分子雜交——Southern基因檢測2
C．轉移按凝膠的大小剪裁NC膜或尼龍膜并剪去一角作為標記，水浸濕后，浸入轉移液中5min。剪一張比膜稍寬的長條Whatman 3mm濾紙作為鹽橋，再按凝膠的尺寸剪3-5張濾紙和大量的紙巾備用。按下圖所示進行轉移。（ 轉移過程一般需要8-24hr，每隔數hr換掉已經濕掉的紙巾。轉移液用20×SSC。注意在膜與膠之間不能有氣泡。整個操作過程中要防止膜上沾染其他污物。）D. 轉移結束后取出NC膜，浸入6×SSC溶液數min，洗去膜上沾染的凝膠顆粒，置于兩張濾紙之間，80°C烘2hr，然后將NC膜夾在兩層濾紙間，保存于干燥處。5、探針標記進行Southern 雜交的探針一般用放射性物質標記或用地高辛標記。放射性標記靈敏度高，效果好；地高辛標記沒有半衰期，安全性好。這里介紹放射性標記。探針的標記方法有隨機引物法、切口平移法和末端標記法，有一些試劑盒可供選擇，操作也很簡單。以下為Promega公司隨機引物試劑盒提供的標記步驟：A．取......閱讀全文
分子雜交——Northern基因檢測
實驗概要Northern雜交采用瓊脂糖凝膠電泳，將分子量大小不同的RNA分離開來，隨后將其原位轉移至固相支持物（如尼龍膜、硝酸纖維膜等）上，再用放射性（或非放射性）標記的DNA或RNA探針，依據其同源性進行雜交，最后進行放射自顯影（或化學顯影），以目標RNA所在位置表示其分子量的大小，而其顯影強度則
分子雜交——Southern基因檢測
實驗概要將待檢測的DNA樣品固定在固相載體上，與標記的核酸探針進行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號。通過Southern雜交可以判斷被檢測的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。該項技術廣泛被應用在遺傳病檢測、DNA指紋分析和PCR產物判斷等研究中。但由于該技
分子雜交——Southern基因檢測2
C．轉移按凝膠的大小剪裁NC膜或尼龍膜并剪去一角作為標記，水浸濕后，浸入轉移液中5min。剪一張比膜稍寬的長條Whatman 3mm濾紙作為鹽橋，再按凝膠的尺寸剪3-5張濾紙和大量的紙巾備用。按下圖所示進行轉移。（ 轉移過程一般需要8-24hr，每隔數hr換掉已經濕掉的紙巾。轉移液用20×S
分子雜交基因探針的類型介紹
分子雜交基因探針根據標記方法不同可粗分為放射性探針和非放射性探針兩大類，根據探針的核酸性質不同又可分為DNA探針，RNA探針，cDNA探針，cRNA探針及寡核苷酸探針等幾類，DNA探針還有單鏈和雙鏈之分。
分子雜交
一、雜交通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的
分子雜交基因所用DNA探針應用介紹
DNA探針是最常用的核酸探針，指長度在幾百堿基對以上的雙鏈DNA或單鏈DNA探針。現已獲得DNA探針數量很多，有細菌、病毒、原蟲、真菌、動物和人類細胞DNA探針。這類探針多為某一基因的全部或部分序列，或某一非編碼序列。這些DNA片段須是特異的，如細菌的毒力因子基因探針和人類Alu探針。這些DNA探針
分子雜交法進行基因定位的方法介紹
分子雜交和體細胞遺傳學相結合的方法也可以用來測定人的基因的絕對位置。用體細胞遺傳學方法，可以得到只含有某一條人類染色體的人－倉鼠雜種細胞的克隆。然后可以進一步取得這一人類染色體發生各種缺失的克隆。把從這一系列缺失克隆中提取出來的 DNA吸附在硝酸纖維素濾膜上。再把人的基因文庫中的各個基因的 DNA片
分子雜交儀
分子雜交儀（又名：分子雜交箱、分子雜交爐）廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性、定量檢測和疾病的診斷等方面。因而它不僅在分子生物學領域中具有廣泛地應用，而且在臨床診斷上的應用也日趨增多。
分子雜交儀
分子雜交儀（又名：分子雜交箱、分子雜交爐）廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性、定量檢測和疾病的診斷等方面。因而它不僅在分子生物學領域中具有廣泛地應用，而且在臨床診斷上的應用也日趨增多。
分子雜交技術
分子雜交技術? 互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。 雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總R
分子雜交技術Northern雜交的簡介
Northern雜交與Southern雜交很相似。主要區別是被檢測對象為RNA,其電泳在變性條件下進行,以去除RNA中的二級結構,保證RNA完全按分子大小分離。變性電泳主要有3種:乙二醛變性電泳、甲醛變性電泳和羥甲基汞變性電泳。電泳后的瓊脂糖凝膠用與Southern轉移相同的方法將RNA轉移到硝
分子雜交方式介紹
1、固相雜交將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板等。由于固相雜交后，未雜交的游離片段可容易地漂洗除去，膜上留下的雜交物容易檢測和能防止靶DNA自我復性等優點，所以最為常用。常用的固相雜交類型有：菌落原位雜交、
分子雜交技術－－1
互補的核苷酸序列通過Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測。 雜交的雙方是所使用探針和要檢測的核酸。該檢測對象可以是克隆化的基因組DNA,也可以是細胞總DNA或總RNA。根據使用的方
分子雜交技術－2
一、Southern雜交?Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟: (1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。? (2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。? (3) 預雜交濾
分子雜交技術原理
不同的DNA片段之間，DNA片段與RNA片段之間，如果彼此間的核苷酸排列順序互補也可以復性，形成新的雙螺旋結構。這種按照互補堿基配對而使不完全互補的兩條多核苷酸相互結合的過程稱為分子雜交。分子雜交（molecular hybridization）確定單鏈核酸堿基序列的技術。其基本原理是待測單鏈核酸與
分子雜交的分類
分子雜交基因探針根據標記方法不同可粗分為放射性探針和非放射性探針兩大類，根據探針的核酸性質不同又可分為DNA探針，RNA探針，cDNA探針，cRNA探針及寡核苷酸探針等幾類，DNA探針還有單鏈和雙鏈之分。下面分別介紹這幾種探針。DNA探針DNA探針是最常用的核酸探針，指長度在幾百堿基對以上的雙鏈DN
分子雜交技術（四）
六、核酸分子雜交實驗因素的優化 （一）探針的選擇 根據不同的雜交實驗要求，應選擇不同的核酸探針。在大多數情況下，可以選擇克隆的DNA或cDNA雙鏈探針。但是在有些情況下，必須選用其它類型的探針如寡核苷酸探針和RNA探針。例如，在檢測靶序列上的單個堿基改變時應選用寡核苷酸探針，在檢測單鏈靶序列時應
分子雜交儀概述
分子雜交儀又稱“分子雜交爐”或“分子雜交箱”根據不同實驗的需要可以選擇不同的規格型號的雜交儀。是現代實驗室采用雜交技術的理想設備，可替代塑料雜交袋和水浴搖床，并避免雜交袋破損帶來污染危險。雜交爐采用微機控溫精確，爐內空氣循環裝置設計獨特，升溫速度快等特點。廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、
分子雜交儀原理
分子雜交儀其基本原理就是應用核酸分子的變性和復性的性質,使來源不同的DNA(或RNA)片段,按堿基互補關系形成雜交雙鏈分子(heteroduplex)。雜交雙鏈可以在DNA與DNA鏈之間,也可在RNA與DNA鏈之間形成。核酸分子雜交是基因診斷的最基本的方法之一。它的基本原理是：互補的DNA單鏈能夠在
概述/分子雜交儀
分子雜交儀又稱“分子雜交爐”或“分子雜交箱”根據不同實驗的需要可以選擇不同的規格型號的雜交儀。是現代實驗室采用雜交技術的理想設備，可替代塑料雜交袋和水浴搖床，并避免雜交袋破損帶來污染危險。雜交爐采用微機控溫精確，爐內空氣循環裝置設計獨特，升溫速度快等特點。??????廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切
原理/分子雜交儀
分子雜交儀其基本原理就是應用核酸分子的變性和復性的性質,使來源不同的?DNA(或RNA)片段,按堿基互補關系形成雜交雙鏈分子(heteroduplex)。雜交雙鏈可以在DNA與DNA鏈之間,也可在RNA與DNA鏈之間形成。 核酸分子雜交是基因診斷的最基本的方法之一。它的基本原理是：互補的DNA單鏈能
分子雜交技術（三）
五、核酸分子雜交的類型 隨著基因工程研究技術的迅猛發展，新的核酸分子雜交類型和方法在不斷涌現和完善。核酸分子雜交可按作用環境大致分為固相雜交和液相雜交兩種類型。固相雜交是將參加反應的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，一條反應核酸游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板
分子雜交技術（二）
四、核酸探針的標記和檢測 分子雜交是核酸鏈間堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的分子進行標記，這條鏈就稱為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法是
分子雜交技術（一）
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
分子雜交技術（四）
六、核酸分子雜交實驗因素的優化 （一）探針的選擇 根據不同的雜交實驗要求，應選擇不同的核酸探針。在大多數情況下，可以選擇克隆的DNA或cDNA雙鏈探針。但是在有些情況下，必須選用其它類型的探針如寡核苷酸探針和RNA探針。例如，在檢測靶序列上的單個堿基改變時應選用寡核苷酸探針，在檢測單鏈靶序列時應
分子雜交技術（二）
四、核酸探針的標記和檢測 分子雜交是核酸鏈間堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的分子進行標記，這條鏈就稱為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法是
分子雜交技術（一）
一、概述 前面已經介紹了核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序，通過堿基對之間非共價鍵（主要是氫鍵）的形成即出現穩定的雙鏈區，這是核酸分子雜交的基礎。雜交分子的形成并不要求兩條單鏈的堿基順序完全互補，所以不同來源的核酸單鏈只要彼此之間有一定程度的互補順序（即某種程度的同源性）就可以形成雜交雙鏈。分子雜交
分子雜交儀概述
分子雜交儀又稱“分子雜交爐”或“分子雜交箱”根據不同實驗的需要可以選擇不同的規格型號的雜交儀。是現代實驗室采用雜交技術的理想設備，可替代塑料雜交袋和水浴搖床，并避免雜交袋破損帶來污染危險。雜交爐采用微機控溫精確，爐內空氣循環裝置設計獨特，升溫速度快等特點。 廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜
DNA分子雜交原理
DNA分子雜交的原理是,具有互補堿基序列的DNA分子,可以通過堿基對之間形成氫鍵等,形成穩定的雙鏈區.如果兩DNA有一段相同堿基的話,就能形成氫鍵,且形成穩定的雙鏈區
分子雜交儀簡介
分子雜交儀（又名：分子雜交箱、分子雜交爐）廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性、定量檢測和疾病的診斷等方面。因而它不僅在分子生物學領域中具有廣泛地應用，而且在臨床診斷上的應用也日趨增多。 分子雜交儀又稱“分子雜交爐”或“分子雜交箱”根據不同實驗的需要可以選擇不