親和色譜的技術特點
親和色譜也稱為親和層析,是一種利用固定相的結合特性來分離分子的色譜方法。親和色譜在凝膠過濾色譜柱上連接與待分離的物質有一定結合能力的分子,并且它們的結合是可逆的,在改變流動相條件時二者還能相互分離。親和色譜可以用來從混合物中純化或濃縮某一分子,也可以用來去除或減少混合物中某一分子的含量。......閱讀全文
親和色譜的技術特點
親和色譜也稱為親和層析,是一種利用固定相的結合特性來分離分子的色譜方法。親和色譜在凝膠過濾色譜柱上連接與待分離的物質有一定結合能力的分子,并且它們的結合是可逆的,在改變流動相條件時二者還能相互分離。親和色譜可以用來從混合物中純化或濃縮某一分子,也可以用來去除或減少混合物中某一分子的含量。
親和色譜法的技術特點
親和色譜法( affinity chromatography),將相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相,利用與固定相不同程度的親和性,使成分與雜質分離的色譜法。
DNA親和層析的技術特點
DNA親和層析是一種檢測DNA與蛋白質相互作用的技術手段,屬于親和層析的一種,利用一些蛋白質能結合特定序列的DNA片段的原理,分離與特定DNA序列有相互作用的蛋白質。
親和色譜法的技術簡介
親和色譜法( affinity chromatography),將相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相,利用與固定相不同程度的親和性,使成分與雜質分離的色譜法。
親和色譜法的技術簡介
利用酶與基質(或抑制劑)、抗原與抗體,激素與受體、外源凝集素與多糖類及核酸的堿基對等之間的專一的相互作用,使相互作用物質之一方與不溶性擔體形成共價結合化合物,用來作為層析用固定相,將另一方從復雜的混合物中選擇可逆地截獲,達到純化的目的。
免疫親和色譜技術是什么
親和色譜固定相上鍵合配位體與被分離的生物活性分子之間的相互作用,可用鎖匙結構的絡合物的生成而表示這個過程。
免疫親和色譜法的技術原理
IAC 是一種利用抗原抗體特異性可逆結合特性的 SPE 技術,根據抗原抗體的特異性親和作用,從復雜的待測樣品中捕獲目標化合物。其原理是將抗體與惰性微珠共價結合,然后裝柱,將含抗原的溶液過免疫親和柱,抗原與固定了的抗體結合,而非目標化合物則沿柱流下,最后用洗脫緩沖液洗脫抗原,從而得到純化的抗原。用適當
免疫親和色譜法-技術的應用
1)免疫萃取(innunoextraction)IAC 技術最簡單的應用就是單純作為樣品的預處理手段,即制備免疫親和柱,也稱為離線(off-line)IAC。現在市場上已有克倫特羅、黃曲霉毒素等多種免疫親和柱出售,使用效果非常好。2)IAC 聯用技術IAC 聯用技術也可稱為在線 IAC。將 IAC
親和色譜柱產品特點及用途介紹
親和色譜柱產品特性:1、柱身為PEEK材質,大大減少非特異性吸附。2、對IgG有很高的動態載量,比傳統的Protein A柱定量范圍更寬。3、色譜柱耐用性好,使用壽命長(取CHO細胞培養上清液連續進樣2000次以上色譜柱性能不變)。4、填料粒徑20微米,機械強度高,可用于IgG的快速分離。(標準流速
免疫親和層析的技術應用和特點
免疫親和層析(Immunoaffinity Chromatography,IAC),或免疫親和色譜,是利用生物體內存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進行分離的方法。?親和層析的應用主要是生物大分子的分離、純化。下面簡單介紹一些親和層析技術用于純化各種生物大分子的情況。
親和素的應用特點
親和素是一種糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每個分子由4個亞基組成,可以和4個生物素分子親密結合。維生素H,分子量244.31,存在于蛋黃中。用化學方法制成的衍生物,生物素-羥基琥珀亞胺酯(biotin-hydroxysuccinimide,BNHS)可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子
親和色譜的工作原理
將一對能可逆結合和解離生物分子的一方作為配基(也稱為配體),與具有大孔徑、親水性的固相載體相偶聯、制成專一的親和吸附劑,再用此親和吸附劑填充色譜柱,當含有被分離物質的混合物隨著流動相流經色譜柱時,親和吸附劑上的配基就有選擇地吸附能與其結合的物質,而其他的蛋白質及雜質不被吸附,從色譜柱中流出,使用適當
親和色譜的特殊應用
親和色譜的用途很廣泛,可以用來從細胞提取物中分離純化核酸、蛋白,還可以從血漿中分離抗體。分離重組蛋白就經常使用親和色譜。通過基因修飾為蛋白加上一些人為的特性,這些特性使蛋白選擇性地與配體結合,從而達到分離的目的。親和色譜的另一大用途是從血漿中分離抗體。
親和色譜的影響因素
1、上樣體積若目標產物與配基的結合作用較強,上樣體積對親和色譜效果影響較小。若二者間結合力較弱,樣品濃度要高一些,上樣量不要超過色譜柱載量的5%~10%。(這個載量是指色譜柱所吸附的配體的量)2、柱長親和柱的長度需要根據親和介質的性質確定。如果親和介質的載量高,與目標產物(目標物)的作用力強,可以選
關于親和色譜的概述
20世紀初,俄國植物學家茨維特(Tswett)首次提出色譜法。他把碳酸鈣粉末裝到玻璃管中,將植物葉子的石油醚萃取液作為樣品倒入管內,然后再用石油醚自上而下洗脫。隨著洗脫的進行,植物葉子中的各種色素向下移動逐漸形成一圈圈的色帶,茨維特將這種色帶分離過程稱為色譜(Chromatography),所用
親和色譜的相關概述
20世紀初,俄國植物學家茨維特(Tswett)首次提出色譜法。他把碳酸鈣粉末裝到玻璃管中,將植物葉子的石油醚萃取液作為樣品倒入管內,然后再用石油醚自上而下洗脫。隨著洗脫的進行,植物葉子中的各種色素向下移動逐漸形成一圈圈的色帶,茨維特將這種色帶分離過程稱為色譜(Chromatography),所用
親和色譜的載體選擇
用于親和色譜的理想載體應具有下列特性:⑴不溶性:不溶于水;⑵滲透性:疏松網狀結構,容許大分子自由通過;⑶有一定硬度,最好為均一的珠狀;⑷具有大量可供反應的化學基團,能與大量配基共價連接;⑸非特異性吸附能力極低;⑹能抗微生物和酶的侵蝕;⑺有較好的化學穩定性;⑻親水性。選擇配基根據對純化大分子的特異性的
親和色譜配基的選擇
純化生物大分子的配基(ligand)可以選小的有機分子,也可以選天然的生物高分子作理想的配基,它首先必須對欲純化的大分子具有很高的親和力。另外這些配基必須具備可修飾的基團,而且通過這些基團與載體形成共價鍵。這些共價鍵的形成不致于嚴重地影響配基與欲純化蛋白質的親和力。用于親和層析的配基有酶的底物、酶的
親和色譜法
親和色譜法( affinity chromatography),將相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相,利用與固定相不同程度的親和性,使成分與雜質分離的色譜法。
親和色譜法
一、基本理論(一)原理 在生物體內,許多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有與某些相對應的專一分子可逆結合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、RNA和其互補的DNA等,都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結合能力稱為親和力,根據生物分子間親和吸附和解離的原理,建立起來的
親和色譜法
親和色譜法( affinity chromatography),將相互間具有高度特異親和性的二種物質之一作為固定相,利用與固定相不同程度的親和性,使成分與雜質分離的色譜法。中文名:親和色譜法外文名:affinity chromatography所屬學科:生物應用領域:實驗例如利用酶與基質(或抑制劑)
柱色譜技術的技術特點
柱層析技術(Column chromatography) 又稱柱色譜技術,主要原理是根據樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數不同,經多次反復分配將組分分離開來。
逆流色譜技術的特點
1.逆流色譜不用固態支撐體,完全排除了支撐體對樣品組分的吸附、玷染、變性、失活等不良影響。所以,能避免不可逆吸附所造成的溶質色譜峰拖尾現象能實現很高的回收率。例如,對于黃酮等易被填料吸附的物質的分離與制備就具有明顯的優勢。 2.逆流色譜的分配分離是在旋轉運動中完成的,兩相溶劑都被劇烈振動的離心
置換色譜的技術特點
置換色譜(displacement chromatography) 作為一種非線性色譜技術, 是指樣品輸入色譜柱后, 用一種與固定相作用力極強的置換劑(disp lacer) 通入色譜柱, 去替代結合在固定相表面的溶質分子。樣品在置換劑的推動下沿色譜柱前進, 使樣品中各組分按作用力強弱的次序, 形成
簡述親和色譜的特殊應用
親和色譜的用途很廣泛,可以用來從細胞提取物中分離純化核酸、蛋白,還可以從血漿中分離抗體。分離重組蛋白就經常使用親和色譜。通過基因修飾為蛋白加上一些人為的特性,這些特性使蛋白選擇性地與配體結合,從而達到分離的目的。親和色譜的另一大用途是從血漿中分離抗體。
關于免疫親和色譜的簡介
生物學名詞,指免疫親和色譜是指利用抗體或者與抗體相關的材料作為固定相的色譜。 抗體對抗原性物質的選擇結合,使該技術越來越多地應用于生物物質以及非生物物質的分離、純化和分析。與HPLC結合的免疫親和和色譜稱為高效免疫親和色譜。
影響親和色譜的因素介紹
1、上樣體積 若目標產物與配基的結合作用較強,上樣體積對親和色譜效果影響較小。若二者間結合力較弱,樣品濃度要高一些,上樣量不要超過色譜柱載量的5%~10%。(這個載量是指色譜柱所吸附的配體的量) 2、柱長 親和柱的長度需要根據親和介質的性質確定。如果親和介質的載量高,與目標產物(目標物)的
親和色譜法原理
在生物體內,許多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有與某些相對應的專一分子可逆結合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、RNA和其互補的DNA等,都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結合能力稱為親和力,根據生物分子間親和吸附和解離的原理,建立起來的色譜法稱親色譜法。親和色譜
親和色譜法簡介
一、基本理論(一)原理:在生物體內,許多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有與某些相對應的專一分子可逆結合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、RNA和其互補的DNA等,都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結合能力稱為親和力,根據生物分子間親和吸附和解離的原理,建立
色譜分析技術(高壓液相色譜、親和色譜法和吸...(二)
二、易出現的問題(一)渦流擴散(Eddy diffusion)流動相碰到較大的固體顆粒,就像流水碰到石頭一樣產生渦流。如果柱裝填得不均勻,有的部分松散或有細溝,則流動相的速度就快;有的部位結塊或裝直緊密則流就慢,多條流路有快有慢,就使區帶變寬。因此,固相載體的顆粒要小而均勻,裝柱要松緊均一,這樣渦流