蛋白質在食品中形成凝膠的機制
蛋白質形成凝膠的機制和相互作用至今還沒有完全研究清楚，但有研究表明蛋白質形成凝膠有兩個過程，首先是蛋白質變性而伸展，而后是伸展的蛋白質之間相互作用而積聚形成有序的蛋白質網絡結構。 影響蛋白質凝膠形成的因素有： （1）蛋白質的濃度：蛋白質溶液的濃度越大越有利于蛋白質凝膠的形成，高濃度蛋白質可在不加熱、與等電點相差很大的pH 條件下形成凝膠。 （2）蛋白質的結構：蛋白質中二硫鍵含量越高，形成的凝膠的強度也越高，甚至可以形成不可逆凝膠，如卵清蛋白，β-乳球蛋白。相反含二硫鍵少的蛋白質可形成可逆凝膠，如白明膠等。 （3）添加物：不同的蛋白質相互混合，可促進凝膠的形成，將這種現象稱為蛋白質的共凝膠作用。在蛋白質溶液中添加多糖，如在帶正電荷的明膠與帶負電荷的褐藻酸鹽或果膠酸鹽之間通過離子相互作用形成高熔點凝膠。 （4）pH：pH 在pI 附近時易形成凝膠。......閱讀全文
蛋白質凝膠電泳凝膠的制備
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將蛋白質樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS)以及硫基乙醇一起加熱，使蛋白質變性，多肽鏈內部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈考疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝膠中向正極遷移。不同
蛋白質凝膠電泳凝膠的制備
蛋白質凝膠電泳通常用于（1）分析分子生物學、遺傳學和生物化學（2）制備技術（3)采用某些方法（如質譜(MS)、聚合酶鏈式反應(PCR)、克隆技術、DNA測序或者免疫印跡）檢測之前部分提純分子。實驗方法原理將蛋白質樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS)以及硫基乙醇一起加熱，使蛋白質變性，多肽鏈內部
蛋白質凝膠電泳凝膠的制備
【材料與試劑】（1）30%的丙烯酰胺：分別稱取29g 丙烯酰胺，1g N,N -亞甲雙丙烯酰胺加溫熱的去離子水60ml，加熱至37℃溶解，補加水至終體積為100ml,過濾，即配成30%（w/v）丙烯酰胺貯存溶液。丙烯酰胺和雙丙烯酰胺在貯存過程中緩慢轉變為丙烯酸和雙丙烯酸，這一脫氨基反應是光催
蛋白質凝膠電泳凝膠的制備
【材料與試劑】（1）30%的丙烯酰胺：分別稱取29g 丙烯酰胺，1g N,N -亞甲雙丙烯酰胺加溫熱的去離子水60ml，加熱至37℃溶解，補加水至終體積為100ml,過濾，即配成30%（w/v）丙烯酰胺貯存溶液。丙烯酰胺和雙丙烯酰胺在貯存過程中緩慢轉變為丙烯酸和雙丙烯酸，這一脫氨基反應是光催化或
蛋白質凝膠電泳凝膠的制備方法
【材料與試劑】（1）30%的丙烯酰胺：分別稱取29g 丙烯酰胺，1g N,N -亞甲雙丙烯酰胺加溫熱的去離子水60ml，加熱至37℃溶解，補加水至終體積為100ml,過濾，即配成30%（w/v）丙烯酰胺貯存溶液。丙烯酰胺和雙丙烯酰胺在貯存過程中緩慢轉變為丙烯酸和雙丙烯酸，這一脫氨基反應是光催化或堿催
蛋白質分離和分析——凝膠蛋白質染色
實驗步驟?基 本 方 案 1 考馬斯亮藍染色檢測范圍為〇.3?lMg 每蛋白質條帶。材 料（帶 V 項 目 見 附 錄 1)聚丙烯酰胺凝膠（單 元 12. 3)考馬斯亮藍、銀染用固定液考馬斯亮藍染液甲醇/乙酸脫色液7 % (V /V ) 水乙酸Whatman 3M M 濾 紙（可選）干 膠 儀（可選
凝膠層析法分離蛋白質
原理 介紹層析的概念 所謂層析，就是利用樣品中各組成成分的理化性質的差異，使各組分以不同程度分布在固定相和流動相兩相中，由于各組分隨流動相前進的速率不同，從而把它們分離開來的技術。這些物理特性包括分子的大小、形狀、所帶電荷、揮發性、溶解性及吸附性質等。層析系統的必要組分有：
凝膠層析法分離蛋白質
一．目的1．了解層析技術的基本原理；2．初步掌握分子篩層析的原理和操作方法。 二．原理 介紹層析的概念 所謂層析，就是利用樣品中各組成成分的理化性質的差異，使各組分以不同程度分布在固定相和流動相兩相中，由于各組分隨流動相前進的速率不同，從而把它們分離開來的技術。這些物理特性包括分子的大小
蛋白質形成凝膠的原因
由于蛋白質分子較大，在1~100nm之間，為膠體濃液，所以當其水分降低到一定程度時，其會變成半固態的凝膠。溶膠為液體，具有溶液的性質，而凝膠為半固態。
蛋白質凝膠過濾層析實驗
凝膠過濾層析（也叫分子篩）是利用具有多孔網狀結構的顆粒的分子篩作用，根據被分離樣品中各組分相對分子質量大小的差異進行分離的技術。 凝膠過濾層析（GF）法又稱為排阻層析或分子篩方法，主要是根據蛋白質的大小和形狀，即蛋白質的質量進行分離和純化。層析柱中的填料是惰性的多孔網狀結構物質，多是交聯的聚糖
凝膠層析法(凝膠過濾)脫鹽和分離蛋白質1
原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所需時間
凝膠層析法(凝膠過濾)脫鹽和分離蛋白質2
（3）在開始收集洗脫液的同時檢查蛋白質是否已開始流出。為此，由每支收集管中取出1滴溶液置于黑色比色磁盤中，加入1滴20%磺基水楊酸，若呈現白色絮狀沉淀即證明已有蛋白質出現，直到檢查不出白色沉淀時，停止收集洗脫液。（4）由經檢查含有蛋白質的每管中，取1滴溶液，放置在白色比色盤孔中，加入1滴奈氏試劑，若
凝膠層析法(凝膠過濾)脫鹽和分離蛋白質3
灌注凝膠時要求將均勻的凝膠一直加到所需柱床高度，不能時斷時續，否則將出現分層或“紋路”等毛病。若中途出現這些現象，可以用玻璃棒將已形成的柱床逐步攪起，直至出毛病的部分再讓凝膠重新沉降或繼續加入攪勻的凝膠懸液。若在灌好膠后才發現“紋路”、分層等現象時，要重新裝柱，以免影響層析效果。在做大型的凝膠柱時，
蛋白質凝膠色譜儀分類
蛋白質凝膠色譜儀分類有多種。1、按分離目的可分：蛋白質凝膠實驗室色譜儀和蛋白質凝膠工業色譜儀。2、按功能可分：蛋白質凝膠分析色譜儀和蛋白質凝膠制備色譜儀。3、按結構可分：臺式蛋白質凝膠色譜儀和落地式蛋白質凝膠色譜儀。4、按分離規模可分：微型蛋白質凝膠色譜儀、小型蛋白質凝膠色譜儀和大型蛋白質凝膠色譜儀
凝膠中蛋白質的洗脫實驗
SDS-PAGE 在確定樣品中多肽的數量和大小方面已被證明是極有用的分析方法。若能熟練運用的話, 它還具有分離許多大小不一的單體蛋白質的能力。許多人在凝膠電泳應用的早期希望可以利用凝膠的高分辨率特性來獲得小量的純凈蛋白質。實驗步驟一、通過擴散來洗脫凝膠中的蛋白質將 SDS 從蛋白質中移除的早期方法由
蛋白質凝膠染色法實驗
實驗步驟總蛋白質的檢測1. 總蛋白質色度法染色簡便的目視檢測、相對簡單的使用及廣大熟悉方法的用戶基礎群，使得考馬斯亮藍(C B B )—直是最普遍使用的總蛋白質凝膠染色劑。如需要比考馬斯亮藍染色更高的檢測敏感度，那么銀染法是可選擇的色度方法。如果需要對切下的蛋白質進行質譜分析，則首選不會引入共價蛋白
蛋白質凝膠染色法實驗
實驗步驟 總蛋白質的檢測 1. 總蛋白質色度法染色 簡便的目視檢測、相對簡單的使用及廣大熟悉方法的用戶基礎群，使得考馬斯亮藍(C B B )—直是最普遍使用的總蛋白質凝膠染色劑。如需要比考馬斯亮藍染色更高的檢測敏感度，那么銀
凝膠層析法分離蛋白質原理
所謂層析，就是利用樣品中各組成成分的理化性質的差異，使各組分以不同程度分布在固定相和流動相兩相中，由于各組分隨流動相前進的速率不同，從而把它們分離開來的技術。這些物理特性包括分子的大小、形狀、所帶電荷、揮發性、溶解性及吸附性質等。層析系統的必要組分有： a. 固定相，可以是一種固體、凝膠或固定
凝膠中蛋白質的洗脫實驗
一、通過擴散來洗脫凝膠中的蛋白質將 SDS 從蛋白質中移除的早期方法由 Weber 和 Kutter(1971) 發表，但當用于微量的蛋白質時，這個方法既麻煩又會造成大部分蛋白質的損失。這一領域較多的早期方法已經發表（HagerandBurgess,1980)，但卻需要重新討論 (butbear
凝膠中蛋白質的洗脫實驗
實驗步驟 一、通過擴散來洗脫凝膠中的蛋白質 將 SDS 從蛋白質中移除的早期方法由 Weber 和 Kutter(1971) 發表，但當用于微量的蛋白質時，這個方法既麻煩又會造成大部分蛋白質的損失。 這一領域較多的早期方法已經發
用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析—凝膠蛋白質激酶分析
試劑、試劑盒Tris-HClDTT鹽酸胍尿素激酶分析緩沖液儀器、耗材SDS-PAGE實驗步驟1. 準備下列材料：SDS-PAGE 要用到的所有試劑50 mmol/L Tris-HCl，室溫（pH 8.0)，1 mmol/L DTT6 mol/L 鹽酸胍，50 mmol/L Tris-HCl，室溫（p
凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質
（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所
凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質
（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所
蛋白質凝膠染色法實驗（四）
(3) 用 10% 〇 //V ) 甲醇、7 % ( V /V ) 乙酸進行簡單的凝膠脫色。利用基于微波爐的方案可以加快染色過程的進行。 SYPRO R uby 蛋白質凝膠染料具有相對較高的消光系數和量子產率，因此它十分亮眼, 化學穩定性和光穩定性都很高。光譜的激發可借助紫外線或是藍光光源;
蛋白質凝膠染色法實驗（二）
關鍵步驟通常如下所述。(1) 固定凝膠，以固定蛋白質條帶，并移除凝膠中的干擾物質, 如 S D S 、緩沖液和鹽，這些物質會結合銀并造成背景染色。(2) 用能夠結合蛋白質并提高銀結合能力的物質, 或是能夠干擾剩余未結合的銀造成的背景染色的物質來孵育凝膠。總之，這些各種各樣的方法都和敏化作用有關。(3
凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質
（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所
蛋白質技術專題：凝膠過濾層析實驗
凝膠過濾層析（gel filtration chromatography）法又稱排阻層析或分子篩方法，主要是根據蛋白質的大小和形狀，即蛋白質的質量進行分離和純化。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網狀結構物質，多是交聯的聚糖類物質，使蛋白質混合物中的物質按分子大小的不同進行分離。實驗方法蛋白質的凝膠過濾
蛋白質凝膠染色法實驗（一）
總蛋白質的檢測1. 總蛋白質色度法染色簡便的目視檢測、相對簡單的使用及廣大熟悉方法的用戶基礎群，使得考馬斯亮藍(C B B )—直是最普遍使用的總蛋白質凝膠染色劑。如需要比考馬斯亮藍染色更高的檢測敏感度，那么銀染法是可選擇的色度方法。如果需要對切下的蛋白質進行質譜分析，則首選不會引入共價蛋白
蛋白質凝膠染色法實驗2
2. 總蛋白質熒光法染色熒光染色法結合了檢測靈敏度 (可與銀染法媲美) 與染色流程簡便性 (與考馬斯亮藍染 色 或 Z n?2+?反染法相同），且其線性定量范圍較比色法大 10?100 倍 。檢測依賴于儀器,需要一個單色激發光源、能將波長較長的發射光從波長較短 (也更亮）的激發光中分離出來的選擇性光
蛋白質凝膠染色法實驗（五）
磷 蛋 白 的 檢 測作為基本的細胞信號機制, 指定氨基酸殘基的可逆磷酸化作用的重要性已無需爭辯。當前磷蛋白染料具有受ZL保護的構型，即磷酸基結合部分共價連接于熒光團。檢測的方式是選擇性結合磷酸化的氨基酸，但是沒有熒光增強作用。從某種程度上講, 許多可溶的熒光復合物都可作為總蛋白質染色劑