用PCR來制備編碼隨機肽的雙鏈DNA文庫實驗
使用合成的寡核苷酸構建文庫時，PCR 有兩個重要的作用。第一，用與特定側翼序列退火的引物來擴增文庫，僅用少量的不同模板，就可以得到大量的 PCR 產物。第二，若要產生文庫 DNA 的復雜互補鏈，PCR 合成法是有效的方法。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒限制性內切酶和緩沖液滅菌雙蒸水Tris-HCl生物素標記的 PCR 引物儀器、耗材鏈霉抗生物素蛋白磁性珠瓊脂糖凝膠電泳所需的試劑和設備實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑滅菌雙蒸水（ddH20)10 mmol/LTris-HCl，pH8.02. 酶和酶緩沖液限制性內切酶和緩沖液（見第 9 步）10XVent 緩沖液VentDNA 聚合酶3. 核酸和寡核苷酸生物素標記的 PCR 引物，長度至少 15bp,5'末端進行了生物素修飾（見圖 26-1)。編碼 12 個氨基酸的 NNK 庫。庫的設計如圖 26-1(a) 所示。合成的鏈含......閱讀全文
用－PCR－控制基因組－DNA－文庫的質量實驗
在該方案中，用限制性內切酶的混合物處理人類基因組 DNA(內切酶混合物的識別位點為 4bp)，產生大概 50?500bp 的片段。最終使用這一類型的表達文庫，是通過利用表型的和生化的篩選方法，分離編碼功能多肽或蛋白片段的基因片段。用KlenowDNA 聚合酶處理后，基因組 DNA 片段成為平末端，然
用－PCR－控制基因組－DNA－文庫的質量實驗
試劑、試劑盒?ddH20Vent 緩沖液Vent DNA 聚合酶 dNTP質粒 DNAPCR 引物儀器、耗材?瓊脂糖凝膠電泳所需的試劑和設備熱循環儀實驗步驟?一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ddH202. 酶和酶緩沖液10X Vent 緩沖液Vent DNA 聚合酶3. 核酸和寡核苷酸dNTP，各
用－PCR－控制基因組－DNA－文庫的質量實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ddH20 Vent 緩沖液 Vent DNA 聚合酶 dNTP 質粒 DNA PCR 引物
用－PCR－來制備編碼隨機肽的雙鏈－DNA－文庫實驗
使用合成的寡核苷酸構建文庫時，PCR 有兩個重要的作用。第一，用與特定側翼序列退火的引物來擴增文庫，僅用少量的不同模板，就可以得到大量的 PCR 產物。第二，若要產生文庫 DNA 的復雜互補鏈，PCR 合成法是有效的方法。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒限制
用－PCR－來制備編碼隨機肽的雙鏈－DNA－文庫實驗
試劑、試劑盒?限制性內切酶和緩沖液滅菌雙蒸水Tris-HCl生物素標記的 PCR 引物儀器、耗材?鏈霉抗生物素蛋白磁性珠瓊脂糖凝膠電泳所需的試劑和設備實驗步驟?一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑滅菌雙蒸水（ddH20)10 mmol/LTris-HCl，pH8.02. 酶和酶緩沖液限制性內切酶和緩沖液
用－PCR－來制備編碼隨機肽的雙鏈－DNA－文庫實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 限制性內切酶和緩沖液 滅菌雙蒸水 Tris-HCl 生物素標記的 PCR 引物 儀器、耗材
基于－PCR－的－DNA－文庫篩選實驗方法
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 PCR 混合物 PCR 引物寡核苷酸 雜交寡核苷酸 PCR 正對照 PCR 主要混合物 蒸餾水
基于－PCR－的－DNA－文庫篩選實驗方法
試劑、試劑盒PCR 混合物PCR 引物寡核苷酸雜交寡核苷酸PCR 正對照PCR 主要混合物蒸餾水儀器、耗材瓊脂糖凝膠電泳設備實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑蒸餾水2. 酶和酶緩沖液PCR 混合物（可以放在一起冰凍），對于 lml 反應，包括：200nmol 的各種 dNTP;1XVent 溶
基于－PCR－的－DNA－文庫篩選實驗方法
試劑、試劑盒 PCR 混合物PCR 引物寡核苷酸 雜交寡核苷酸PCR 正對照PCR 主要混合物蒸餾水儀器、耗材 瓊脂糖凝膠電泳設備實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑蒸餾水2. 酶和酶緩沖液PCR 混合物（可以放在一起冰凍），對于 lml 反應，包括：200nmol 的各種 dNTP;1XVe
用－PCR－對一個隨機多肽－DNA－文庫的質量進行控制實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ddH20 Vent 緩沖液 Vent DNA 聚合酶 dNTP 引物 質粒 DNA
用－PCR－對一個隨機多肽－DNA－文庫的質量進行控制實驗
該方案中，用 PCR 分析由質粒載體編碼的隨機多肽文庫。該文庫是由連接反應的產物轉化細菌后得到的，方案 2 已經介紹過，然后再用標準的程序對質粒進行擴增和純化。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒ddH20Vent 緩沖液Vent DNA 聚合酶dNTP引物質粒
用－PCR－對一個隨機多肽－DNA－文庫的質量進行控制實驗
試劑、試劑盒 ddH20Vent 緩沖液Vent DNA 聚合酶dNTP引物質粒 DNA儀器、耗材 瓊脂糖凝膠電泳所需的試劑和設備熱循環儀實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑ddH202. 酶和酶緩沖液10X Vent 緩沖液Vent DNA 聚合酶3. 核酸和寡核苷酸dNTP，各 20 mm
建立隨機重疊DNA插入文庫實驗
下面的方案描述了鳥槍法測序的起始步驟，從靶 DNA 的剪切到用 M13 噬菌體載體構建 DNA 片段文庫，也包括斷裂靶 DNA 的兩種方法--超聲法和噴霧法，以及用 DNA 聚合酶修復片段末端的技術要點。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W.拉塞爾。試劑、
建立隨機重疊DNA插入文庫實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙酸銨 ATP 乙醇 甘油 蒸餾水 IPTG MgCl2 NaCl 酚
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗可用于：（1）體外診斷；（2）體內治療等。實驗方法原理SELEX 技術除了可以使用 RNA 文庫以外，還可以使用單鏈 DNA 文庫進行篩選。單鏈 DNA 形成高級結構的豐富性也足夠用于對許多靶分子的篩選，而且 DNA 文庫具有更好的穩定性，操作也相對簡便。實驗材料3
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 SELEX 技術除了可以使用 RNA 文庫以外，還可以使用單鏈 DNA 文庫進行篩選。單鏈 DNA 形成高級結構的豐富性也足夠用于對許多靶分子的篩選，而且 DNA 文庫具有更好的穩定性，操作也相對簡便。
單鏈DNA文庫的SELEX篩選實驗
實驗方法原理 SELEX 技術除了可以使用 RNA 文庫以外，還可以使用單鏈 DNA 文庫進行篩選。單鏈 DNA 形成高級結構的豐富性也足夠用于對許多靶分子的篩選，而且 DNA 文庫具有更好的穩定性，操作也相對簡便。實驗材料 3' 引物鏈親和素磁珠儀器、耗材 電泳儀PCR 儀離心機凝膠成像儀
利用λ噬菌體文庫篩選－DNA－結合蛋白實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 ATP 結合緩沖液 變性溶液 二硫蘇糖醇 EDTA 乙醇激酶 連接酶緩沖液 酚 氯
利用λ噬菌體文庫篩選－DNA－結合蛋白實驗
可利用合成雙鏈寡核苷酸篩選構建于λ噬菌體的 cDNA 表達文庫，以鑒定與特異 DNA 結合蛋白質相對應的克隆（Singhetal.1988,Vinsonetal.1988)。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。試劑、試劑盒ATP結合緩沖液變性溶
利用λ噬菌體文庫篩選－DNA－結合蛋白實驗
試劑、試劑盒 ATP結合緩沖液變性溶液二硫蘇糖醇EDTA乙醇激酶 連接酶緩沖液酚氯仿篩選緩沖液SDS醋酸鈉TET4 噬菌體 DNA 連接酶T4 噬菌體多核苷酸激酶合成的寡核苷酸[a-32P]ATP非變性聚丙烯酰胺凝膠儀器、耗材 烤盤結晶皿平頭鑷子裝有防水黑墨水注射器硝酸纖維素濾膜Sephadex G
基因組DNA文庫構建必備實驗技巧
基因組DNA文庫用途十分廣泛，如用于人類及動植物基因組學研究，基因表達調控研究，分析、分離特定的基因片段等。通常情況下，基因組文庫構建的基本流程可以歸為四大步驟：分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞。一、分離基因組DNA（gDNA） 毫無
基因組DNA文庫構建必備實驗技巧2
技術支持資料：材料緩沖液和溶液- 堿裂解液I , 4°C50 mM 葡萄糖25 mM Tris-Cl (pH 8.0)10 mM EDTA (pH 8.0)配制堿裂解液I 約100ml，滅菌，保存在四度。- 堿裂解液II，新鮮配置，室溫保存0.2 N NaOH （從10N的NaOH新鮮制備）1% (
基因組DNA文庫構建必備實驗技巧1
基因組DNA文庫用途十分廣泛，如用于人類及動植物基因組學研究，基因表達調控研究，分析、分離特定的基因片段等。通常情況下，基因組文庫構建的基本流程可以歸為四大步驟：分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞。一、分離基因組DNA（gDNA） 毫無
PCR擴增DNA（PCR－Amplify－DNA）實驗原理、材料和操作步驟
【實驗原理】聚合酶鏈反應（polymerasechainreaction，PCR）是一種體外 DNA擴增技術，1985年由Mullis等人創立。該技術能在幾小時的實驗操作中，將人為選定的一段DNA擴增幾百萬倍，具有靈敏度高、特異性強、操作簡便和應用廣泛等優點，目前已成為分子生物學及基因工程中極為
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑dNTP 溶液（包含所有 4 種 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶緩沖液PCR 反應緩沖液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相當產品）3. 核酸和寡核苷酸DNA 樣品（即方案 2 第 16 步中的各消減樣品
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑dNTP 溶液（包含所有 4 種 dNTP，各 10 mmol/L)2. 酶和酶緩沖液PCR 反應緩沖液，10X聚合酶混合液，50X(Advantage2，Clontech，或相當產品）3. 核酸和寡核苷
痘苗DNA檢測實驗——PCR－法
除了 PCR 和 Southern 雜交可以檢測病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 點跡雜交方法檢測在分離的噬斑中的重組病毒。本實驗主要介紹用這3種方法來檢測痘苗DNA。實驗材料貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇
差異－DNA－的－PCR－擴增實驗
在本方案所描述的反應中，差異 DNA 被選擇性地擴增。每個實驗至少應該有 4 個反應：①已消減的檢測 DNA;②未消減的檢測者對照（1-c);③反向消減的檢測 DNA;④反向未消減的對照（2-c)。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑
消減－cDNA－或基因組－DNA－文庫的制備實驗
試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑酶和酶緩沖液核酸和寡核苷酸放射性化合物酚儀器、耗材 熱循環儀水浴箱瓊脂糖凝膠電泳所需的試劑與設備實驗步驟 第1階段：RNA和DNA的分離一次雙向消減，需要總量為2ug的基因組DNA或cDNA。大多數分離RNA和基因組DNA的方法都適用于本實驗（Sambrooketal
消減－cDNA－或基因組－DNA－文庫的制備實驗
一次雙向消減，需要總量為 2ug 的基因組 DNA 或 cDNA。大多數分離 RNA 和基因組DNA 的方法都適用于本實驗（Sambrooketal.1989;ChomczynskiandSacchi1987;Farrell1993)。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試