層析技術:生物化學實驗常用技術(3)
一、基本原理 是指混合物隨流動相流經固定相的層析柱時，混合物中各組分按其分子大小不同而被分離的技術。固定相是凝膠。凝膠是一種不帶電荷的具有三維空間的多孔網狀結構，凝膠的每個顆粒內部都具有很多細微的小孔，如同篩子一樣，小的分子可以進入凝膠網孔，而大的分子則被排阻于凝膠顆粒之外，因而具有分子篩的性質。當混合物樣品加入到凝膠的層析柱中時，樣品將隨洗脫液的流動而移動。這時的樣品一般作兩種運動：一是隨洗脫液垂直向下移動；二是作不定向擴散運動。分子量小的物質，在不定向擴散中可以進孔內部，然后再擴散出來，故流程長，通過柱子的速度慢，一般后流出層析柱；分子量大的物質，由于不能進入到凝膠孔內部，只能在凝膠顆粒之間移動，故流程短，先流出層析柱。這樣，分子量大小不同的物質就會因此得到分離。凝膠孔隙中的水稱內水，用Vi表示。凝膠顆粒空隙之間的水稱外水，用Vo表示，層析柱中凝膠顆粒的體積用Vg表示，柱床的總體積以Vt表示，即 ......閱讀全文
層析技術:生物化學實驗常用技術(3)
一、基本原理 是指混合物隨流動相流經固定相的層析柱時，混合物中各組分按其分子大小不同而被分離的技術。固定相是凝膠。凝膠是一種不帶電荷的具有三維空間的多孔網狀結構，凝膠的每個顆粒內部都具有很多細微的小孔，如同篩子一樣，小的分子可以進入凝膠網孔，而大的分子則被排阻于凝膠顆粒之外
層析技術:生物化學實驗常用技術(2)
在分配層析中，大多選用多孔物質作為支持物，利用它對極性溶劑的親和力，吸附某種極性溶劑作為固定相；用另一種非極性溶劑作為流動相。如果把待分離的混合物樣品點在多孔支持物上，在層析過程中，非極性溶劑沿支持物流經樣品點時，樣品中的各種混合物便會按分配系數大小流動相而向前移動。當遇到前方的固定相時，溶于流動相
層析技術:生物化學實驗常用技術(1)
層析技術是近代生物化學最常用的分離技術之一。它是利用混合物中各組分的理化性質（吸附力、分子形狀和大小、分子極性、分子親和力、分配系數等）的差異，在物質經過兩相中，不斷地進行交換、分配等過程。任何層析都具有兩個相，即固定相和流動相。固定相固定不動，流動相對固定相作單相的相對運動，從而推動樣品中各組分通
電泳技術：生物化學實驗常用技術3
三．凝膠孔徑的調節凝膠孔徑、機械性能(彈性)、透明度等在很大程度上取決于Acr和Bis二者的總濃度T%。T%越大，孔徑越小，機械強度則增加。凝膠的特性是分子篩效應。在聚合前調節單體的濃度來控制凝膠孔徑大小，有利于針對樣品分子大小，增加分辨力。為此可以根據分離樣品分子大小配制不同孔徑的凝膠。一般大孔膠
電泳技術：生物化學實驗常用技術2
瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳是一種以瓊脂糖凝膠為支持物的凝膠電泳，其分析原理與其它支持物電泳的最主要區別是：它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網絡結構，直接參與帶電顆粒的分離過程，在電泳中，物質分子通過空隙時會受到阻力，大分子物質在泳動時受到的阻力比小分子大，因此在凝膠電泳中，帶電
電泳技術：生物化學實驗常用技術1
帶電顆粒在電場作用下向著與其電性相反的電極移動的現象稱為電泳。如帶正電荷的粒子向負極移動，帶負電荷的粒子向正極移動。電泳技術是生物化學與分子生物學中的重要研究方法之一，利用電泳技術可分離許多生物物質，包括氨基酸、多肽、蛋白質、脂類、核苷、核苷酸及核酸等，并可用于分析物質的純度和分子量的測定等。電泳的
層析技術(Layeranalise－technique)(3)
3．平衡 將DEAE―纖維素放入0.0lMol/L pH 7.4 PB液中（即起始緩沖液），靜止1h，不時攪拌，待纖維素下沉后，傾去上清液或抽濾除去洗液，如此反復幾次至傾出液體的pH值與加入的PB液的pH值相近時為止。4．裝柱 層析柱的選擇要大小、長度適當。一般而言，柱長和柱直徑之比為10：1～20
分配層析技術和?常用支持物介紹
在支持物上形成部分互溶的兩相系統。一般是水相和有機溶劑相。常用支持物是硅膠、纖維素和淀粉等，這些親水物質能儲留相當量的水。被分離物質在兩相中都能溶解，但分配比率不同，展層時就會形成以不同速度向前移動的區帶。
生物化學實驗常用試劑的配制方法
1、0.5mol/L氫氧化鈉溶液 □組份濃度 0.5mol/L □配制量 2L □配置方法 1.準確稱取氫氧化鈉40g。 2.用去離子水溶解并稀釋至2L。 2、0.5mol/L鹽酸溶液 □組份濃度 0.5mol/L □配制量 2L □配置方法 1.準確量取鹽酸83.4mL。 2.用去離
凝膠過濾層析技術和?常用支持物介紹
支持物是人工合成的交聯高聚物，在水中膨脹后成為凝膠。凝膠內為內水層，凝膠周圍的水為外水層。控制交聯度以形成不同孔徑的網狀結構。交聯度小的孔徑大，交聯度大的孔徑小。凝膠只允許被分離物質中小于孔徑的分子進入，大于孔徑的分子被排斥在外水層，最先被洗脫下來。而進入孔徑的分子也按分子量大小大致分離成不同的區帶
生物化學實驗基本技術—破碎技術
除了某些細胞外的多肽激素和某些蛋白質與酶以外，對于細胞內或多細胞生物組織中的各種生物大分子的分離純化，都需要事先將細胞和組織破碎，使生物大分子充分釋放到溶液中，并不丟失生物活性。不同的生物體或同一生物體的不同部位的組織，其細胞破碎的難易不一，使用的方法也不相同，如動物臟器的細胞膜較脆弱，容易破碎，植
生物化學實驗基本技術：破碎技術
除了某些細胞外的多肽激素和某些蛋白質與酶以外，對于細胞內或多細胞生物組織中的各種生物大分子的分離純化，都需要事先將細胞和組織破碎，使生物大分子充分釋放到溶液中，并不丟失生物活性。不同的生物體或同一生物體的不同部位的組織，其細胞破碎的難易不一，使用的方法也不相同，如動物臟器的細胞膜較脆弱，容易破碎，植
生物化學實驗基本技術：破碎技術
除了某些細胞外的多肽激素和某些蛋白質與酶以外，對于細胞內或多細胞生物組織中的各種生物大分子的分離純化，都需要事先將細胞和組織破碎，使生物大分子充分釋放到溶液中，并不丟失生物活性。不同的生物體或同一生物體的不同部位的組織，其細胞破碎的難易不一，使用的方法也不相同，如動物臟器的細胞膜較脆弱，容易破碎，植
生物化學實驗基本技術：破碎技術
除了某些細胞外的多肽激素和某些蛋白質與酶以外，對于細胞內或多細胞生物組織中的各種生物大分子的分離純化，都需要事先將細胞和組織破碎，使生物大分子充分釋放到溶液中，并不丟失生物活性。不同的生物體或同一生物體的不同部位的組織，其細胞破碎的難易不一，使用的方法也不相同，如動物臟器的細胞膜較脆弱，容易破碎，植
層析技術
層析技術概述引言層析法又稱色層分析法或色譜法（Chromatography），它是在1903~1906年由俄國植物學家M. Tswett首先提出來的。他將葉綠素的石油醚溶液通過CaCO3管柱，并繼續以石油醚淋洗，由于CaCO3對葉綠素中各種色素的吸附能力不同，色素被逐漸分離，在管柱中出現了不
常用實驗動物介紹3
?28.NOD/Lt：(1)遺傳背景：①起源：在對ICR/Jcl小鼠進行近交培育的第6代時， 從白內障易感亞系分離出非肥胖糖尿病品系(nod)和非肥胖正常品系(NON)。在近交第20代時，首先發現NOD雌鼠有胰島素依賴性糖尿病。1988年從JAX引到IMLAS。②毛色和毛色基因：白化，AA、BB、c
生物化學實驗常用試劑的配制方法一
1、0.5mol/L氫氧化鈉溶液 □組份濃度 0.5mol/L □配制量 2L □配置方法 1.準確稱取氫氧化鈉40g。 2.用去離子水溶解并稀釋至2L。?2、0.5mol/L鹽酸溶液 □組份濃度 0.5mol/L □配制量 2L □配置方法 1.準確量取鹽酸83.4mL。 2.用去離子水稀釋至2L
生物化學實驗常用試劑的配制方法四
31、Locke氏溶液 □配制量 2L □配置方法 稱取18g氯化鈉，0.84g氯化鉀，0.48g氯化鈣，0.3g碳酸氫鈉，2g葡萄糖，用去離子水溶解定容至2000mL。?32、0.2mol/L的丁酸溶液 □組份濃度 0.2mol/L □配制量 1L □配置方法 1.量取18mL正丁酸試劑。 2.用
生物化學實驗常用試劑的配制方法二
11、20％乙酸溶液 □組份濃度 20％ □配制量 1.2L □配置方法 量取冰乙酸300mL，用去離子水稀釋至1200mL。?12、30％(W/V)Acrylamide □組份濃度 30％(W/V)Acrylamide 0.05％ □配制量 1L □配置方法 1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中
生物化學實驗常用試劑的配制方法三
21、45％乙醇溶液 □組份濃度 45％ □配制量 1L □配置方法 量取無水乙醇450mL，加入去離子水550mL，混勻。?22、5％的十二烷基硫酸鈉溶液 (W/V) □組份濃度 5％ □配制量 0.1L □配置方法 稱取5.0g十二烷基硫酸鈉，溶于100mL4％的乙醇溶液中。?23、三氯甲烷-異
生物化學與分子生物學最常用的實驗技術
分子細胞生物學研究所用的實驗技術有哪些分子診斷學的研究范疇包括：利用遺傳學、病理學、免疫學、生物化學、基因組學、蛋白質組學和分子生物學的理論和方法探討疾病發生和發展的分子機制。為整個疾病過程尋求特異的分子診斷指標，以及利用分子生物學技術為這些分子診斷指標建立臨床實用的檢測方法。細胞培養技術指的是細胞
實驗室常用技術參數資料（一）3
六、常用凝膠的技術參數 1．葡聚糖凝膠的某些技術數據,種類干顆粒直徑（μ）分子量分級范圍床體積毫升/克干分子篩得水值溶脹最少平衡時間（h）柱頭壓力（kPa）(2.5cm直徑柱)肽及球形蛋白質葡聚糖（線性分子）室溫沸水浴Sephadex G-1040～ 120～700～7002～ 31.0±0.
離子交換層析技術和?常用支持物介紹
支持物是人工交聯的帶有能解離基團的有機高分子，如離子交換樹脂、離子交換纖維素、離子交換凝膠等。帶陽離子基團的，如磺酸基（—SO3H）、羧甲基（—CH2COOH）和磷酸基等為陽離子交換劑。帶陰離子基團的，如DEAE—（二乙基胺乙基）和QAE—（四級胺乙基）等為陰離子交換劑。離子交換層析只適用于能在水中
生化實驗講義(理論部分)——層析技術（八）
離子交換劑的總交換容量通常以每毫克或每毫升交換劑含有可解離基團的毫克當量數（meq / mg或meq / ml）來表示。通常可以由滴定法測定。陽離子交換劑首先用HCl處理，使其平衡離子為H?。再用水洗至中性，對于強酸型離子交換劑，用NaCl充分置換出H?，再用標準濃度的NaOH滴定生成的HCl，
生化實驗講義(理論部分)——層析技術（七）
3.3 離子交換層析3.3.1 簡介離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。1848年，Thompson等人在研究土壤堿性物質交換
生化實驗講義(理論部分)——層析技術（一）
? 通過生物化學實驗應該做到：??? ⑴ 學習設計一個實驗的基本思路，掌握各個實驗的基本原理，學會嚴密地組織自己的實驗，合理地安排實驗步驟和時間。??? ⑵ 訓練實驗的動手能力，學會熟練地使用各種生物化學實驗儀器，包括各種天平、各種分光光度計、各種離心機、自動部分收集器、恒流泵、核酸蛋白檢測儀、冰凍
生化實驗講義(理論部分)——層析技術（六）
5. 洗脫速度洗脫速度也會影響凝膠層析的分離效果，一般洗脫速度要恒定而且合適。保持洗脫速度恒定通常有兩種方法，一種是使用恒流泵，另一種是恒壓重力洗脫。洗脫速度取決于很多因素，包括柱長、凝膠種類、顆粒大小等，一般來講，洗脫速度慢一些樣品可以與凝膠基質充分平衡，分離效果好。但洗脫速度過慢會造成樣品擴散加
生化實驗講義(理論部分)——層析技術（九）
3.4.3 親和吸附劑選擇并制備合適的親和吸附劑是親和層析的關鍵步驟之一。它包括基質和配體的選擇、基質的活化、配體與基質的偶聯等等。這里主要介紹一些基本的原理，關于活化、偶聯等過程的具體實驗操作可以參閱本書后面的實驗部分或相應的參考書。基質⑴ 基質的性質基質構成固定相的骨架，親和層析的基質應該具有以
生化實驗講義(理論部分)——層析技術（三）
3.1 層析技術概述3.1.1 引言層析法又稱色層分析法或色譜法（Chromatography），它是在1903-1906年由俄國植物學家M. Tswett首先系統提出來的。他將葉綠素的石油醚溶液通過CaCO3管柱，并繼續以石油醚淋洗，由于CaCO3對葉綠素中各種色素的吸附能力不同，色素被逐漸分
生化實驗講義(理論部分)——層析技術（二）
? 1.2 實驗室規則??? ⑴ 實驗前必須認真預習實驗內容，明確本次實驗的目的和要求，掌握實驗原理，寫好實驗預習報告，否則，不能進行實驗。??? ⑵ 實驗時自覺遵守實驗室紀律，保持室內安靜，不大聲說笑和喧嘩。??? ⑶ 實驗過程中要聽從教師指導，認真按照實驗步驟和操作規程進行實驗。若想改進和設計新