配體與活化介質的偶聯實驗
試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液Affi-Gel 10磷酸鈉（50 mmul L）乙醇胺實驗步驟材料磷酸鹽緩沖液（50 mmol/L;PH7.5~8,0)Affi-Gel 10(Bio-Rad Laboratories)磷酸鈉（50 mmul/L），含 NaCl(1mol/L)(PBS)乙醇胺（100 mmol/L)操作程序1) 用 50 mml/L 磷酸緩沖液（pH7.5~8.0) 配制 1~10 mg/ml 的蛋白質（配體) 溶液。此蛋白制備液必須不含其他氨基化合物。因此. 不應用 Tris 緩沖液或含銨鹽的緩沖液。可用的緩沖液有磷酸緩沖液、MES、MOPS 和 HEPES 等。如果蛋白制備液含有其他氨基化合物，可用 0.5mol/L 磷酸緩沖液（pH7.5~8.0) 將其透析掉。留取少量蛋白樣品，供測定偶聯效率用。2)Affi-Gel 10 膠是以異丙醇懸液供應的。使用時必須將異丙醉去掉，以免引起配體蛋白失活。將 Affi-Gel......閱讀全文
生化實驗講義(理論部分)——層析技術（十）
配體與基質偶聯后，通常要測定配體的結合量以了解其與基質的偶聯情況，同時也可以推斷親和層析過程中對待分離的生物大分子吸附容量。配體結合量通常是用每毫升或每克基質結合的配體的量來表示。測定配體結合量的方法很多，下面簡單介紹幾種：1) 差量分析：根據加入配體的總量減去配體與基質偶聯后洗滌出來的量即可大致推
重組G蛋白偶聯受體的純化實驗
實驗步驟 一、引言 天然的整合膜蛋白的量并不充足。因此對其的結構測定和功能分析需要:①重組膜蛋白的生產系統;②能分離得到有活性的膜蛋白（而不是沒有功能、折疊錯誤的膜蛋白）的純化策略。表達并純化原核和真核的膜蛋白在文獻中都有報道。讀者
重組G蛋白偶聯受體的純化實驗
純化受體從概念上可以分成兩步: 第一步用合適的去污劑將受體從膜中提取出來 (增溶）; 第二步使用如常規的親和標簽、與該受體特異結合的配體層析柱、分子排阻色譜和其他方法純化受體。最重要的是，必須注意選擇實驗條件以保持膜蛋白在整個純化過程中處于活性狀態。這一點怎么強調也不過分，因為很多 GPCR—旦被去
DNA－親和介質的制備實驗（二）
寡核苷酸的連接1) 取 10ul 10X 接頭-激酶緩沖液加入 65ul 水中，將 DNA 震蕩溶解于此溶液。2) 加 20ul 20 mmol/L ATP(pH7.0) 及 5ulT4 DNA 連接酶（30Weiss 單位)，得最終反應體積為 100ul。3) 在室溫下孵育≥2 h。若 AP-1
DNA－親和介質的制備實驗（一）
試劑、試劑盒?ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸銨乙醇酚 氯仿氯仿 異戊醇NaOAcT4 DNA連接酶酚異丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸鉀KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶緩沖液TE接頭-激酶
肽適配體的親和力成熟實驗
實驗材料質粒 DNA酵母株試劑、試劑盒Taq 聚合酶10×緩沖液引物dATPdGTPdCTPdTTPMgCl2MnCl2完全極限（CM） 缺失成分培養基和平板Xgal 平板儀器、耗材PCR 管PCR 純化柱自動熱循環器30℃ 培養箱實驗步驟實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他」1. 制備
肽適配體的親和力成熟實驗
實驗方法原理 實驗材料 質粒 DNA酵母株試劑、試劑盒 Taq 聚合酶10×緩沖液引物 dATPdGTP dCTPdTTPMgCl2 MnCl2完全極限（CM） 缺失成分培養基和平板Xgal 平板儀器、耗材 PCR 管PCR 純化柱自動熱循環器 30℃ 培養箱實驗步驟 實驗所需「材料」、「試劑」、「
配體配體相互作用特點
中文名稱配體-配體相互作用英文名稱ligand-ligand interaction定 義泛指不同配體之間的相互作用。如受體上有多個配體結合位點時，一個配體與受體的結合可能影響另一個配體與受體的結合。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），信號轉導（二級學科）
低密度脂蛋白受體的分布與配體
分布：廣泛分布于肝、動脈壁平滑肌細胞、腎上腺皮質細胞、血管內皮細胞、淋巴細胞、單核細胞和巨噬細胞等。配體：ApoB100、ApoE（ApoB/ApoE受體、BE受體）。結合的脂蛋白：LDL（主要），VLDL、β-VLDL、LDL殘基等（含ApoE）。LDL受體和上述脂蛋白結合將它們吞入細胞內，使細胞
親和層析(Affinity－Chromatography)(3)
⑥元素分析：如果配體中含有某種特別的元素，通過元素分析就可以確定配體結合量。⑦放射性分析法：偶聯中加入一定量帶有同位素的配體，通過放射性分析確定配體結合量，這是一種非常靈敏的方法。影響配體結合量的因素很多，包括基質和配體的性質、基質的活化方法及條件、基質和配體偶聯反應的條件等等。例如通常溴化氰活化的
細胞活化與細胞復蘇
1. 收到細胞株包裹時， 請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形， 若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養， 或立即冷凍保存(置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2)。細胞復蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細
蛋白質與溴化氰活化的瓊脂糖結合實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 蛋白質
蛋白質與溴化氰活化的瓊脂糖結合實驗
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒瓊脂糖 4BNaOH溴化氰NaHCO3氨基乙酸乙酸鈉-乙酸磷酸二氫鉀儀器、耗材天平燒瓶螺旋攪拌器布氏漏斗實驗步驟實驗所需「試劑」具體見「其他」1. 制備 CNBr-活化的瓊脂糖 4B以下步驟必須在通風櫥中小心進行。用 3 mol/L NaOH 將瓊脂糖 4B 懸液調整為 p
蛋白質與溴化氰活化的瓊脂糖結合實驗
實驗方法原理 實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 瓊脂糖 4BNaOH溴化氰NaHCO3氨基乙酸乙酸鈉-乙酸磷酸二氫鉀儀器、耗材 天平燒瓶螺旋攪拌器布氏漏斗實驗步驟 實驗所需「試劑」具體見「其他」1. 制備 CNBr-活化的瓊脂糖 4B以下步驟必須在通風櫥中小心進行。用 3 mol/L NaOH 將瓊
表面等離子共振檢測蛋白相互作用實驗
實驗方法原理 實驗材料 CM-5 葡聚糖芯片（BIAcore）配體蛋白靶蛋白試劑、試劑盒 PBS胺-偶聯試劑盒（詳見「其他」）儀器、耗材 BIAcore SPR 設備BIA 評估軟件（point-and-click）實驗步驟 1. 插入一個新的 BIAcore CM-5 葡聚糖芯片。2. 用 PBS
表面等離子共振檢測蛋白相互作用實驗
用 BlAcore 芯片 用 NTA-SAM 芯片 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 CM
配體的定義
配體（ligand，也稱為配基）是一個化學名詞，表示可和中心原子（金屬或類金屬）產生鍵結的原子、分子和離子。一般而言，配體在參與鍵結時至少會提供一個電子。配體扮演路易斯堿的角色。但在少數情況中配體接受電子，充當路易斯酸。
配體的分類
按配體中配位原子的多少，可將配體分為單齒配體和多齒配體。單齒配體：一個配體中只有一個配位原子的配體。如 NH3、H20等。多齒配體：一個配體中有兩個或兩個以上配位原子的配體。如二亞乙基三胺H2NCH2CH2NHCH2CH2NH2( 簡寫為DEN) 和乙二胺四乙酸根（簡寫為EDTA) 。兩可配體：有些
配體的分類
按配體中配位原子的多少，可將配體分為單齒配體和多齒配體。單齒配體：一個配體中只有一個配位原子的配體。如 NH3、H20等。多齒配體：一個配體中有兩個或兩個以上配位原子的配體。如二亞乙基三胺H2NCH2CH2NHCH2CH2NH2( 簡寫為DEN) 和乙二胺四乙酸根（簡寫為EDTA) 。兩可配體：有些
表面等離子共振檢測蛋白相互作用實驗——用－BlAcore－芯片
實驗材料CM-5 葡聚糖芯片（BIAcore）配體蛋白靶蛋白試劑、試劑盒PBS胺-偶聯試劑盒（詳見「其他」）儀器、耗材BIAcore SPR 設備BIA 評估軟件（point-and-click）實驗步驟1. 插入一個新的 BIAcore CM-5 葡聚糖芯片。2. 用 PBS 作為工作液以持續流動
免疫印跡與免疫檢測實驗——親和素生物素偶聯
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒TTBS緩沖液TBS緩沖液過氧化物酶堿性磷酸酶儀器、耗材搖床硝酸纖維素膜尼龍膜實驗步驟1. ?在旋轉搖床或擺動平臺中持續搖動使膜與合適的封閉液平衡。對于硝酸纖維素膜或PVDF膜，需在室溫封閉30~60 min。尼龍膜則需在37℃封閉2 h。2. ?用TTBS溶液（用于硝酸纖
重組G蛋白偶聯受體的純化實驗（二）
3.受體-特異配體親和層析用一般的親和標簽富集受體之后，可能需要第二步純化以分離到純凈、有功能的受體蛋白。這主要是因為：①第一步純化得到的受體還不夠純, 仍有其他污染物。例如，用 XAaxanthineamineC0ngener，拮抗劑）層析柱純化腺苷受體可去除其中的一個主要污染物 (Wei
重組G蛋白偶聯受體的純化實驗（一）
一、引言天然的整合膜蛋白的量并不充足。因此對其的結構測定和功能分析需要:①重組膜蛋白的生產系統;②能分離得到有活性的膜蛋白（而不是沒有功能、折疊錯誤的膜蛋白）的純化策略。表達并純化原核和真核的膜蛋白在文獻中都有報道。讀者可以參考如Grisshammer 和Tate(1995;2003) 及Gri
散射角與介質的大小關系
散射角為光色散時，不同顏色的光因波長不同而各自折射，可見紅光及可見紫光之間的相差角度；波長越長對應介質的折射率越小，你自己可以通過幾何光學和上面的性質來作圖嘛，應該比較簡單吧
鎳催化劑催化的交叉偶聯反應研究取得系列進展
在現代有機反應新方法學的研究領域，以廉價鎳為催化劑催化的交叉偶聯反應是其中的熱點之一，特別是在鈴木偶聯反應方面，已有許多創新性成果見諸報道。但是，目前依然存在大量的科學問題亟待解決：首先，以膦/磷基團活化的酚類化合物為反應物的偶聯反應無法進行;其次，在已報道的其它底物的反應中，絕大多數反應存在催
核酸適配體篩選實驗的難點在哪里
首先它確實是比較難，但是SELEX實驗的難和其它實驗的難是不太一樣的。像做單分子成像，或者某些超靈敏的檢測類的實驗，很多時候受制于我們的客觀條件，受制我們所擁有的儀器設備。可是，核酸適配體的篩選與這些實驗不同，因為SELEX實驗它所用的儀器設備條件其實都非常簡單，幾乎所有的分子生物學實驗室都具備。那
核酸適配體篩選實驗的難點在哪里
首先它確實是比較難，但是SELEX實驗的難和其它實驗的難是不太一樣的。像做單分子成像，或者某些超靈敏的檢測類的實驗，很多時候受制于我們的客觀條件，受制我們所擁有的儀器設備。可是，核酸適配體的篩選與這些實驗不同，因為SELEX實驗它所用的儀器設備條件其實都非常簡單，幾乎所有的分子生物學實驗室都具備。那
親和層析(Affinity－Chromatography)(1)
親和層析(Affinity Chromatography)是利用生物分子間專一的親和力而進行分離的一種層析技術。人們很早就認識到蛋白質、酶等生物大分子物質能和某些相對應的分子專一而可逆的結合，可以用于對生物分子的分離純化。但由于技術上的限制，主要是沒有合適的固定配體的方法，所以在實驗中沒有廣泛的
海貍生物攜新品亮相上海慕尼黑
分析測試百科網訊 2020年11月16日-18日，慕尼黑上海分析生化展在上海新國際博覽中心隆重召開。蘇州海貍生物醫學工程有限公司攜新品亮相展會，海貍生物擁有四大核心技術平臺：磁珠、儀器設備、樣本處理以及生物耗材，本次參展他們帶來了標記免疫與捕獲磁珠IVD“芯片”級原材料、核酸提取磁珠與試劑盒以及
如何選擇層析方法
當目標蛋白的物理特性如分子量、等電點等都不清楚時，可用PAGE電泳方法或層析方法加以測定。分離范圍廣闊的Superose HR適合測定未知蛋白的分子量。用少量離子交換介質在多個含不同pH緩沖液的試管中，可簡單地測出pI， 并確定純化用緩沖液的最佳pH。選擇層析方法在對目標蛋白的特性或樣品成分不太了解