轉化子DNA的快速鑒定—快速細胞破碎法
目的：1、掌握用細胞破碎液裂解菌體細胞，并通過電泳的方法細胞中不同分子量質粒的方法；2、從實驗六的氨芐青霉素抗性轉化子中篩選僅含一個拷貝目的基因的重組載體。原理：挑選8～10個白菌落接于平板過夜培養。利用破碎細胞緩沖液中的十二烷基硫酸納（SDS）在37℃溶解膜蛋白，使細胞破裂，然后高速離心，將含有質粒DNA的上清夜直接進行上樣、電泳和分離，理論上只要篩選的轉化子足夠多，即可找到僅含一個拷貝目的基因的重組質粒。挑選8～10個白菌落接于平板過夜培養。利用破碎細胞緩沖液中的十二烷基硫酸納（SDS）在37℃溶解膜蛋白，使細胞破裂，然后高速離心，將含有質粒DNA的上清夜直接進行上樣、電泳和分離，理論上只要篩選的轉化子足夠多，即可找到僅含一個拷貝目的基因的重組質粒。一、儀器超凈工作臺；微量可調式移液器；振蕩培養箱；離心機；電泳儀；恒溫水溶箱二、試劑LB培養基、Cracking Gel緩沖液[1mol/L Tris-HCl(pH6.8)10m......閱讀全文
轉化子DNA的快速鑒定—快速細胞破碎法
目的：1、掌握用細胞破碎液裂解菌體細胞，并通過電泳的方法細胞中不同分子量質粒的方法；2、從實驗六的氨芐青霉素抗性轉化子中篩選僅含一個拷貝目的基因的重組載體。原理：挑選8～10個白菌落接于平板過夜培養。利用破碎細胞緩沖液中的十二烷基硫酸納（SDS）在37℃溶解膜蛋白，使細胞破裂，然后高速離心，將含有質
弱化子的定義
弱化子(attenuator)是指原核生物操縱子中能顯著減弱甚至終止轉錄作用的一段核苷酸序列,該區域轉錄產物能形成不同的二級結構,利用原核微生物轉錄與翻譯的偶聯機制對轉錄進行調節。
快速細胞破碎法實驗步驟和轉化子DNA的酶切鑒定
快速細胞破碎法實驗步驟1、 挑取轉化平板上的單菌接種于含相應抗生素的2ml LB中，37℃振蕩培養至A590值為0.6～0.8。2、 取1ml菌液至1.5ml Eppendorf管中，9000rpm離心9min，去盡上清。3、 加入70μl Cracking Gel緩沖液[1mol/L Tris –
弱化子的功能特點
弱化子(attenuator)是指原核生物操縱子中能顯著減弱甚至終止轉錄作用的一段核苷酸序列，該區域轉錄產物能形成不同的二級結構，利用原核微生物轉錄與翻譯的偶聯機制對轉錄進行調節。
弱化子的功能介紹
弱化子(attenuator)是指原核生物操縱子中能顯著減弱甚至終止轉錄作用的一段核苷酸序列，該區域轉錄產物能形成不同的二級結構，利用原核微生物轉錄與翻譯的偶聯機制對轉錄進行調節。
分子遺傳學詞匯弱化子
中文名稱：弱化子外文名稱：attenuator定義：弱化子(attenuator)是指原核生物操縱子中能顯著減弱甚至終止轉錄作用的一段核苷酸序列，該區域轉錄產物能形成不同的二級結構，利用原核微生物轉錄與翻譯的偶聯機制對轉錄進行調節。
關于弱化子的基本信息介紹
弱化子(attenuator)是指原核生物操縱子中能顯著減弱甚至終止轉錄作用的一段核苷酸序列，該區域轉錄產物能形成不同的二級結構，利用原核微生物轉錄與翻譯的偶聯機制對轉錄進行調節。 是在研究大腸桿菌的色氨酸操縱子表達弱化現象中發現的。在trp mRNA 5，端trp正基因的起始密碼前有一個長1
宮頸未分化子宮肉瘤病例報告
宮頸肉瘤發病率低，預后不良，文獻少有報道，而原發于宮頸的未分化子宮肉瘤更是罕見報道。該病臨床表現主要是異常陰道流血、宮頸腫物、盆腹腔包塊及其引起的壓迫癥狀。病理診斷是確診的金標準。手術治療是主要的治療方式，術后可輔助放化療。青島市市立醫院近期診治1例宮頸原發未分化子宮肉瘤合并骶前腫塊患者，本文對其臨
分子遺傳學詞匯轉錄弱化子
中文名稱：轉錄弱化子英文名稱：transcriptional attenuator定 義：DNA中與轉錄提前終止有關的一段核苷酸序列。應用學科：遺傳學（一級學科），分子遺傳學（二級學科）
企業為何“不想轉”“不敢轉”“不會轉”？
企業“不想轉”“不敢轉”“不會轉”，資源要素支撐相對不足，高端化、智能化、綠色化、融合化水平參差不齊，轉型升級環境尚待優化……7月4日，在“粵商·省長面對面協商座談會”上，關于傳統產業轉型升級的討論熱火朝天。 習近平總書記在二十屆中央財經委員會第一次會議上強調，“堅持推動傳統產業轉型升級，不能
質粒的轉化及轉化子的鑒定實驗
實驗方法原理 熱激法：大腸桿菌在0 ℃ CaCl2低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形，轉化混合物中的DNA形成抗DNase的羥基－鈣磷酸復合物粘附于細胞表面，經42 ℃短時間熱沖擊處理，促進細胞吸收DNA復合物，在豐富培養基上生長數小時后，球狀細胞復原并分裂增殖。在被轉化的細胞中，重組子基因得到表
質粒DNA導入細菌細胞實驗——CaCl2轉化法
實驗材料菌落質粒DNA試劑、試劑盒CaCl2儀器、耗材培養基平板實驗步驟1. ?接種一個單菌落于50 ml LB培養液中，于37°C中速搖床培養過夜（250 r/min)。2. ?往一個2 L的燒瓶中加人400 ml LB培養液，再加入4 ml過夜培養液，于37°C搖床（250 r/min）培養至
基因的轉移與重組體的篩選和鑒定1
第一節 轉化基因片段在體外只是一段核酸分子，是化學物質，無法表現出遺傳物質的生命活性。只有當其存在于活細胞后，生命的特征才能充分展示出來。在分子克隆實踐中，在體外操作的核酸分子只有進入細胞以后才能達到克隆的目的。一、重組DNA分子轉入原核生物細胞1. 重組質粒DNA分子轉化大腸桿菌轉化（transf
大腸桿菌轉化子有大有小原因分析
?? 近日，我司實驗室經常接到客戶這樣的疑問，他們在測試大腸桿菌轉化子時，大腸桿菌轉化子有大有小，結果詭異，想咨詢一下具體原因。??? 這情況我遇到過，尤其菌液PCR時候，有的強有的弱，有的帶大小還不一樣。我沒有具體研究過啥愿意，但把大小一樣的那個送去測序，一般都是正確的。??? 關于你的這個情況，
畢赤酵母遺傳霉素抗性轉化子的篩選
實驗概要本實驗介紹了畢赤酵母遺傳霉素抗性轉化子的3種篩選方法。實驗步驟1. (去壁細胞)方法：從含HIS 轉化子的平板開始?? 1) 用滅菌刮片將含有HIS 轉化子的頂層瓊脂最上層刮下，放入無菌的50ml 離心管中。?? 2) 加入10-20ml滅菌水，量應為瓊脂的兩倍，劇烈振蕩1-2min。??
重組DNA的轉化實驗原理和操作步驟
實驗目的制備出感受態細胞，把體外重組的DNA引入受體細胞，使受體菌具有新遺傳性，并從中選擇出轉化子。實驗原理感受態就是細菌吸收轉化因子的生理狀態，只有發展為感受態的細胞才能穩定攝取外來的DNA分子。pUC18的LacZ基因區域當有DNA片段插入時，LacZ基因失活，轉化進入大腸桿菌并在含有IPTG和
濕轉和干轉，哪個方法更好？
對于一個完美的westernblot實驗，蛋白在聚丙烯凝膠中根據天然分子量進行分離，蛋白被很好的從凝膠上轉移到固相支持物上，然后通過特異性的抗體進行免疫檢測。對于轉印來說，使用濕轉的方法是比較好的，因為凝膠和膜都能夠完全浸沒在轉印buffer中，在半干轉的條件下，轉印是在兩個電極板之間發生，這種類型
轉管培養法與轉瓶培養
轉管培養法（roller tube culture）是Gey 提出的，實驗室常用，為了擴大細胞產量，將試管改用轉瓶，故稱轉瓶培養，其培養方法是一樣的，試管或轉瓶固定在支加上，傾斜度為5°～10°左右，或將轉瓶放在一排排轉軸之間，使轉瓶隨著轉軸以每小時6～12 轉緩慢轉動。細胞貼附于玻璃壁
濕轉和干轉，哪個方法更好
對于一個完美的westernblot實驗，蛋白在聚丙烯凝膠中根據天然分子量進行分離，蛋白被很好的從凝膠上轉移到固相支持物上，然后通過特異性的抗體進行免疫檢測。 對于轉印來說，使用濕轉的方法是比較好的，因為凝膠和膜都能夠完全浸沒在轉印buffer中，在半干轉的條件下，轉印是在兩個電極板之間發
Western－轉膜時用干轉還是濕轉效果比較好
關鍵看效果怎么細分，干轉，速度快，效率稍低，濕轉，速度比較慢，轉移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量為主，干轉就挺好的，效率非常高，幾分鐘就做完了。分子量特別大，又沒有其他人的方案做參考，可以先試試濕轉。就是幾個小時等得比較痛苦。好幾個人做的話，真是等到花兒也謝了。至于說效果，不是
做western轉膜，用濕轉電泳，還是半干轉電泳好
半干轉要用專門的半干轉膜儀，而濕轉用電泳儀配附件即可；半干轉所需時間較短，但控制不好，中間發熱比較大容易把膜和膠烘壞；而濕轉耗時較長，尤其對大分子量的蛋白轉膜效果較好。相對來講，還是濕法轉膜的實驗室多一些。
Western－轉膜時用干轉還是濕轉效果比較好？
關鍵看效果怎么細分，干轉，速度快，效率稍低，濕轉，速度比較慢，轉移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量為主，干轉就挺好的，效率非常高，幾分鐘就做完了。分子量特別大，又沒有其他人的方案做參考，可以先試試濕轉。就是幾個小時等得比較痛苦。好幾個人做的話，真是等到花兒也謝了。至于說效果，不是
DNA的轉化實驗
體外通過基因工程手段所構建的含目的基因的重組質粒，選用轉化和篩選技術， 可獲得含重組的陽性克隆。在此陽性克隆中，DNA可在生物體系中大量擴增，繁殖， 保存以及表達目的基因的產物，這是ＰＣＲ體外擴增DNA所不能替代的。配合DNA重組技術，所獲得的，不同目的需要的陽性菌株已廣泛應用于科研，醫藥生產和生物
上海微系統所在半金屬極化子研究中取得進展
原文地址：http://www.cas.cn/syky/202103/t20210318_4781439.shtml 上世紀60年代，有學者從理論上預測了固體材料中一種新的復合粒子，由空穴與等離激元的強耦合而產生的等離激元極化子，為凝聚態領域的復雜多體理論拓展了一個重要的研究分支。但是，普通金屬中
質粒的轉化及轉化子的鑒定實驗——熱激法
質粒的轉化是指將質粒或以它為載體構建的重組子導入細菌的過程。將連接產物轉化到感受態細胞中，實現重組克隆的增殖，便于后續分子操作（1）用于基因的克隆增殖；（2）篩選目的細胞。實驗方法原理熱激法：大腸桿菌在0 ℃?CaCl2低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形，轉化混合物中的DNA形成抗DNase的羥基－鈣磷酸
一例未分化子宮肉瘤超聲表現病例分析
病例女，71歲，絕經20年。因陰道不規則出血20天入院。婦科查體：宮頸萎縮光滑；宮體為前位，如孕8周大小；雙附件區未觸及異常。經陰道超聲檢查（圖1）：子宮前位，大小81mm×62mm×60mm，宮腔內見65mm×53mm×50mm以實為主的混合性腫物，形態不規則，與肌壁分界欠清，肌壁變薄，厚度2.2
質粒的轉化及轉化子的鑒定實驗——電轉化法
實驗方法原理電轉化法：外加于細胞膜上的電場造成細胞膜的不穩定，形成電穿孔，不僅有利于離子和水進入細菌細胞，也有利于孔DNA等大分子進入。同時DNA在電場中形成的極性對于它運輸進細胞也是非常重要的。實驗材料外源片段與載體的連接產物大腸桿菌感受態細胞試劑、試劑盒X-galAmpLA培養基水抗生素儀器、耗
克隆化酵母DNA的操作實驗——質粒缺口修復
實驗材料酵母實驗步驟1. ?將目的基因亞克隆到YRp質粒，通過基因內的兩個限制性位點在基因中創造一個缺口區，在缺口兩側留下≥100~250 bp 的同源區，凝膠電泳純化質粒骨架大片段。?2. ?用1~10 μg?缺口質粒DNA轉化待拯救的含突變等位基因的酵母菌株，通過YRp質粒上的選擇基因進行選擇，
電泳、轉膜
轉膜是把DNA從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物（一般是尼龍膜）上固定，是進行各種后續研究（如RFLP分析，陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究）的前提。實驗目的：掌握Southern blotting的原理及操作步驟。實驗原理：1. 轉膜的方式： 向上的毛細管轉移 向下的毛細管轉移 同時向
為什么質粒酵母電轉化不進去
釀酒酵母的電轉感受態制備方法和電轉化方法(1)接種工業酒精酵母至30 mL液體YEPD培養基，30度培養12 h；(2)取培養物以1%的接種量轉接到30 mL新鮮YEPD液體培養基中，30度培養8 h，使菌體達到同步生長狀態；(3)將酵母培養物置于冰上放置30 min后，6,000 r/min離心5