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。銀染實驗中
銀染實驗的操作流程
實驗目的檢測聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質。實驗原理在堿性條件下，用甲醛將蛋白帶上的硝酸銀（銀離子）還原成金屬銀，以使銀顆粒沉積在蛋白帶上。染色的程度與蛋白中的一些特殊的基團有關，不含或者很少含半胱氨酸殘基的蛋白質有時候呈負染。銀染的詳細機制還不是非常清楚。試劑：乙醇、冰醋酸（純乙酸）、乙酸鈉、硫代硫酸鈉
免疫金組織化學染色實驗——IGSS－法
實驗方法原理免疫金銀染色（immunogold silver staining；IGSS）的基本原理是通過免疫反應沉積在抗原位置的膠體金顆粒起著一種催化劑作用，用對苯二酚還原劑將銀離子（Ag+）還原成銀原子（Ag），被還原的銀原子圍繞金顆粒形成一個「銀殼」，「銀殼」一旦形成本身亦具有催化作用，從而使
非同位素銀染測序系統操作技術
Promega公司的SILVER SEQUENCETM DNA測序系統是一種無放射性的序列分析系統，它通過靈敏的銀染方法檢測凝膠中的條帶。銀染提供了一種對于放射性或熒光法來說更加快速，廉價的替代方法。測序結果可以在同一天內得到；電泳完成后經90分鐘就可讀序，這是常規的放射性測序法做不到的。 此外
DNA測序非同位素銀染色法
SILVER SEQUENCETM DNA測序系統是一種無放射性的序列分析系統，它通過靈敏的銀染方法檢測凝膠中的條帶。 銀染提供了一種對于放射性或熒光法來說更加快速，廉價的替代方法。測序結果可以在同一天內得到；電泳完成后經90分鐘就可讀序，這是常規的放射性測序法做不到的。 此外，SILVER S
DNA測序的方法非同位素銀染色法的原理
SILVER SEQUENCETM DNA測序系統是一種無放射性的序列分析系統，它通過靈敏的銀染方法檢測凝膠中的條帶。 銀染提供了一種對于放射性或熒光法來說更加快速，廉價的替代方法。測序結果可以在同一天內得到；電泳完成后經90分鐘就可讀序，這是常規的放射性測序法做不到的。 此外，SILVER SEQ
PCR－產物電泳銀染實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理聚丙烯酰胺凝膠（PAG）是由丙烯酰胺單體和交聯劑亞甲基雙丙烯酰胺，在引發劑過硫酸胺（AP）提供自由基和催化劑四甲基乙二胺（TEMED）的作用下聚合而成。丙烯酰胺可由天然光線誘發聚合，所以其水溶液應貯藏在棕色瓶中，置低溫 4℃ 更佳。由于其水溶液穩定性
PCR－產物電泳銀染實驗
常用的核酸電泳法有兩種。①水平電泳：瓊脂糖凝膠，紫外光下判斷條帶。此法經濟省時，但分辨率較低。②垂直電泳：聚丙烯酰胺凝膠，可見光下判斷條帶。此法相對費力，但分辨率較高。分辨率高是聚丙烯酰胺電泳法被優先用于克隆性基因重排條帶判斷的關鍵。在聚丙烯酰胺凝膠上較寬彌散被判斷為假陽性（陰性）的條帶，在瓊脂糖膠
PCR－產物電泳銀染實驗
實驗方法原理 聚丙烯酰胺凝膠（PAG）是由丙烯酰胺單體和交聯劑亞甲基雙丙烯酰胺，在引發劑過硫酸胺（AP）提供自由基和催化劑四甲基乙二胺（TEMED）的作用下聚合而成。丙烯酰胺可由天然光線誘發聚合，所以其水溶液應貯藏在棕色瓶中，置低溫 4℃ 更佳。由于其水溶液穩定性較差，通常 2 個月內用完為好。
幾種雙向凝膠電泳蛋白質檢測方法的比較
蛋白質組研究要求有高分辨率的蛋白質分離及準確、靈敏的質譜鑒定技術。凝膠電泳中蛋白質的著色不僅影響蛋白質分離的分辨率，同時也影響后續的質譜鑒定。選擇適當的蛋白質染色法將有助于提高蛋白質組學研究結果的質量。蛋白質的染色常用的有4類：有機試劑染色、銀染、熒光染色及同位素顯色。其中有機試劑染色以考馬斯亮藍染