UV法蛋白質定量分析簡述
這種方法是在280 nm波長,直接測試蛋白。選擇 Warburg公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。 蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質,一般要消除 320 nm的“背景”信息,設定此功能“開”。與測試核酸類似,要求 A 280 的吸光值至少大于 0.1A,最佳的線性范圍在 1.0-1.5 之間。實驗中選擇 Warburg 公式顯示樣品濃度時,發現讀數“漂移”。這是一個正常的現象。事實上,只要觀察A 280 的吸光值的變化范圍不超過 1%,表明結果非常穩定。 漂移的原因是因為 Warburg 公式吸光值換算成濃度,乘以一定的系數,只要吸光值有少許改變,濃度就會被放大,從而顯得結果很不穩定。 蛋白質直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質的干......閱讀全文
UV法蛋白質定量分析簡述
這種方法是在280 nm波長,直接測試蛋白。選擇 Warburg公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。 蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質,一般要消除 320 nm的“背景”信息,設定此功能“開”
蛋白質的直接定量(UV法)
蛋白質的直接定量(UV法)??? 分光光度計原理說明的這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質,一般要消除
蛋白質的直接定量(UV法)簡述
這種方法是在280 nm波長,直接測試蛋白。選擇 Warburg公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質,一般要消除 320 nm的“背景”信息,設定此功能“開”。與
COD測量中的UV法
UV法在線COD監測儀可以實現快速、準確、經濟的COD在線監控。儀器的基本測量原理是基于污水中的有機物對紫外線的吸收。含有共軛雙鍵或多環芳烴的有機物溶解在水中時,對紫外光有吸收作用。因此,通過測量這些有機物對254nm紫外光的吸收程度,我們就可以評估水體被這些有機物污染的程度。應用領域包括飲用水、
COD測量中的UV法
?? UV法在線COD監測儀可以實現快速、準確、經濟的COD在線監控。儀器的基本測量原理是基于污水中的有機物對紫外線的吸收。含有共軛雙鍵或多環芳烴的有機物溶解在水中時,對紫外光有吸收作用。因此,通過測量這些有機物對254nm紫外光的吸收程度,我們就可以評估水體被這些有機物污染的程度。應用領域包括飲用
分光光度計用于蛋白質的直接定量(UV法)應用
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg 公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質,一般要消除320nm 的“背景”信息,設定此功能“開”。與測試核酸
分光光度計應用蛋白質的直接定量(UV法)介紹
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg 公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應的換算方法,將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質。由于緩沖液中存在一些雜質,一般要消除320nm 的“背景”信息,設定此功能“開”。與測試核酸
RRLCUV/MS中藥質控法
本文介紹了將高分離度快速液相色譜法紫外-可見檢測器和四極桿質譜聯用,分析各種中藥(TCM)及中藥制劑的方法,對不同中藥用UV和MS檢測所得到的色譜圖進行了比較,將UV和MS圖譜結合進行目標化合物的鑒定,該方法較傳統控制單一組分的方法更為可靠。 我國擁有長期使用中藥和中藥制劑的歷史,但由于缺
蛋白質定量分析(Protein-determination)
Bradford 的dye-binding method 是利用Coomassie brilliant blue G-250 (CBG) 可與蛋白質結合而變色的特性來定量 (Bradford, 1976);若試樣中的蛋白質量較多,則結合到蛋白質而變色的CBG 也多,因而呈色較深。下例是以一組
蛋白質定量分析(Protein-determination)
實驗概要本文介紹了蛋白質定量分析(Protein determination) Bradford 的dye-binding method的原理、樣品配制及操作步驟等。實驗原理Bradford ?的dye-binding method 是利用Coomassie brilliant blue G-250
UV法COD在線監測儀測量原理
UV法COD在線監測儀測量原理: ? 測量原理是基于紫外吸收法,流通池中的水路被氙燈的紫外光照射。紫外光的某些組份通過流通池而被吸收,從而檢測和分析出來。然后,根據比爾-朗伯(Beer-Lambert)定律,以不飽和有機分子在(COD在UV254nm,NO3是在UV220nm,色度在UV35
什么是定量分析法
定量分析法是化學分析中用得最多的方法.這是對已知成分的物質的量進行測定的分析,通常用的是容量分析法.定量分析由于要精確地確定所分析的成分的含量,因此添加試劑都要有量的控制,特別是參與反應的成分都是通過容量滴定管加入并計量的,因此定量分析也叫化學滴定法.同時,根據分析所依據的化學反應的原理而有絡合物滴
色譜定量分析之內標法
? 內標法是色譜定量分析中是一種重要技術。使用內標法時,在樣品中加入一定量的標準物質,它可被色譜拄所分離,又不受試樣中其它組分峰的干擾,只要測定內標物和待測組分的峰面積與相對響應值,即可求出待測組分在樣品中的百分含量。 內標物的選擇 采用內標法定量時,內標物的選擇是一項十分重要的工作
色譜法的定量分析
定量分析色譜峰的大小由峰的高度或峰的面積確定。可用手工的方法測量峰高,和以峰高h與峰高一半處的峰寬ω┩的乘積表示峰面積。A=hω┩。新型的色譜儀都有積分儀或微處理機給出更精確的色譜峰高或面積。應該注意,組分進入檢測器產生的相應的色譜信號大小(峰高或峰面積)隨所用檢測器類別和載氣的不同而異,有時甚至受
蛋白質的定量測定——紫外(UV)吸收測定法
實驗原理蛋白質分子中所含酪氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵,使蛋白質在280nm波長處有最大吸收值。在一定濃度范圍內,蛋白質溶液的光吸收值(A280)與其含量成正比關系,可用作定量測定。紫外線吸收法測定蛋白質含量的優點是迅速,簡便,不消耗樣品,低濃度鹽類不干擾測定。因此,廣泛應用在柱層析分離中蛋白
色譜定量分析中-選內標法or外標法?
? 色譜分析的重要作用之一是對樣品定量。而色譜法定量的依據是:組分的重量或在載氣中的濃度與檢測器的響應信號成正比。常見定量分析方法分為面積歸一化法、內標法、外標法、標準曲線法等。大家常常容易傻傻分不清楚的莫過于內標法、外標法了。 以內標法為例,選一與欲測組分相近但能完全分離的組分做內標物(當
可以用紫外分光光度法對蛋白質進行定量分析嗎
可以,而且實際上也是這么干的。不過用紫外分光光度法來分析有兩種,一種是直接把蛋白質或氨基酸溶液在OD280下看峰,高級一點的如nanodrop這種機器就可以直接給出蛋白濃度,但這種方法極易受到抽提蛋白時去污劑的影響而出現嚴重偏差,所以如果是在緩沖液中的純蛋白是可以這么檢測定量的,比如買來的抗體就會提
定量分析中怎樣選擇內標法或外標法
選一與欲測組分相近但能完全分離的組分做內標物(當然是樣品中沒有的組分),然后配制欲測組分和內標物的混合標準溶液,進樣得相對校正因子。再將內標物加入欲測組分的樣品中,進樣后測得欲測組分和內標物的定量參數。用內標法公式計算即可。內標法是將一定量的純物質作內標物,加入到準確稱量的試樣中,根據被測試樣和內標
UV-Shadowing
UV shadowing is a technique for visualizing nucleic acids separated on acrylamide/urea gels. The technique utilizes shortwave UV light (254 nm) and a
氨基酸與蛋白質的定量分析
都是含量的檢測,不一樣就是蛋白質與氨基酸的含量檢測都是含氮量檢測,因此蛋白質含氮量肯定比氨基酸的含氮量要低,蛋白質的中含有其他的化學基,但作為含氮量的檢測,他們屬于同一事.
標準曲線法的定量分析方法介紹
標準曲線法,也稱外標法或直接比較法,是一種簡便、快速的定量方法。與分光光度分析中的標準曲線法相似,首先用欲測組分的標準樣品繪制標準曲線。 用標準樣品配制成不同濃度的標準系列,在與待測組分相同的色譜條件下,等體積準確進樣,測量各峰的峰面積或峰高,用峰面積或峰高對樣品濃度繪制標準曲線,此標準曲線應
常見藥品定量分析方法外標法
外標法是《中國藥典》(2010版)采用色譜法進行含量測定時最常用的方法。按各品種項下的規定,精密稱(量)取對照品和供試品,配制成溶液,分別精密取一定量,注入儀器,記錄色譜圖,測量對照品和供試品待測成分的峰面積(或峰高),按下式計算含量:【例1】HPLC外標法測定阿司匹林泡騰片含量。色譜條件與系統適用
色譜儀定量分析之內標法
色譜儀定量分析的內標法是利用被測組分與內標物的的相對校正因子的比值不變進行定量的方法。一、計算方法:??????? mi/ms =(fi′Ai)/(fs′As)??????? Ci% =(mi/m)×100% =(fi′Aims)/(fs′Asm)×100% =(fi′/fs′)×(Ai/As)×(
色譜定量分析中怎樣選擇內標法或外標法?
選一與欲測組分相近但能完全分離的組分做內標物(當然是樣品中沒有的組分),然后配制欲測組分和內標物的混合標準溶液,進樣得相對校正因子。再將內標物加入欲測組分的樣品中,進樣后測得欲測組分和內標物的定量參數。用內標法公式計算即可。 內標法是將一定量的純物質作內標物,加入到準確稱量的試樣中,根據被
何謂內標法,光譜定量分析時為何要采用內標法
什么是內標法內標法是將一定重量的純物質作為內標物加到一定量的被分析的樣品混合物中,然后,對含有內標物的樣品進行色譜分析,分別測定內標物和待測組分的峰面積或是峰高及相對的校正因子,按照公式和方法就可以求出被測組分在樣品中的百分含量。為什么要采用內標法內標法可以克服樣品中一些基質的干擾,使測定更準確,因
色譜定量分析歸一化法、內標法、外標法及標準加入法比較
歸一化法 把所有出峰的組分含量之和按100%計的定量方法,稱為歸一化法。 各成分校正因子一致時可用該法,該法簡便、準確,特別是進樣量不容易準確控制時,進樣濃度及進樣量的變化的影響很小。 其他操作條件,如流速、柱溫等變化對定量結果的影響也很小。GC應用廣于HPLC。 外標法(標準曲線法、直
色譜定性與定量分析(歸一化法、內標法和外標法)
色譜法是根據色譜峰的面積或高度進行定量分析的。色譜定量計算方法很多,目前比較廣泛應用的有歸一化法、內標法和外標法。1. 歸一化法如果試樣中所有組分均能流出色譜柱并顯示色譜峰,則可用此法計算組分含量。設試樣中共有n個組分,各組分的量分別為m1,m2,……,mn,則i種組分的百分含量為: 歸一化法的
蛋白質轉印法檢定蛋白質
蛋白質轉印法檢定蛋白質?????蛋白質經SDS-PAGE后,膠片浸入轉印緩沖液,蛋白質可被轉印到硝化纖維紙(nitrocellulose)?上,先經?素洗去SDS,并使蛋白質回?原態抗原性,可使用抗體進?免疫染色?(Towbin?et?al,?1979)。儀器用具:電泳轉印槽?(Hoefer?Tra
淺談常見比色法蛋白質定量分析方法
比色法蛋白質定量 蛋白質通常是多種蛋白質的化合物,比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。 比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等幾種
蛋白質轉印法
蛋白質經SDS-PAGE后,膠片浸入轉印緩沖液,蛋白質可被轉印到硝化纖維紙(nitrocellulose) 上,先經尿素洗去SDS,并使蛋白質回復原態抗原性,可使用抗體進行免疫染色 (Towbin et al, 1979)。儀器用具:電泳轉印槽 (Hoefer Transphor TE 52):轉印