染色末端的清潔純化實驗
利用 ABIPRISMRigDye 末端化學法進行自動熒光測序是高效率 DN 八序列測定的方法之一。序列梯度是由標準的 Sanger 方法利用熒光標記鏈末端的核苷而產生的。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒乙醇洗脫上樣液儀器、耗材磁性分離裝置平板夾平板架測序反應純化系統實驗步驟一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑用于測序的膠洗脫/上樣液 (見表 9-4)90% 乙酵洗滌液2. 特殊設備MagnaBotⅡ磁性分離裝置（Promega)平板夾 96(Promega)平板架（Promega)3. 其他WizardMagneSil 測序反應純化系統（Promega; 包括 MagneSilGREEN[順磁性顆粒])96 孔板二、方法1. 將 96 孔板裝到平板夾 96 中 [圖 9-10(a)、（b)]。2. 使用平板架 [圖 9-10(c)] 將平板放置在自動機械工作臺上。3. 劇烈振蕩瓶以重懸 M......閱讀全文
引物設計和末端標記實驗
對 SSCP 解析能力和局限性的系統分析揭示靈敏度和片段長度有顯著的相關性。當DNA 長度為 150~200bp 時，突變的檢出率最高。本方案應用了高專一性的放射性同位素，并且包含一個純化步驟用于去除未利用的核苷酸，從而降低了整個反應的放射能量。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，
在凸出末端上連接接頭實驗
實驗材料?T4 噬菌體 DNA 連接酶多聚核苷酸激酶限制性內切核酸酶試劑、試劑盒?ATP乙醇接頭激酶緩沖液苯酚氯仿乙酸鈉TE儀器、耗材?層析設備水浴裝置實驗步驟?一、材料1. 緩沖液和溶液ATP (10 mmol/L)，乙醇，10x 接頭激酶緩沖液，苯酚：氯仿（1:1, V/V），乙酸鈉（3 mol
引物設計和末端標記實驗
試劑、試劑盒 激酶緩沖液MgCl2二硫蘇糖醇牛血清白蛋白ddH20TE 緩沖液EDTA聚核苷酸激酶引物放射性化合物儀器、耗材 放射性化合物離心機和轉子丙烯酸防護板離心管架廢棄物容器蓋革計數器QuickSpin 柱實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑5X 激酶緩沖液0.25mol/LTris-H
在凸出末端上連接接頭實驗
實驗材料T4 噬菌體 DNA 連接酶多聚核苷酸激酶限制性內切核酸酶試劑、試劑盒ATP乙醇接頭激酶緩沖液苯酚氯仿乙酸鈉TE儀器、耗材層析設備水浴裝置實驗步驟一、材料1. 緩沖液和溶液ATP (10 mmol/L)，乙醇，10x 接頭激酶緩沖液，苯酚：氯仿（1:1, V/V），乙酸鈉（3 mol/L,
引物設計和末端標記實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 激酶緩沖液 MgCl2 二硫蘇糖醇 牛血清白蛋白 ddH20 TE 緩沖液 EDTA 聚核苷
實驗室的清潔程序
一、目的：使實驗室保持干凈衛生的狀況，保證檢驗結果的準確。二、適用范圍：臨床免疫實驗室三、操作步驟：1、臨床免疫室分為二個隔開的工作區：一區為手工操作間；二區為儀器室；清潔時用具不可交叉使用。2、實驗所用到的反應管，吸頭等須經高壓處理。實驗中應佩戴一次性手套，用過的加樣器吸頭或其它實驗廢棄物應放入
單克隆抗體的純化實驗——單克隆抗體的純化實驗
1~5 ml/min?的速度上樣于蛋白A-Sepharose柱，用Tris緩沖液洗柱子直至所有的未結合的蛋白都被洗脫，采用A280監測。?3. ?依次用2~3倍柱床體積的檸檬酸緩沖液、乙酸緩沖液液以及甘氨酸·Cl緩沖液連續洗脫結合蛋白，洗脫下的蛋白直接接入裝有中和緩沖液的管中，中和緩沖液的體積應為所
純化DNA實驗_純化質粒（堿裂解法）
實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒LB葡萄糖緩沖液乙酸鉀儀器、耗材離心管實驗步驟1. 單個大腸桿菌克隆接種到 2 ml 含適當抗生素的 LB 中。37℃ 劇烈振蕩孵育 5~8 小時。或者可以培養過夜使飽和。2. 倒 1.5 ml 培養液到已作標記的微量離心管中。把剩下的培養液存放在 4℃。3. 在微量離心
純化DNA實驗_基因組DNA的快速純化
試劑、試劑盒尾部緩沖液蛋白酶 K儀器、耗材離心管玻璃棒實驗步驟第 1 天1. 大約 1.5 cm 長的尾部活檢樣品放在一個 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部緩沖液的小離心管中，加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K，在 55℃ 振搖溫育過夜。尾部緩沖液（配 25 ml）50 mmol/L
IgG抗體純化實驗
雖然親和層析法是進行特異性抗體純化的首選，然而有時這種純化方式卻非必需，或者無法實施進行。在大多數錆況下，運鐵蛋白可發生共沉淀或共純化，能用凝膠濾過層析去除之。實驗材料抗體試劑、試劑盒SAS儀器、耗材透析膜離心機實驗步驟1. ?于4℃不斷攪拌下，往2體積的含有IgG的混合物中，逐滴加入1體枳pH7.
PCR－產物純化實驗
介紹一個采用 AmiconMicrocon-PCR 濾件（Millipore) 的方法，有效地去除冗余dNTP 和引物的方法純化 PCR 產物。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒TE 或去離子水PCR 產物儀器、耗材離心機和轉子PCR 濾 件微量離心管實驗步驟
痘苗病毒純化實驗
實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是純化 MVA 病毒，則不能用胰酶消化，也不能用 CEF 細胞或 BHK-21 細胞代替 HeLa 細胞。實驗材料 痘苗病毒儲液HeLa S3 細胞（懸浮培養）試劑、試劑盒 胰酶Tris ? Cl蔗糖儀器、耗材 旋轉
痘苗病毒純化實驗
痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度離心的方法純化。純化的病毒可用于制備痘苗病毒 DNA ，用于不允許存在感染細胞蛋白污染的研究中，同時也可以用作高滴度的病毒儲液。對于大規模的純化（至少 1 L 的培養物），最好的方法是用 HeLa 細胞懸液作為感染的對象，而不要用單層培養的細胞。內容來源于《精編分子生物學
PCR－產物純化實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 TE 或去離子水 PCR 產物 儀器、耗材 離心機和轉子 PCR 濾 件
IgG抗體純化實驗
實驗材料 抗體試劑、試劑盒 SAS儀器、耗材 透析膜離心機實驗步驟 1. ?于4℃不斷攪拌下，往2體積的含有IgG的混合物中，逐滴加入1體枳pH7.0的SAS溶液。加完后置于4℃不間斷地攪拌此混合物2~4 h以形成沉淀。2 000 g 離心20 min。?2. ?用預冷的33% SAS溶液在漩渦混合
PCR－產物純化實驗
試劑、試劑盒 TE 或去離子水PCR 產物儀器、耗材 離心機和轉子PCR 濾 件微量離心管實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液TE(lOmmol/L Tris-HCl，lmmol/L EDTA，pH7.5) 或去離子水2. 核酸和寡核苷酸待測序的 PCR 產物3. 離心機和轉子帶有固定傾角轉子的小型
痘苗病毒純化實驗
大規模純化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是純化 MVA 病毒，則不能用胰酶消化，也不能用 CEF 細胞
姐妹染色單體分化染色實驗
實驗概要本文介紹了姐妹染色單體分化染色法(Sister chromatid differentiation，SCD)的實驗原理、操作步驟及注意事項等。實驗原理姐妹染色單體分化染色法(Sister ?chromatid ?differentiation，SCD)是20世紀70年代中期發展起來的染色體處
糖類染色實驗——黏液物質染色
實驗方法原理在人體和動物體中能夠分泌黏液物質，依其物質中含有的酸基不同，所以分為中性黏液、酸性黏液和混合性黏液，也可被稱為中性黏多糖、酸性黏多糖和混合性黏多糖，常用 Mowry 阿爾辛藍高碘酸 Shiff 反應（ABPAS）染色方法。實驗材料石蠟組織切片試劑、試劑盒阿爾辛藍 8 GS冰醋酸蒸餾水麝香
姐妹染色單體分化染色實驗
實驗方法原理細胞被培養在含有 5-溴脫氧尿苷（5-Bromodeoxyuridine：BUdR）的培養基中，當細胞在DNA 合成時，BUdR 能作為核苷酸的前體取代胸腺嘧啶核苷（Thymidine：TdR）被摻入到新合成的DNA中。在第一個細胞周期時，由于半保留復制的機制，中期染色體的每條染色單體D
姐妹染色單體分化染色實驗
實驗方法原理 細胞被培養在含有 5-溴脫氧尿苷（5-Bromodeoxyuridine：BUdR）的培養基中，當細胞在DNA 合成時，BUdR 能作為核苷酸的前體取代胸腺嘧啶核苷（Thymidine：TdR）被摻入到新合成的DNA中。在第一個細胞周期時，由于半保留復制的機制，中期染色體的每條染色單體
純化RNA實驗——從組織中純化總RNA
實驗材料組織試劑、試劑盒RNA 抽提緩沖液氯仿實驗步驟1. 從動物取下組織，直接進行第 2 步或在液氮中快速冷凍新鮮解剖的組織。冷凍后的組織可以貯存在 -70℃。2. 組織（0.05~0.3 g）在 2.0 ml RNA 抽提緩沖液中勻漿。3. 每管加 200 μl 氯仿，混合均勻，冰浴 15 分鐘
核酸染色實驗
實驗方法原理 在一般情況下，通過鹽酸水解后使 DNA 殘基分解堿基，然后從碳鍵處打斷糖苷鍵而游離出醛基，再與無色復紅液（Schiff）進行反應，形成紫紅色的復合物（DNA）。常用 Feuhgen-Rossenbeck 染色法（孚爾根染色法）。實驗材料 石蠟組織切片試劑、試劑盒 Schiff 試劑染色
Hoechst染色實驗
Hoechst染色時無需用DAB來顯色，它直接結合細胞的DNA ，經過紫外光激發后發出藍色熒光。試劑、試劑盒Hoechst染料二甲基亞砜染料二苯亞胺甲基水楊酸儀器、耗材熒光顯微鏡水浴鍋烘箱培養箱實驗步驟1. ?用水按1：500稀釋1 mg/ml 的Hoechst 染液至終濃度2 μg/ml。將稀釋染
Hoechst染色實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 Hoechst染料 二甲基亞砜染料 二苯亞胺 甲基
鞭毛染色實驗
實驗方法原理 鞭毛染色的基本原理，是在染色前先用媒染劑處理含使它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進行染色。實驗材料 蘇云金芽孢桿菌假單胞菌金黃色葡萄球菌試劑、試劑盒 硝酸銀鞭毛染色液0.01％ 美藍水溶液儀器、耗材 載玻片蓋玻片凹載玻片無菌水凡士林顯微鏡實驗步驟 1. 菌種的準備 要求用活躍生長
糖類染色實驗
實驗方法原理 糖原由多糖衍化而來，是單純的多糖。糖原易溶于水，所以用特殊的 Carnoy 固定液或無水乙醇直接固定才能較好地保存糖原，常用高碘酸（periodic acid）-Shiff 反應（PAS）染色法。實驗材料 石蠟組織切片試劑、試劑盒 高碘酸蒸餾水堿性復紅鹽酸 焦亞硫酸鈉（偏重亞硫酸鈉）雙
Hoechst染色實驗
試劑、試劑盒 Hoechst染料二甲基亞砜染料二苯亞胺甲基水楊酸儀器、耗材 熒光顯微鏡水浴鍋烘箱培養箱實驗步驟 1. ?用水按1：500稀釋1 mg/ml 的Hoechst 染液至終濃度2 μg/ml。將稀釋染液加于切片上或將玻片浸于染液中，置室溫2 min。2. ?室溫下，在水中洗2 min，晾干
鈣質染色實驗
鈣質沉積于骨組織或病理變化的組織中，多見于組織壞死、動脈粥樣硬化和腫瘤等鈣化的組織。在茜素的作用下，可與鈣形成有色的螯合物（鈣質）成分。實驗方法原理鈣質即鈣化物質，在各種組織中都可以形成鈣質，這種鈣鹽沉積物也可被稱為鈣鹽沉著，形態多樣化，有的呈顆粒狀和片塊狀等。其主要成分為磷酸鈣和碳酸鈣。常用 Da
莢膜染色實驗
實驗方法原理 莢膜是包圍在細菌細胞外的一層粘液狀或膠質狀物質，其成分為多糖、糖蛋白或多肽。由于莢膜與染料的親和力弱不易著色；而且可溶于水，易在用水沖洗時被除去。所以通常用襯托染色法染色，使菌體和背景著色，而莢膜不著色合在菌體周圍形成一透明圈。由于莢膜含水量高。制片時通常不用熱固定，以免變形影響觀察。